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(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图杂种细胞•1、原理：细胞膜具有一定的流动性植物细胞A、B原生质体融合杂种细胞新品种植株酶解法去壁诱导筛选组织培养植物体细胞杂交流程图尝试仿写出动物细胞融合的流程图，并找出其与植物体细胞杂交技术的不同之处动物细胞融合流程图•1、原理：细胞膜具有一定的流动性植物细胞A、B原生质体融合杂种细胞新品种植株酶解法去壁诱导筛选组织培养动物细胞A’、B’植物体细胞杂交流程图动物细胞融合流程图诱导融合杂交细胞细胞培养物理法化学法灭活的病毒杂交细胞筛选1、灭活病毒如何诱导细胞融合？1、灭活病毒如何诱导细胞融合？灭活丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性病毒2、能否使用未灭活病毒？（诱导细胞融合）给动物细胞融合下个定义吧！动物细胞A’、B’诱导融合杂交细胞（单核）杂交细胞（单核）筛选细胞培养物理法化学法灭活的病毒2、概念两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后的单核细胞称为杂交细胞。3、细胞融合技术的意义突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。广泛运用于多个学科领域。人-鼠融合细胞应用：制备单克隆抗体二、单克隆抗体重温1、抗体的化学本质？2、抗体由什么细胞产生？3、抗体的作用特点？4、抗体的分布？抗体的传统生产方法再从动物血清中分离抗体该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。反复输入分化浆细胞动物体内某抗体某抗原思考与探究：如何获得大量化学性质单一、特异性强的抗体？人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。1、单克隆抗体的概念•单:单个细胞克隆:无性繁殖•单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体提示1：对免疫后的B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？问题：如何大量生产单克隆抗体？2、单克隆抗体的制备能产生抗体，但无法无限增殖癌细胞一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能持续增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合1.注射抗原的目的是什么？2.从哪里分离得到B细胞？单克隆抗体制备过程3.若细胞两两融合，有几种融合情况？骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞克隆化选择性培养基专一抗体检测B淋巴细胞筛选1未免疫的、已免疫的（被特定抗原免疫、非特定抗原免疫）怎么检测？有限稀释法培养有限稀释法将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。专一抗体检测杂交瘤细胞重复筛选2既能无限增殖，又能产生特异性抗体注射到小鼠体内体外培养如何实现单克隆抗体的大量生产？生产出来的单克隆抗体有何优点？特异性强、纯度高、灵敏度高，产量大、容易标准化生产。单克隆抗体制备过程中运用到了哪些生物技术手段？动物细胞融合动物细胞培养抗原-抗体杂交技术3、单克隆抗体的应用①诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速②用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物•2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体•一、动物细胞融合•1、原理：细胞膜具有一定的流动性•2、概念•3、细胞融合技术的意义•二、单克隆抗体•1、单克隆抗体的概念•2、单克隆抗体的制备•3、单克隆抗体的应用2.2单克隆抗体的制备请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？杂交细胞灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生特异性抗体、又能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体用专一抗体检验阳性