15-色谱法

药用基础化学课件化学工业出版社本章学习内容本章学习要求本章目标检测参考答案第十五章色谱法第十五章色谱法1．掌握色谱法的分类方法，分离原理；色谱流出曲线的各种技术参数；塔板理论和速率理论方程的意义。2．掌握高效液相色谱仪的基本结构、功能和特点，了解高效液相色谱法的分类及应用。3．熟悉气相色谱仪的组成系统及作用、操作条件的选择，固定相的作用和固定液的分类。4．了解薄层色谱和纸色谱法的基本原理及操作方法，固定相和展开剂的选择原则。5．了解气相色谱仪中常用检测器的结构、工作原理和应用。本章学习要求色谱法概述色谱法的产生色谱法的分类色谱图及常用术语薄层色谱法分离原理吸附剂展开剂操作方法定性和定量分析色谱法基本理论色谱法的定性和定量分析本章学习内容第十五章色谱法药用基础化学(下册)气相色谱法气相色谱仪基本结构气相色谱的固定相气相色谱检测器高效液相色谱法高效液相色谱仪高效液相色谱的类型色谱条件的选择本章学习内容第一节色谱法概述一、色谱法的产生药用基础化学(下册)色谱法是一种分离技术。试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。其中的一相固定不动，称为固定相。另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。第一节色谱法概述二、色谱法的分类两相状态流动相的物态液相色谱（LC）气相色谱（GC）液－固色谱液－液色谱气－固色谱气－液色谱1.药用基础化学(下册)2.操作形式柱色谱纸色谱薄层色谱分离机理吸附色谱分配色谱离子交换色谱凝胶渗透色谱亲和色谱3.第一节色谱法概述三、色谱图及常用术语色谱图是以组分的浓度变化或信号强度为纵坐标，流出时间为横坐标。这种曲线称为色谱流出曲线（色谱图）。药用基础化学(下册)1.基线操作条件稳定后，仅有流动相通过检测器时，仪器检测到的信号称为基线。三、色谱图及常用术语2.色谱峰当某组分从色谱柱流出时，检测器对该组分的响应信号，色谱流出曲线随时间变化中的突起部分就是色谱峰。正常的色谱峰为对称的正态分布曲线。第一节色谱法概述三、色谱图及常用术语3.峰高h色谱峰最高点与基线之间的垂直距离称为峰高h4.峰宽W色谱峰的宽度是色谱流出曲线中很重要的参数，它直接和分离效率有关。描述色谱峰宽有三种方法药用基础化学(下册)三、色谱图及常用术语（1）标准偏差σ正态分布曲线两侧的拐点之间距离的一半，即0.607h处色谱峰宽的一半;（2）峰宽W通过色谱峰两侧的拐点作切线在基线上的截距称为峰宽W，或称基线宽度;（3）半峰宽W1/2峰高一半处色谱峰的宽度称为半峰宽。第一节色谱法概述5．峰面积A色谱峰与基线间所包围的面积称为峰面积A，它是色谱法定量分析的依据。色谱峰的面积可由色谱仪中的微处理器（微机）或积分仪求得。三、色谱图及常用术语药用基础化学(下册)6．保留值（1）死时间tM（2）保留时间tR（3）调整保留时间t'R（4）死体积VM（5）保留体积VR（6）调整保留体积V'R三、色谱图及常用术语第一节色谱法概述三、色谱图及常用术语7．分配系数K容量因子kmSccK流动相中组分的浓度固定相中组分的浓度mSmmSSVVKVcVckmsmm组分在流动相中的质量组分在固定相中的质量药用基础化学(下册)四、色谱法基本理论1．塔板理论若色谱柱的总长度为L，塔板高度为H，则色谱柱中塔板数n为：塔板数与的关系为：LnH21/25.54()RtnW第一节色谱法概述四、色谱法基本理论2．速率理论H为理论塔板高度；A为涡流扩散系数；B为分子扩散（纵向扩散项）系数；C为传质阻力系数；u为流动相的线速度(cm•s-1)。BHACuu药用基础化学(下册)四、色谱法基本理论3．色谱分离总效能的衡量（1）柱效能和选择性（2）分离度R（3）分离度与柱效、选择性的关系(2)(2)2,1(1)(1)''''RRRRtVrtV21121()2RRttRWW'2,12,1'2,12,111414nrrnkRrkr有效第一节色谱法概述五、色谱法的定性和定量分析1．定性分析（1）利用保留值定性（2）利用相对保留值定性（3）利用不同色谱柱上保留值定性（4）利用峰高增加法定性药用基础化学(下册)五、色谱法的定性和定量分析2．