实验室操作规范与安全

实验室操作规范与安全2019中国医科大学Manipulation&Biosaftyinbiolaboratories主要内容01实验室规章制度03实验室感染事件类型04实验室生物安全05对生物恐怖活动的防范06同位素的实验室操作规范与安全02微生物和生物医学实验室生物安全通用准则实验室规章制度实验室感染事件时有发生，这主要是因为从事专职微生物研究的人员比其他工作人员有更多接触病原微生物的机会，稍有疏忽大意，就可能被试验的对象所感染。有人统计，从事病原微生物研究的工作人员传染病发生率比普通人群高5～7倍。实验室感染事件的发生有可能成为传染源，造成危害公众健康的严重后果。因此必须引起重视。实验室规章制度建立健全实验室各种规章制度（SOP)是科研工作有序进行的必要前提。实验室规章制度一般包括：人员规章制度，包括培训制度。仪器使用制度。动物使用制度。药品使用及保管制度。实验室环境与生物安全制度。紧急情况下应急制度。例如：生物实验室里应备有急救药剂和用品如：创可贴，纱布，烫伤药品等。主要内容01实验室规章制度03实验室感染事件类型04实验室生物安全05对生物恐怖活动的防范06同位素的实验室操作规范与安全02微生物和生物医学实验室生物安全通用准则微生物和生物医学实验室生物安全通用准则生物安全制度是所有制度中的最重要的制度，为此，我国也和其他国家一样制订了本项制度。中华人民共和国卫生行业标准《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》(WS233—2002)该通用准则是以美国CDC／NIH《微生物和生物医学实验室的生物安全》第四版为蓝本制定的。微生物和生物医学实验室生物安全通用准则生物安全防护的基本原则、实验室的分类、分级及适用范围、一般生物安全防护实验室的基本要求、实验脊椎动物生物安全防护实验室、生物危险标志及使用、新建三级和四级生物安全防护实验室的验收和现有生物安全防护实验室的检测、现有三级和四级生物安全实验室的使用和维护、附录A安全操作规程、附录B二级生物安全柜的现场检测、附录C各国的微生物与生物安全防护实验室适用级别表等。《微生物和生物医学实验室的生物安全》基本内容主要内容01实验室规章制度03实验室感染事件类型04实验室生物安全05对生物恐怖活动的防范06同位素的实验室操作规范与安全02微生物和生物医学实验室生物安全通用准则实验室感染事件类型第一种是事故性感染，一般是因为试验人员操作过程中的疏忽，使本来接触不到的微生物污染环境，直接或间接感染实验人员。1956年前苏联的一个实验室中，有9支装有委内瑞拉马脑炎病毒鼠脑的安瓿被打破。事后没能很好地进行处理及采取必要的措施，也未进行彻底消毒，结果在几天内造成24名工作人员感染。实验室感染事件有四种类型实验室感染事件类型第二种是实验室动物引起的感染，由于实验人员接触了被微生物感染的实验动物导致的感染。例如在2009年我国沈阳的某高校在使用大白鼠进行试验时，有两名学生被大白鼠咬伤，还有一些学生给实验的老鼠放血、解剖。在实验过程中，这些学生均未按照要求戴手套操作，结果在29名实验人员中造成9人感染了流行性出血热。实验室感染事件类型第三种类型是气溶胶导致的感染，是由于实验室中的病原微生物以气溶胶的形式飘散在空气中，人呼吸了这种空气造成的感染。最严重的一次实验室气溶胶感染事故是1961年在莫斯科的一家研究所发生的。他们的实验人员从流行性出血热疫区捕捉到一些野鼠带回实验室，由于疏忽而把这些野鼠放在了室内暴露的场所。过了不久，该实验室中有63人出现发热的症状，开始被误诊为流感，1周内又增加了30人，才开始怀疑到是流行性出血热。本次事故被认为是野鼠身上带有的出血热病毒以气溶胶的形式污染了空气所致。实验室感染事件类型第四种类型是人为破坏，生物武器可以说是一种人为的实验室感染。日本侵华战争时期的731细菌部队在中国犯下了制造实验室感染和细菌武器的滔天罪行。