菊花组织培养

《菊花的组织培养》植物的组织培养是指在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。组织培养：思考(一).植物组织培养的基本过程一、基础知识1.植物体在个体发育过程中将形成不同的细胞和组织原因是？细胞分化2.植物组织培养的原理是什么？植物细胞具有全能性1.细胞的分化①概念：在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程.②特点：③原因：持久性、稳定性、全能性基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果.2.细胞的全能性①定义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性.②原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质（全套基因）10个14200多种生物体的每一个体细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质（全套基因）基因的选择性表达植物组织培养的基本过程是怎样的？离体的植物组织或细胞(外植体)脱分化愈伤组织再分化胚状体(根、芽)植物体外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官.脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞通过脱分化形成的疏松而无规则的，高度液泡化的呈无定形状态的,未分化的薄壁细胞2-3周，愈伤组织开始形成。再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成根和芽等器官的过程。3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。(二)影响植物组织培养的因素1、外植体的选取△不同植物的组织培养难度___________△同一种植物的不同组织培养难度_________差别很大不同如菊花的组织培养，一般选择_________植株茎__________________。未开花上部新萌生的侧枝对于同一种植物材料，材料的_________、__________________等也会影响实验结果。年龄保存时间的长短阅读教材，思考影响植物组织培养的因素有哪些？2、培养基的配制常用的一种培养基为___________其主要成分包括：：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co________：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等_________：生长素、细胞分裂素、赤霉素等MS培养基大量元素微量元素有机物植物激素使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于______，但_________先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞既分裂又分化同时使用___________提高3、不同植物激素使用顺序和使用量①不同植物激素使用顺序细胞分裂细胞不分化分化频率②不同植物激素使用量生长素用量比细胞分裂素用量植物细胞的发育方向比值高时有利于根的分化、抑制芽的形成比值低时有利于芽的分化、抑制根的形成比值适中时促进愈伤组织的生长4、环境因素：不同的植物对各种条件的要求往往不同。如进行菊花的组织培养，一般将pH控制在__________左右；温度控制在__________；并且每天用日光灯照射_____。5.818～22℃12h5、消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境。1、实验操作流程制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培移栽二、实验操作2、实验具体操作（1）.制备MS固体培养基实验室一般使用_____℃保存的配制好的培养基母液来制备①配制各种母液配制母液时，大量元素浓缩__________，微量元素浓缩__________。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照__________的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。1mg/ml410倍100倍②配制培养基。按配方称取琼脂、蔗糖以及各种母液，配制MS培养基。植物激素在菊花组织培养中，可以不添加_________________，原因是菊花茎段组织培养___________________。比较容易③灭菌将分装好的培养基连同其他器械一起进行_________________。高压蒸汽灭菌此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物体的光能自养。高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？思考（2）.外植体消毒①选取菊花茎段时，要取________________。流水冲洗酒精无菌水氯化汞无菌水②消毒流程：浓度______摇动_____次时间_____s浓度______时间_____min至少清洗___次漂净_______生长旺盛的嫩枝70%2～36～70.1%1～23消毒水外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。思考在选取菊花茎段的时候，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐受能力。在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？思考（3）.接种①前期准备：用_________________消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用_________________灭菌。②接种操作：插入外植体时_________________端朝上，每个锥形瓶接种_________________个外植体。70％的酒精火焰灼烧形态学上6～8（4）.培养接种后的锥形瓶最好放在__________中培养。培养期间定期进行_________，温度控制在_________℃，并且每天用日光灯光照_________h。无菌箱18～2212消毒在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程培养过程中为什么需要进行光照？思考（5）.移栽移栽生根的试管苗之前，应先打开封口膜，在培养间生长几日；然后用流水清洗___________，将幼苗移植到____________________等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。根部培养基消过毒的蛭石或珍珠岩（6）栽培幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花.植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。思考在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？思考2.是否完成了对植物组织的脱分化和再分化3.是否进行了统计、对照与记录4.生根苗的移栽是否合格1.外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？培养基灭菌不彻底；外植体消毒不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。三、结果分析与评价一般说来，容易进行_________繁殖的植物，也容易进行组织培养。如芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季等。无性四、课题延伸例1、植物组织培养形成的愈伤组织进行培养，又可以分化形成根、芽等器官，这一过程称为：正确答案：CA、脱分化B、去分化C、再分化D、脱分化或去分化例2、下列不能作为植物组织培养的材料是：正确答案：DA、秋海棠的叶B、马铃薯的块茎C、成熟的花粉D、木质部中的导管细胞谢谢!