定量分析（1）定量校正因子或fi就是定量校正因子，其含义是单位峰面积或峰高代表组分的含量，也称绝对校正因子。组分i的绝对校正因子与标准物质s的绝对校正因子之比，称为相对校正因子：iiimfAiiimfh'//iiiisissssifmAmAffmAmA第一节色谱法概述五、色谱法的定性和定量分析（2）定量分析方法①归一化法②内标法''121100%100%100%()iiiiinnnnimmfAmmmmfA100%100%iiisissmfAmmfAm药用基础化学(下册)五、色谱法的定性和定量分析③外标法将待测组分的纯物质配制不同浓度的系列标准溶液，在相同操作条件下，定量进样，测定系列标样的峰面积A或峰高h，绘制A-C曲线或h-C曲线，如图在完全相同条件下，测待测样品，根据A待或h待，从曲线上查出待测组分含量。第二节薄层色谱法第二节薄层色谱法一、分离原理薄层色谱法动画药用基础化学(下册)二、吸附剂1．硅胶2．氧化铝3．聚酰胺fR原点到斑点中心的距离原点到溶剂前沿的距离SR原点到样品组分斑点中心的距离原点到对照品斑点中心的距离图15-7fR测量示意图第二节薄层色谱法三、展开剂极性由强到弱的顺序排列是：水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳＞环已烷＞石油醚。药用基础化学(下册)四、操作方法1．制板2．点样3．展开4．斑点定位第二节薄层色谱法五、定性和定量分析1．目视比较法半定量2．洗脱法进行定量3．薄层扫描法第三节气相色谱法第三节气相色谱法一、气相色谱仪基本结构1.气源2.气路系统3.进样系统4.分离系统5.检测系统6.温度控制系统7.记录系统药用基础化学(下册)二、气相色谱的固定相1．固体固定相（1）吸附剂（2）高分子多孔微球（3）化学键合相2．液体固定相（1）固定液（2）载体3．聚合物固定相第三节气相色谱法三、气相色谱检测器1．检测器的主要技术指标（1）噪音和漂移（2）灵敏度（3）检测限2．热导检测器3．氢火焰离子化检测器药用基础化学(下册)四、色谱条件的选择1．载气种类的选择（1）氢气（2）氮气（3）氦气2．载气流速的选择3．柱温的选择4．载体的选择5．固定液的选择第四节高效液相色谱法一、高效液相色谱仪药用基础化学(下册)一、高效液相色谱仪第四节高效液相色谱法一、高效液相色谱仪1．高压输液系统（1）储液瓶（2）脱气装置（3）高压输液泵（4）梯度洗脱装置往复式泵动画药用基础化学(下册)一、高效液相色谱仪2．进样系统第四节高效液相色谱法一、高效液相色谱仪3．分离系统色谱柱的柱管通常为内壁抛光的不锈钢管。常用分析型色谱柱内径为2～5mm，长为10～30cm。实验室制备型色谱柱的内径为20～40mm，柱长10～30cm。药用基础化学(下册)一、高效液相色谱仪4．检测系统（1）紫外检测器（UVD）图15-22流通池示意图第四节高效液相色谱法一、高效液相色谱仪4．检测系统（2）示差折光检测器（RID）药用基础化学(下册)一、高效液相色谱仪4．检测系统（3）荧光检测器（FLD）第四节高效液相色谱法二、高效液相色谱的类型1．液固吸附色谱2．液-液分配色谱3．化学键合相色谱4．离子交换色谱5．凝胶色谱法第十五章色谱法学习积累1．色谱法是一种分离技术。色谱法按流动相和固定相的状态、操作形式、色谱分析原理分为不同类型的色谱法。2．色谱法基本理论包括塔板理论和速率理论。3．峰高h、峰宽W、半峰宽W1/2、保留时间和峰面积A是色谱法的常用术语。R≥1.5时，两个组分能完全分开。第十五章色谱法4．色谱定量方法有归一化法、外标法、内标法等。5．气相色谱仪一般由气路系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统、温度控制系统组成.6．高效液相色谱仪主要由高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统组成。学习积累123456789CDADDCBCC本章目标检测参考答案单项选择题多项选择题12345ABBCDBCDACABCD药用基础化学(下册)