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全封闭式程序控制自动组织脱水机使用体会首都医科大学附属复兴医院陈伟东组织处理组织固定组织脱水去除组织中的水分和固定剂。组织透明除去脱水剂，使介质浸润组织成分。组织浸蜡使承托介质渗透组织组织固定固定是通过添加剂让组织中所有细胞及细胞外成份迅速死亡，以避免细胞中溶酶体成分的破坏作用，保持离体组织细胞与生活时的形态相似，并防止细菌繁殖所致的腐烂，保存蛋白质与核酸的基本结构。常用的组织固定液10%中性福尔马林。甲醛：甲醛水溶液渗透力强，固定均匀，对组织收缩较少，能保存脂类和类脂体，对脂肪，神经及髓鞘的固定效果很好，但不能保存组织内的尿酸盐类结晶。10%中性福尔马林缓冲固定液可以很好的保存细胞核的形态结构，同时也能够较好的保存细胞内大多数抗原性，特别是对免疫组化、原位杂交、FISH、DNA分析、PCR等染色效果优于普通10%福尔马林及其他各种混合固定液，同时也可避免福尔马林色素的形成，是一种最理想的常规固定液。组织脱水的目的和原则组织经固定后，含有大量水分。组织在透明浸蜡前必须进行脱水，就是用某些溶剂将组织内的水分组建置换出来，以利于透明剂和石蜡的渗入，这个过程称为脱水。1.组织脱水原则之一将组织内水分脱干净但又不使组织过脱水。2.组织脱水原则之二脱水剂自低浓度至高浓度进行。3.外检及尸检、实验动物中的脑组织、淋巴结，有条件时应单独设置脱水程序。4.穿刺小标本最好不要与大组织同时进行脱水，应单独设置脱水程序。5.脱水时间根据脱水剂的功能及脱水剂的新旧程度确定。乙醇：最常用的脱水剂。它具有亲水性，能溶于水和其它有机溶剂，脱水力强，能使组织硬化，并能与媒浸剂二甲苯较好的融合，但容易使组织收缩、变脆。脱水应缓慢的进行，如果组织内外液体的浓度梯度过大，会增加细胞变形的可能性。使用乙醇进行组织脱水通常是由低浓度向高浓度的梯度进行。全自动密闭式组织处理机常用的脱水顺序：75%→95%Ⅰ→95%Ⅱ→100%Ⅰ→100%Ⅱ→100%Ⅲ。组织透明组织脱水后，必须经过一种即能与乙醇相结合，又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用石蜡浸入组织。这种溶剂使组织呈现出不同程度的透明状态，这个过程成为透明。透明这个环节要根据组织块的大小厚薄、液体的新旧和温度来决定透明的时间。二甲苯是最常用的透明剂，使用不当易使组织收缩变脆，二甲苯透明的时间必须控制在1.5小时以内。组织浸蜡组织经过脱水透明后用石蜡、火棉胶、明胶等支持剂浸入组织内，使组织变硬并将组织包裹在内，有利于切片，这个过程称为浸蜡。浸蜡的目的是置换组织中的透明剂，代之石蜡渗入组织内部，把软组织变为硬度合适的蜡块，以便切成薄片。浸蜡的时间要根据组织的类型、大小和温度而定。浸蜡用的石蜡一般用低温蜡，熔点为54-56°C。浸蜡时间可每步50-60分钟，3-4步即可。全自动脱水机是一种真空密闭组织处理装置。在组织处理过程中组织始终在一个缸里，试剂和石蜡不断地从缸里移进和移出，每一步都可专门设定时间、温度、真空以及压力。这个系统的优点是真空和热度适用于每一个阶段,有专门设定的组织处理程序、液体泄露保护和烟雾清除系统，并且处理装置运用报警系统和诊断程序来警醒仪器的故障检查。我科使用的全自动脱水机ShandonExcelsior脱水机樱花VIP6脱水机全自动密闭式脱水机的结构控制面板处理槽试剂柜：固定液瓶、脱水试剂瓶、蜡缸、废蜡缸、冲洗瓶、储备缸、更换试剂瓶。