【李曼大会听课笔记】王琴：猪瘟诊断与净化技术研究

【李曼大会听课笔记】王琴：猪瘟诊断与净化技术研究王琴研究员从猪瘟病原学诊断方法研究；猪瘟抗体检测方法研究；猪瘟防控及净化技术研究三个方面进行了讲解。一、猪瘟病原学诊断方法研究：1.经典方法：（1）动物接种试验（该方法很少使用）；（2）病毒分离技术；（3）荧光抗体检测技术（FAT）/免疫过氧化物酶检测技术（IPT）；（4）抗原捕获ELISA；2.分子诊断技术：（1）RT-PCR技术（诊断和基因分型）；（2）实时荧光定量RT-PCR技术（欧盟猪瘟参考实验室诊断标准）；（3）恒温扩增技术（NASBA，LAMP）；（4）原位杂交技术（ISH）；（5）基因芯片技术。二、猪瘟抗体检测方法研究：1.病毒中和实验：（1）体外病毒中和试验（VNT）：荧光抗体病毒中和试验（NIF）和过氧化物酶联中和试验（NPLA）（国际贸易指定试验）；（2）体内病毒中和试验：猪瘟病毒兔体中和试验和猪瘟病毒猪体中和试验；2.酶联免疫吸附试验（ELISA）：（1）间接ELISA（国际贸易指定试验）；（2）阻断ELISA（国际贸易指定试验）；在敏感性试验方面：通过对田间采集的299份猪瘟阳性血清进行ELISA检测，阻断ELISA为82.6%而间接ELISA敏感性为94.6%，比阻断ELISA高出12%。在特异性试验方面：通过对田间采集的256份猪瘟阴性血清进行ELISA检测，间接ELISA特异性为95.3%；阻断ELISA为97.3%，两者相差不大。上述555份血清均采用荧光抗体中和试验鉴定（单抗）。在符合率试验中，对临床提供的406份血清，两种ELISA符合率为86.07%。将两者不符合的50份血清采用NIF（荧光抗体病毒中和试验）符合检测。结果表明：间接ELISA与NIF符合率为78%,阻断ELISA与NIF符合率为22%。说明阻断ELISA有漏检风险。3.其他常规和新型诊断方法：（1）猪瘟正相间接血凝试验（IHA）；（2）猪瘟抗体免疫金标快速检测试验；（3）琼脂扩散试验（AGP）；（4）免疫芯片技术。4．OIE推荐的猪瘟诊断方法经典方法：病毒分离法，FATandIPT，抗原捕捉ELISA。分子诊断技术：RT-PCR（诊断和基因分型），TaqManReal-timeRT-PCR（欧盟猪瘟实验室诊断标准）抗体诊断技术：荧光抗体病毒中和试验（国际贸易制定试验），过氧化物酶联中和试验（国际贸易制定试验），间接ELISA（国际贸易制定试验）和阻断ELISA（国际贸易制定试验）。三、猪瘟防控与净化技术研究美国仅用16年时间通过疾病控制阶段，降低发病率及消灭猪瘟和防止再次感染四个阶段测地根除了存在一个多世纪的猪瘟。美国猪瘟的根除为全世界动物疫病的消灭梳理了典范。以美国猪瘟的消灭为例，引出中国猪瘟防控及净化的阶段性策略：准备阶段、控制阶段、强制净化阶段、监测阶段和认证阶段；展示了15个示范场实施猪瘟、伪狂犬病净化效果，对某示范场猪瘟强制进化结果为例，说明猪瘟的控制可从更换疫苗、调整免疫程序和加强病原监测等方面进行。在中国完善的理论基础和技术保障的支撑下，只要坚持系统完善的生物安全措施和加强免疫抑制病及其它传染病的综合控制，在我国猪瘟的净化是可行的。其他研究成果1．猪瘟兔化弱毒疫苗不仅为世界上一些国家消灭猪瘟做出了贡献，至今对我国猪瘟控制的基本策略也是有效的。2．我国的实验证实，C株能抵抗基因1.1和基因2.1、2.2亚群的攻击；英国VLA的实验证实能抵抗2.1和2.3亚群的攻击。因此C株能抵抗三个基因群野毒的攻击。3．C株免疫后5天产生坚强的免疫力，与T细胞IFN-gamma的产生有关。4．疫苗的质量依赖于工艺的控制和冷链系统，由于是活疫苗，包括标准种毒、标准的生产细胞、质量控制以及正确的免疫程序。5．正确使用优秀的疫苗，猪瘟是完全能够控制的。指出了我国控制猪瘟存在的问题（免疫失败）：猪瘟持续感染带毒猪，母源抗体对疫苗免疫的影响，免疫程序不科学，部分厂家猪瘟疫苗质量，疫苗运输的冷链系统不完善，多种病原混合的存在，诊断方法不特异。