2001年以来在美国境内屡屡制造炭疽的恐慌事件，造成几十人染病，数人死亡，美国白宫和国会先后成为被袭击的目标。现已有证据表明，该事件是来自美国军队的生化实验室。主要内容01实验室规章制度03实验室感染事件类型04实验室生物安全05对生物恐怖活动的防范06同位素的实验室操作规范与安全02微生物和生物医学实验室生物安全通用准则实验室生物安全一、生物危害评估当实验室活动涉及传染或潜在传染性生物因子时，应进行危害程度评估。危害程度评估应由适当的有经验的专业人员进行。实验室生物安全1.危害程度评估所涉及的内容：生物因子的种类（已知的、未知的、基因修饰的或未知传染性的生物材料）、来源、传染性、致病性、传播途径、在环境中的稳定性、感染剂量、浓度、动物实验数据、预防和治疗。实验室生物安全2.生物危险度评估1）微生物的致病性和感染数量2）暴露的潜在后果3）自然感染途径4）实验室操作所致的其他感染途径（非消化道途径、空气传播、食入）5）微生物在环境中的稳定性实验室生物安全2.生物危险度评估6）所操作微生物的浓度和浓缩标本的容量7）适宜宿主（人或动物）的存在8）从动物研究和实验室感染报告或临床报告得到的信息9）计划进行的实验室操作（超声处理、气溶胶化、离心等）10）可能会扩大微生物的宿主范围或改变微生物对于已知有效治疗方案敏感性的所有基因技术11）当地是否能进行有效的预防或治疗干预实验室生物安全二、生物危害程度的分级根据对个体和群体的危害性分四级：Ⅰ级：指危害性最低的病毒、细菌、真菌和寄生虫等生物因子；Ⅱ级：指中等危害的生物因子，多为条件致病菌或机会致病菌；Ⅲ级：指能引起个体的严重感染，但不易在人群中传播扩散的生物因子；可用抗生素治疗Ⅳ级：指能引起个体和群体严重感染，难治疗实验室生物安全四级操作规范除下列修改以外，应采用三级生物安全水平的操作规范：实行双人工作制，任何情况下严禁任何人单独在实验室内工作。这一点在防护服型四级生物安全水平实验室中工作时尤其重要。在进入实验室之前以及离开实验室时，要求更换全部衣服和鞋子。工作人员要接受人员受伤或疾病状态下紧急撤离程序培训。在四级生物安全水平的最高防护实验室中的工作人员与实验室外面的支持人员之间，必须建立常规情况和紧急情况下的联系方法。实验室生物安全三、生物安全水平分级及相应的实验设备要求生物安全水平(biosafetylevel,BSL)分级：1.BSL-1实验室：基础实验室。无特殊要求2.BSL-2实验室：基础实验室。配备高压灭菌设备，着专用工作服，带乳胶手套，生物安全柜(A2级)内操作实验室生物安全实验室生物安全实验室生物安全实验室生物安全实验室生物安全实验室生物安全实验室生物安全实验室生物安全实验室生物安全实验室生物安全3.BSL-3实验室：高度安全实验室选址：建筑物中可隔离的区域或独立建筑物分布：清洁区、半污染区、污染区，各区之间设缓冲区通风：独立的负压通风保护系统，气流方向：清洁区→半污染区→污染区安全柜：B2级实验室生物安全4.BSL-4实验室：最(高度)安全实验室选址：远离人口密集区，独立建筑，周围有密封的安全隔离带着装：正压防护服安全柜：Ⅲ型(全密封型)实验室生物安全实验室生物安全实验室生物安全四、个人生物安全防护装备实验室防护服面部防护：安全护目镜、面罩手套：乳胶手套呼吸防护：口罩实验室生物安全五、安全工作行为1.有相应的危害分级标准和与之相应的实验室条件；2.对工作人员进行生物安全知识培训；3.制定相关的实验室安全管理条例和操作细则；4.实验操作时要遵守操作规程，如有危险样品泄漏，应立即报告，及时处理。实验室生物安全动物实验室的生物安全防护设施应参照BSL-1~BSL-4实验室的相应要求,还应考虑对动物呼吸、排泄、毛发、抓咬、挣扎、逃逸、动物实验(如染毒、医学检查、取样、解剖、检验等人动物饲养、动物尸体及排泄物的处置)等过程产生的潜在生物危害的防护。应特别注意对动物源性气溶胶的防护,例如对感染动物的剖检应在负压剖检台上进行。