色素的提取和分离

实验九：叶绿体中色素的提取和分离一、实验目的：1、初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。2、探索叶绿体中有几种色素。二、实验原理：1、叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。2、色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。三、实验材料：新鲜的绿叶（如菠菜的绿叶），无水乙醇，层析液（由20份在60~90℃下分馏出来的石油醚、2份乙醇和1份苯混合而成。93号汽油也可代用），二氧化硅和碳酸钙。四、实验用具：干燥的定性滤纸，试管，棉塞，试管架，研钵，玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药勺，量筒（10ml），天平。五、方法步骤：（1）称取5g绿色叶片并剪碎提取色素研钵→研磨→漏斗过滤→（2）加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口（1）将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时到达滤液细线）制滤纸条（2）在距剪角一端1cm处用铅笔画线（1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线滤液划线（2）干燥后重复划2-3次（1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准）纸上层析（2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中（3）用培养皿盖盖上烧杯观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图）最宽：叶绿素a；最窄：胡萝卜素；相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b；相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。六、考点提示：1、二氧化硅：为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。碳酸钙：保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。丙酮：色素的溶剂。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。2、扩散最快的是胡萝卜素（橙黄色），扩散最慢的是叶绿素b（黄绿色）。3、滤纸上有四条色素带说明了绿叶中的色素有四种，它们在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散的快慢也不一样。4、裁取定性滤纸时，注意双手尽量不要接触纸面，以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸。5、制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角,防止两侧层析液扩散过快。这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察实验结果。6、根据烧杯的高度制备滤纸条，让滤纸条长度高出烧杯1cm，高出的部分做直角弯折。7、滤纸上的滤液细线如果触到层析液，细线上的色素就会溶解到层析液中，就不会在滤纸上扩散开来，实验就会失败。8、画滤液细线时，用力要均匀，速度要适中9、研磨要迅速、充分。a.因为丙酮容易挥发;b.为了使叶绿体完全破裂.从而能提取较多的色素;c.叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而被破坏。问题解答（1）对叶片的要求？为何要去掉叶柄和粗的时脉？绿色、最好是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。（2）过滤时为何用布不用滤纸？色素不能通过滤纸，但能通过尼龙布。（3）为何不能用钢笔或圆珠笔画线？因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素，会影响色素的分离结果。（4）滤液细线为何要直？为何要重画几次？防止色素带的重叠；增加色素量，使色素带的颜色更深一些。