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猪伪狂犬病诊断技术研究进展猪伪狂犬病（porcinepseudorabies，PR）又称Aujeszky氏病，是由疱疹病毒科疱疹病毒甲亚科猪疱疹病毒1型所引起的猪、羊、牛等多种家畜及野生动物的一种以发热、奇痒（猪除外）脑脊髓炎为主要症状的急性传染病。各种年龄的猪均易感。世界上40多个国家均有本病的报道，国内也有大范围的流行，对养猪业造成了严重的经济损失。本文从临床诊断方法、病原学诊断方法、免疫学诊断方法及分子生物学诊断方法四个方面将近年来对猪伪狂犬病的诊断技术研究综述如下：1临床诊断方法猪感染猪伪狂犬病病毒（PRV）后，2周龄以内的哺乳仔猪，病初发热、呕吐、厌食、下痢，精神不振，眼球上翻，视力减退，呼吸困难，呈腹式呼吸；共济失调，倒地后出现四肢呈划水样动作的神经症状；最后衰竭死亡，死亡率达100%。3~4周龄的猪也有上述临床症状，但病程略长，病死率降低，耐过猪常会出现发育受阻。成年猪常为隐性感染，妊娠母猪表现为流产、木乃伊胎、弱仔及呼吸系统症状；公猪表现为繁殖障碍和呼吸系统症状。育肥猪生长受阻。PRV感染猪肾脏有针尖状出血；胃黏膜卡他性炎症，出血；取患病病例的脑和脊髓制成组织切片，苏木素-伊红染色后观察呈弥漫性非化脓性脑膜炎。中枢神经系统出现血管套及胶质细胞坏死；淋巴细胞内有嗜酸性核内包涵体。2病原学诊断方法病毒的分离鉴定（VI）是诊断该病的“黄金标准”。采集病样的脑、扁桃体、肾和脾等组织剪碎后研磨，经灭菌处理且加有抗生素的平衡盐溶液或生理盐水稀释后接种在培养成单层的适宜细胞上，观察直至出现特征性细胞病变。一般情况下，2~5天即可分离到病毒。有病变的细胞用H.E染色，镜检可观察到嗜酸性核内包涵体，也可进一步以电镜等方法鉴定。3免疫学诊断方法3.1检测PRV抗原的免疫学诊断方法3.1.1免疫荧光技术（FA）该法是将抗原或抗体用荧光素进行标记，通过荧光显微镜观察所标记的荧光，从而分析示踪相应的抗体或抗原。黄骏明等（1995）建立的荧光抗体染色技术可以直接检测自然感染、组织培养及实验感染的病料中的PRV，同时还做了阻断试验和RV、HEV、CDV、TGEV、PEDV、BVDV、BEFV等类症的交叉检测实验，证明了该法具有较高的特异性和敏感性。该法目前是我国对猪伪狂犬病快速诊断的一种好办法。3.1.2反向间接血凝（抑制）试验（RPHA/RPHI）RPHA是一种利用抗体致敏红细胞在其相应抗原的作用下，发生红细胞凝集从而来测定抗原的诊断方法。吴平等（1991）通过利用单克隆抗体致敏的绵羊红细胞建立反向间接血凝和血凝抑制试验检测PRV，共计66份样本。该法与血清中和试验（SN）的符合率达94.4%，与VI的符合率为76.5%，RPHA结果准确、操作简便，可取代中和试验作为一种PRV的常规诊断技术。3.1.3单抗夹心ELISA该法是将单抗的特异性与ELISA结合起来，从而使其特异性和敏感性大大提高。苗得园等建立了由单抗介导的检测PRV的单抗夹心ELISA方法，最低病毒检出量为8.9微克/毫升，特异性局。对于自然感染猪及可疑病猪的检出率均达70%以上。该法将特异性单抗和生物素-亲和素系统引入传统的ELISA中，使其特异性和敏感性均得以提高，是一种较好的猪伪狂犬病诊断方法。3.1.4双抗夹心ELISA汪招雄等（2006）在PRV特异性单抗的基础上建立了双抗体夹心间接ELISA方法，检测PRV抗原，灵敏度达0.156微克/毫升。批内和批间变异系数分别为4.1%和6.39%。双抗体夹心间接ELISA法具有敏感性高、特异性强和重复性好及不与其他常见病原体产生交叉反应等特点，对比PCR平行检测了159份临床样本，发现该法比PCR敏感。双抗夹心ELISA检测PRV时，设备要求低，操作简单，是临床诊断和进出口检疫的主要方法。