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检验科微生物室学习分享目录抗菌药物的作用机制常用抗菌药物简介真菌微生物检验的操作流程2013年CHINET细菌耐药监测情况一.细菌的分类与命名•细菌的分类：1.以细菌的形态和生理生化特征为依据的分类2.用化学分析和核酸分析，以细菌大分子物质（核酸，蛋白质）结构的同源程度进行分类•分类等级：界，门，纲，目，科，属，种•细菌分类系统：国际上普遍采用伯杰分类系统现在使用的是《伯杰鉴定细菌学手册》第9版•革兰氏阴性菌•革兰氏阳性菌临床常见的致病菌•G+：金葡菌、表皮葡萄球菌、α溶血链球菌（草绿色链球菌等）,β型溶血链球菌（A组和B组),非溶血性链球菌、肺炎链球菌、肠球菌属，产单核细胞李斯特菌等。•G--菌:奈瑟球菌、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、洛菲不动杆菌）、假单胞菌属（铜绿假单胞菌和其他）、布鲁菌属、百日咳杆菌、军团菌属，肠杆菌科细菌（大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、变形杆菌属、肠杆菌属、伤寒沙门菌、沙门菌属、志贺菌属、鼠疫杆菌等）、流感嗜血杆菌，脆弱拟杆菌、核酸杆菌，破伤风芽孢杆菌、产气荚膜杆菌、肉毒杆菌、艰难梭菌，弧菌科，结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌。•其他病原微生物：放线菌属、诺卡菌属，立克次体属、支原体属、衣原体属、各种病毒、某些原虫（疟原虫、弓形体等）和各种真菌等。二.细菌微生物检验的一般操作流程•标本的采集与处理•标本的显微镜检查（细菌的形态检查）•细菌的分离培养与接种•细菌的鉴定（生化反应，血清学鉴定等，不常见的细菌会用到细菌自动鉴定仪)•药敏试验•向临床发送报告临床标本采集与处理标本采集的一般原则：1.早期：病程早期，急性期，未使用抗菌药物之前2.无菌：要确保无污染菌3.根据目的菌的特性用不同的方法采集：例如，尿液标本，疑为厌氧菌感染，要用无菌注射器行膀胱穿刺术抽取尿液4.采集适量的标本（血培养瓶大人5-10ml,儿童1-3ml)5.注意自身安全常见标本的采集•血液标本：严格无菌操作，用0.5%的碘伏消毒瓶盖和静脉采血部位（先注入需氧瓶，后注入厌氧瓶），不得放入冰箱，应立即送检。•尿标本：嘱咐病人留取早晨清洁中段尿,留尿前应仔细清洗会阴部，将前段尿排去，中段尿留取约10-20ml，直接排入专用的无菌杯中。•痰标本：（漱口）晨痰为佳，用力咳出呼吸道深部的痰，吐入无菌标本杯。应大于1ml。•粪便标本：采集脓血，粘液部分2-3g,外观无异常的大便应从不同部位取材，放入无菌杯中。标本的处理•标本的处理：对环境敏感的细菌（如脑膜炎奈瑟菌，淋病奈瑟病等应保温并立即送检）。其他标本最好在采集后2h内送检。若不能及时送检，标本应在一定环境下保存，如支气管洗液，心包液，痰，尿等标本应在保存在4℃环境中。标本的显微镜检查•1.不染色细菌标本的检查•2.细菌染色标本的检查：(1)革兰染色：细菌学中最经典，最常用的染色方法，可将所有细菌分为G＋G－（2）抗酸染色：大多数为非抗酸性细菌，所以只针对麻风病，结核病的细菌检查（3）荧光染色：敏感性强，效率高且容易观察细菌的分离培养与接种•培养基的选择1.血平板：适合各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离，都接种此平。2.巧克力血平板：含V和X因子，适合苛养菌的生长，如嗜血杆菌，奈瑟菌，肺炎链球菌等。（大巧添加了万古霉素，抑制了G+菌的生长。3.麦康凯平板：供分离发酵乳糖的革兰氏阴性肠道杆菌。