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2.2.1动物细胞培养和核移植技术河北任丘二中王小燕植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养植物体细胞杂交原生质体番茄细胞原生质体融合再生出细胞壁杂种细胞脱分化愈伤组织杂种植株再分化植物体细胞杂交技术（重点）马铃薯细胞标志：成功融合人工诱导去壁植物组织培养植物细胞的融合动物细胞培养技术问题探讨怎样才能获得大量的自体健康皮肤？动物细胞培养的过程及条件动物体细胞核移植技术过程学习新课从动物机体中取出相关的，将它分散成，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞。一、动物细胞培养1、概念：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官如：肾、肺等细胞生命力旺盛，分裂能力强组织单个细胞生长和增殖原理：细胞增殖2、过程幼龄动物剪碎组织取动物器官和组织细胞悬液胰蛋白酶处理单个细胞胰蛋白酶处理单个细胞细胞贴壁一、动物细胞培养原代细胞培养细胞培养传代细胞接触抑制细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。一、动物细胞培养原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞（10代以后）从培养瓶中取出，配制成细胞悬液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。遗传物质改变具癌细胞特点遗传物质未改变2、过程取的组织、器官细胞悬液酶单个细胞加入液动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养原代培养1-10代细胞40—50代细胞传代培养胰蛋白酶特点细胞贴壁细胞接触抑制培养器皿3、条件：1、无菌、无毒的环境2、营养3、温度和PH4、气体环境：补充合成培养基中缺乏的物质一动物细胞培养（抗生素、定期更换培养液）36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。O2：进行呼吸CO2：维持培养液的PH值（95%空气和5%CO2）（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆）有氧•（1）蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。•（2）自身皮肤细胞•（3）检测有毒物质•（4）生理、病理、药理等方面的研究。4、应用一动物细胞培养问题我们能否利用类似植物组织培养获得完整植物体的方法培养动物细胞，使其发育成一个完整的个体？不能，高度分化的植物细胞仍保持着全能性，而动物细胞的全能性会随细胞分化程度的提高逐渐受到限制，分化潜能逐渐变弱。全能性高低：植物细胞＞动物细胞能不能用高产奶牛的一个体细胞，培育出一头高产奶牛呢？根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达?利用动物体细胞核移植技术二、动物细胞核移植技术将动物的一个细胞的细胞核，移入到一个已经中，使其重组并发育成一个新的胚胎，该胚胎最终发育成完整的动物个体。去掉细胞核的卵母细胞克隆动物类型1.胚胎细胞核移植2.体细胞核移植细胞分化程度低，恢复全能性容易。细胞分化程度高，恢复全能性困难。容易困难二、动物细胞核移植技术胚胎移植细胞核移植体细胞核移植的过程（高产奶牛）体细胞培养取出核甲牛乙牛MⅡ卵母细胞去除核去核卵母细胞重组卵细胞核植入卵裂早期胚胎代孕母牛丙移植体细胞群克隆牛细胞核移植胚胎移植物理或化学方法激活显微操作法无性生殖问题利用体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？克隆动物DNA主要来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。所以用体细胞核移植方法克隆的动物并不是供核动物完全相同的复制。供体细胞（供核）细胞培养体细胞细胞核卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传基本相同的犊牛归纳:1.两阶段：核移植和胚胎移植2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状3.严格来说新个体有卵母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状卵细胞C母绵羊子宫Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵细胞妊娠多莉羊的培育过程应用前景1.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育；2.保护濒危物种；3.克隆转基因动物，生产医用蛋白；4.作为异种移植的供体二、动物细胞核移植技术5.人的核移植胚胎干细胞经诱导分化，形成相应的组织、器官后，可用于组织器官的移植。存在的问题1.克隆动物存活率低，遗传缺陷多等；2.克隆动物食品的安全性问题。二、动物细胞核移植技术细胞的全能性细胞株、细胞系植物体或组织培养结果获得细胞或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（）A．细胞系B．细胞株C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是-----（）A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养AD3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于----（）A.培养基不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。A教学反馈4、下列有关动物细胞培养的叙述，不正确的是A用于培养的细胞大部取自胚胎或幼龄动物的组织或器官B将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞全部衰老死亡D小结动物细胞培养动物体细胞核移植动物胚胎、幼龄动物组织单个细胞胰蛋白酶原代培养传代培养细胞贴壁细胞接触抑制供体核受体质核移植胚胎移植克隆动物