散装试剂系统全自动密闭式脱水机的试剂缸配置ShandonExcelsior福尔马林、酒精、二甲苯、石蜡缸数按比例为2：6：3：3配置。樱花VIP6福尔马林、酒精、二甲苯、石蜡缸数按比例为1：6：3：4配置。酒精梯度设置为：75%→95%Ⅰ→95%Ⅱ→100%Ⅰ→100%Ⅱ→100%Ⅲ。全自动密闭式脱水机的清洗缸配置ShandonExcelsior清洗缸为二甲苯1个、无水乙醇1个、清水1个。樱花VIP6清洗缸为二甲苯1个、无水乙醇1个。机器具有温水冲洗功能。全自动密闭式脱水机的功能全自动组织脱水机是集固定、脱水、浸蜡于一体的现代化机器。1.延时功能2.补液功能3.加温功能4.P/V循环（压力和真空交替）5.混合循环6.自动轮换试剂功能全自动密闭式脱水机的设置脱水机的系统设置:日期和时间设置最大包埋盒数液位安全装置试剂药液的配置：试剂组名称和试剂管理（乙醇比重、运行次数、运行天数、包埋盒数）。全自动密闭式脱水机脱水程序的设置脱水程序的设置大小标本集中处理程序日常脱水程序双休日脱水程序小长假脱水程序日常脱水程序溶液浓度（%）时间设定使用温度/储存温度（°C）P/V循环混合循环中性福尔马林102h35onon乙醇752h乙醇952h乙醇951h乙醇1001h乙醇1001h乙醇1001h二甲苯10min二甲苯20min二甲苯10min石蜡1h56/60on石蜡1h56/60on石蜡1h56/60on石蜡1h56/60on影响处理程序的因素通常过夜处理是最常用的常规处理程序。影响处理程序的因素包括：要求结束的时间、使用的试剂、加热和真空以及组织的大小和数量。脱水时间、温度、P/V循环和混合循环全自动密闭式脱水机是在整个组织处理过程中,组织始终在同一个反应缸里,利用真空和压力试剂和溶化的石蜡不断地从缸里移进和移出。通过启动P/V循环和混和循环，配合温度的设定，可以增强处理强度和缩短处理时间。不要每步脱水剂和透明剂全部P/V循环和混和循环。全自动密闭式脱水机清洗程序设置漂洗程序标准清洗程序延长清洗程序每次组织脱水后清洗组织脱水蓝和包埋盒盖片。充分利用冲洗功能，如遇到组织脱水不佳需要重新脱水的组织，可以使用清洗程序，置换出组织里的石蜡、二甲苯，取出后，冲水，继续下一次的组织脱水过程。全自动密闭式脱水机的液体更换原则与规律1.根据第一缸酒精（浓度低于50%或处理标本数超过1200块）的使用情况决定是否换液。2.充分利用脱水机自带的自动轮换试剂的功能，在组织处理期间同时完成一次试剂的轮换。3.每一次换液组织处理试剂和清洗试剂都同时更换。组织处理试剂固定液全部换新试剂；第一第二缸酒精丢弃，后一缸酒精前移，第一缸加全新75%的酒精，最后一缸加全新无水酒精；二甲苯和石蜡第一缸丢弃，后一缸前移，最后一缸加全新试剂。清洗试剂中二甲苯和无水酒精全部换新试剂。全自动密闭式脱水机的质量控制质量控制的选项酒精比重限度的设定（ShandonExcelsior）包埋盒数量的限定试剂使用限度的设定（试剂使用次数）酒精比重计监测1.比重计监测第一缸酒精浓度；2.需要事先设定一个阈值，当试剂浓度降至这个阈值时，仪器会在下一次脱水过程中完成试剂轮换；在启动轮换前屏幕上会出现提示信息。3.阈值如何定？酒精实际浓度50%为设定值。第一缸乙醇浓度低于50%时必需轮换。70％～75％浓度酒精与组织的渗透压近似，蛋白质脱水、变性凝固。随着酒精浓度的降低，则渗透压降低。当酒精浓度低于50%时，酒精渗透压低于组织渗透压，相当于是低渗溶液，对水的已经没有吸引力了，而不具有脱水作用。