猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)诊断技术及要点

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）诊断技术及要点目前，在建立有效的预防、控制和消除猪繁殖与呼吸综合征（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS）的方面，国家并没有投资大量的财力和精力，那么，兽医是如何看待PRRS的诊断呢？PRRS是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的母猪繁殖障碍以及各年龄猪呼吸道症状为主要特征的高度接触性传染病，该病在临床上可引发病猪耳部发绀呈蓝紫色，故俗称“蓝耳病”。它是危害全球养猪业的一大疾病，并且给全球养猪业造成巨大经济损失，据估算，PRRS每年对美国养猪业造成的经济损失达6.64亿美元。为了应对PRRS的爆发，最为重要和关键的是开发可靠、准确和快速的诊断方法及程序。随着技术的发展，兽医和养猪行业相关者采取更可靠的诊断技术，以保持养猪业的健康发展为重中之重。选择合适的PRRS诊断方法依据诊断目的选择合适的诊断方法。诊断目的包括：检测猪场猪只感染状况，确定该猪场此病毒流行现状，确定猪场病毒暴露及疫苗使用情况或评估该猪场感染时间。诊断目的的确定，决定了我们应该选择监测什么样的猪只样本，样本的数量及猪只采样。此外，值得注意的是，由于各猪只感染时间可能不同，所以猪只个体感染状况是无法反应全群的感染现状的。选择PRRS诊断的合适样本的大小PRRS诊断时，选择合适大小的样本量，是需要考虑很多因素的。比如，为了检测到至少一个阳性样本，则应考虑猪群的大小、预期的猪群疾病流行情况、检测结果的准确性、检测方法的敏感性和特异性。检测时间也很重要，感染和免疫的不同方面，如病毒血症，病毒隐蔽期，抗体反应期，损伤期等，是在疾病发展的不同时间才出现的。选择正确的组织样本目前，关于诊断，大致分为两个方面：病毒抗原的检测、宿主暴露于病毒情况的检测。病毒抗原的检测，需要收集病毒嗜性组织，如支气管灌洗液、胸液、精液、血液、唾液或环境样本，然而，病毒暴露情况的检测，需要检测血液、唾液或肌肉渗出液中PRRSV抗体情况。因此，诊断组织样本的采集，是要依据很多因素才能确定的，包括特定的检测目的，诊断方法的选择及设备的具备情况。诊断技术在未成功分离PRRSV之前，该病的诊断主要靠病猪典型的临床症状，特征性组织学病理变化，特别是间质性肺炎，当然要排除其它已知能引起猪繁殖障碍和呼吸道症状的病原。目前常根据临床症状、组织病理学变化、病毒的分离鉴定以及血清学方法等结果进行综合诊断：（1）临床诊断：因为PRRSV感染猪只后存在大量的亚临床感染，故临症状是诊断该病的首要条件。但是不同猪群发病后的临床症状有所不同，只有暴发急性PRRS时，临床诊断的意义才更大。（2）组织病理学检查：在未发生继发感染的情况下，感染猪只一般不发生明显肉眼可见的病理变化，此时需要进行组织病理学检查。组织病理学检查主要适用于发病仔猪，对母猪、流产胎儿和育肥猪意义不大。猪感染PRRSV后典型的组织病理学变化是间质性肺炎，在感染猪只中，有时还会见到鼻炎、脑炎和心肌炎等组织病理变化。（3）病毒检测：用于病毒分离的细胞有原代PAM、CL2621和MARC-145。不同的毒株对不同的细胞有所选择，但大多数毒株，特别是从血清中分离病毒都可用原代PAM。根据病毒的培养特性，电镜观察，再综合临床症状及病理学检测即可作出初步诊断。但还需要进行血清学方法和分子生物学方法进行确诊。血清学技术主要包括免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）、间接免疫荧光抗体试验（IFA）、血清中和试验（SN）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳胶凝集试验（LAT）、胶体金标记技术等，其中，IDEXX的ELISA技术是目前应用最广泛的检测PRRSV抗体的方法，间接免疫荧光抗体试验（IFA）和血清中和试验（SN）也经常被用到。常用的分子生物学检测方法主要有反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）、套式PCR技术、实时RT-PCR、核酸探针原位杂交技术（ISH）及序列测定。利用RT-PCR方法可以特异性检测血清、精液和组织中的病毒RNA。ORF5序列测定经常用来进行毒株鉴定和变异分析，且相关的数据库已经建立。公猪的血样或精液，出生仔猪的脐带，断奶仔猪的血样及死猪的组织病料均可用于PRRSV的实验室诊断。近期的研究表明口腔分泌物是血样外的另一样品选择。口腔分泌物是唾液和龈沟液的混合物，其比唾液更接近血样。口咽分泌物的采集方便，安全且对动物没有创伤。基于口咽分泌物的诊断方法包括ELISA，RT-PCR等。为提高检测的敏感性，荧光微球免疫试验可用于检测口腔分泌物和血清中的不同抗原和抗体。在传统的抗体检测中主要检测PRRSV的N蛋白抗体，但一些非结构蛋白，如Nsp1α、Nsp1β、Nsp2和Nsp7亦可作为诊断PRRSV感染的指标。