实验室生物安全应根据动物的种类、身体大小、生活习性、实验目的等选择具适当防护水平专用于动物并符合国家相关标准的生物安全柜、动物饲养设施、动物实验设施、消毒设施和清洗设施等。实验室建筑应确保实验动物不能逃逸,非实验室动物(如野鼠、昆虫等)不能进入。实验室设计(如空间、迸出通道等)应符合所用动物的需要。实验室生物安全实验室中标本的安全操作移液管和移液辅助器的使用避免感染性物质的扩散生物安全柜的使用避免感染性物质的食入以及与皮肤和眼睛的接触避免感染性物质的注入血清的分离离心机的使用实验室生物安全匀浆器、摇床、搅拌器和超声处理器的使用组织研磨器的使用冰箱与冰柜的维护和使用装有冻干感染性物质安瓿的开启装有感染性物质安瓿的储存对血液和其他体液、组织及排泄物的标准防护方法对可能含有朊蛋白物质的防护主要内容01实验室规章制度03实验室感染事件类型04实验室生物安全05对生物恐怖活动的防范06同位素的实验室操作规范与安全02微生物和生物医学实验室生物安全通用准则对生物恐怖活动的防范一、生物恐怖威胁的分级按美国CDC的标准分三级：A级：最大危害B级：中等危害C级：最低危害对生物恐怖活动的防范二、A级生物武器及其防范(一)炭疽芽胞杆菌1.来源：气溶胶2.所致疾病：炭疽病(人畜共患)肺炭疽(出血性肺炎):发热、头痛、胸痛、咳嗽，无卡他症状肠炭疽(出血性肠炎)：恶心、呕吐、发热、血便、腹痛皮肤炭疽(黑炭状坏死)：丘疹、水泡、溃疡、发黑3.应急措施：立即离开气溶胶污染区，带口罩4.预防：注射炭疽减毒疫苗5.治疗：及早使用环丙沙星，强力霉素对生物恐怖活动的防范(二)鼠疫耶氏菌(Yersiniapestis)1.来源：气溶胶2.所致疾病：鼠疫(人畜共患)腺鼠疫(淋巴节炎)：人蚤肺鼠疫(黑死病)：发热、干咳、胸痛败血症鼠疫：源于腺鼠疫或肺鼠疫3.应急措施：不要进入疫区；带口罩4.预防：灭鼠、灭蚤5.治疗：早期足量氨基糖苷类抗生素。对生物恐怖活动的防范(三)出血热病毒1.来源：气溶胶2.所致疾病：出血热临床表现：高热、头痛、咽痛、出血、肾脏损害和免疫功能紊乱为主，三红(面、颈、上胸部潮红)、三疼(头痛、眼眶痛、腰痛),五期(发热、低血压、少尿、多尿、恢复期)病死率高。3.治疗：无特异性治疗，严禁使用阿斯匹林类药物对生物恐怖活动的防范对生物恐怖活动的防范(五)兔热病1.来源：气溶胶2.病原菌：土拉弗朗西斯菌(Francisella)3.临床表现：肺兔热病表现为突然发热，头痛、肌痛、咽痛、干咳；伤寒型为腹痛、腹泻4.治疗：早期足量氨基糖苷类抗生素及环丙沙星、氧氟沙星等。对生物恐怖活动的防范(六)T2毒枝菌素(T2毒素)1.来源：镰刀菌属的真菌产生的毒素，可制成各种剂型2.吸收途径：呼吸道、消化道粘膜；皮肤3.作用机理：阻断DNA的合成与转录4.临床表现：不同吸收途径局部临床表现不同；而后出现的全身症状为肌无力、头晕、共济失调、低血压休克。24小时内死亡。对生物恐怖活动的防范人员应考虑生物安全因素生物安全和重组DNA技术生物表达系统的生物安全考虑表达载体的生物安全考虑用于基因转移的病毒载体转基因动物和“基因敲除”动物转基因植物遗传修饰生物体的危险度评估进一步的考虑对生物恐怖活动的防范也要考虑：意外事故应对方案和应急程序意外事故应对方案微生物实验室应急程序对生物恐怖活动的防范实验室材料的清洁化学杀菌剂清除局部环境的污染清除生物安全柜的污染洗手／清除手部污染热力消毒和灭菌焚烧废弃物处理感染性物质的运输国际运输规定基本的三层包装系统溢出清除程序对生物恐怖活动的防范危害性化学品暴露途径化学品的储存关于不相容化学品的一般原则化学品的毒性作用爆炸性化学品化学品溢出压缩气体和液化气主要内容01实验室规章制度03实验室感染事件类型04实验室生物安全05对生物恐怖活动的防范06同位素的实验室操作规范与安全02微生物和生物医学实验室生物安全通用准则同位素的实验室操作规范与安全放射性物质及辐射技术已经广泛应用于医疗卫生、教学科研和工农业等领域，由