包埋盒数量的限定根据使用10余年ShandonExcelsior脱水机的使用记录，我们统计出每一次换液后脱水的标本数，制定出1200块组织为阈值。酒精比重标本数脱水次数1051262885111778411038851143784116778012097工作量小，可以以使用次数（时间）作为更换依据。每个月更换一次试剂。液体使用时间过长，不能保证液体的浓度和纯度，影响脱水效果。清洗试剂更换不及时，造成清洗不彻底，容易堵塞管道。第一缸酒精为什麽要换全新的75%酒精？1.酒精自动轮换后，第二缸酒精换到第一缸，酒精的实际浓度都在90%左右，如果直接进行脱水，组织表面蛋白质明显变性、萎缩和凝固，影响后续脱水剂进入组织内部，造成组织脱水不完全，组织表面干枯变脆，大标本组织中心部位脱水不足。为了满足脱水的需要，第一缸酒精的浓度必需低于80%。而我们为了保证每次换液的一致性，第一缸酒精是用全新的75%酒精。2.为防止堵塞管道和回转阀,固定液和第一缸酒精一定要更换而不是交换，更换这些试剂后应执行温水冲洗，一边溶解沉积在管道和回转阀中的盐分和脂质。制定全自动密闭式脱水机的操作规范1.设定脱水机的脱水程序、清洗程序；2.制定脱水机的操作方法,包括日常脱水的操作步骤和脱水机试剂轮换的具体操作步骤;3.建立脱水机使用登记制度,包括每日使用记录登记表和脱水机液体置换登记表；4.制定脱水机的日常保养与维护制度。脱水机使用记录日期A1比重（标本总数）标本数程序使用次数签名备注樱花VIP6脱水机使用记录ShandonExcelsior脱水机使用记录脱水机液体置换登记表日期使用情况固定液脱水试剂轮换后情况洗夜签名Fix1Fix2A1A6X3W3F1F2F3换前A1比重使用次数10%中性福尔马林10%中性福尔马林实测浓度调整后浓度无水酒精二甲苯石蜡二甲苯无水酒精自来水ShandonExcelsior脱水机液体置换登记表脱水机液体置换登记表日期使用情况固定液换液后试剂情况洗夜签名标本数量使用次数换液前FixA1A6X3W4F1F2A1实测浓度A2实测浓度10%中性福尔马林75%酒精无水酒精二甲苯石蜡二甲苯无水酒精樱花VIP6脱水机液体置换登记表全自动密闭式脱水机的日常维护与保养1.严格执行操作规范,使每个人使用设备都可以做到标准化,减少因误操作而造成的设备故障和对处理组织的不良影响。2.脱水机放置的地方应保持相对恒定，避免阳光直射，通风良好，温度适宜。3.保持设备的干净，经常擦拭检查，保证机器的良好状态。4.选择质量过关的试剂，避免因试剂的原因，造成组织处理出问题。5.配置不间断电源，避免停电造成工作延误及损失。6.设备厂家定期对机器进行系统保养。全自动密闭式脱水机使用过程中遇到的问题1.脱水的问题。防止过脱水。2.机器出现的各种问题。管道堵塞的问题。总结1.加强理论知识的学习,掌握组织处理的原理,对所使用的各种试剂特性有充分的认识。2.对使用设备的功能有清楚的了解，认真阅读设备操作手册，使用前要参加培训，做好设备的日常保养与维护。3.组织前处理很重要，固定与取材的好坏直接影响脱水效果。4.严格执行操作规范，认真填写工作记录单和换液记录单，避免误操作。5.脱水程序的设置不是一成不变的，根据实际工作中的状况，进行调整。6.试剂更换提倡使用设备的自动轮换功能，在一次脱水的过程中完成试剂更换，即减轻了工作量和有毒有害气体对人身体的损害，又做到了标准化。7.充分发挥脱水机功能，配合加温、P/V循环和混和循环，实现小标本的快速脱水。谢谢大家！