（粪便）4.XLD:主要用于分离志贺氏菌属，亦可用于分离沙门氏菌。（粪便）5.CLED:（胱氨酸乳糖无电解质培养基）:无抑制性，用于泌尿系统致病菌的分离和培养（尿标本的接种）6.罗氏培养基：用于培养结核分枝杆菌。7.营养肉汤：各类标本及细菌的增殖。各类培养基图片各类培养基图片细菌的接种•1平板划线法：一般细菌的接种，及分纯都使用此方法。•2.斜面接种法：用于单个菌落的纯培养，保存或者观察细菌的某些特性。•3.液体接种法•4.涂布接种法：常用于纸片法药物敏感性试验。细菌的鉴定细菌鉴定用到的各类生化反应：1.糖类的发酵试验2.七叶苷水解实验3.吲哚试验4硫化氢试验5.枸橼酸盐试验6.氧化酶试验7.触酶试验8.凝固酶试验等等......抗菌药物敏感性试验•3.E-text法：该方法结合扩散法和稀释法的原理和特点，操作简便如扩散法，但可以同稀释法一样直接定量测出药物对待检菌的MIC。抗菌药物敏感性试验•结果的测量科玛嘉琼脂培养基细菌分布情况•其中：肠杆菌科细菌占所有分离菌株的44.8％，其中最多见者依次为大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、变形杆菌属；不发酵糖革兰阴性杆菌占所有分离菌株的26.7％，其中最多见者依次为不动杆菌属、铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌。［3］2013年中国CHINET耐药监测菌种分布［4］二.肠杆菌科细菌的耐药情况肠杆菌科细菌：大肠埃希菌、克雷伯菌属（肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌）和奇异变形杆菌中产ESBLs菌株的检出率分别为54％、31.8％和16.5％。上述产ESBLs株对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、喹诺酮类，甲氧啶－磺胺甲口恶唑的耐药率均显著高于非产ESBLs株。产酶大肠埃希对环丙沙星、庆大霉素和哌拉西林的耐药率均接近或高于50％。肠杆菌科细菌对３种碳青霉烯类的耐药率仍然较低，不同菌种的耐药率大多在10％以下。［5］2012年中国CHINET碳青霉耐药肠杆菌科细菌的分布特点和耐药性分析•2012年中国CHINT细菌耐药监测网15所医院临床分离的CRE（对亚胺培南、美罗培南和厄他培南中任一种耐药者)，共1499株•分离自门急诊患者138株(9.2％),住院患者1361株（90.8％)不同种属碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌对常用抗菌药物耐药率和敏感率对碳青霉耐药肠杆菌科细菌敏感的相关药物•药敏结果显示多黏菌素类，替加环素、磷霉素和阿米卡星对CRE菌株有良好抗菌活性。根据临床研究资料，上述抗菌药物联合应用的疗效均优于单药治疗。采用的联合给药方案有黏菌素或氨基糖苷类(主要为阿米卡星）联合碳青霉烯类、黏菌素联合替加环素或利福平、氨基糖苷类联合磷霉素。目前在耐药革兰阴性菌菌株不断出现以及新抗菌药物的研发进展缓慢的形势下，一些传统抗菌药物的应用价值得到重新评估，如磷霉素对MRSA、PRSP、CRE均有较高的敏感率。参考文献•胡付品,汪复，孙自镛，陈中举等.2012年中国CHINET碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的分布特点和耐药性分析［J］.中国感染与化疗杂志.2014.14(5):382-386.•胡付品,朱德妹,汪复,蒋晓飞,孙自镛,陈中举等.2013年中国CHINET细菌耐药性监测［J］.中国感染与化疗杂志2014.14(5):365-374谢谢聆听！