动物细胞融合与单克隆抗体04533

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读下面一段资料,找出单克隆抗体的概念人们发现,在动物发生免疫反应的过程中,体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体,但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体,必须用单个B细胞进行无性繁殖,即克隆。•单克隆抗体:单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体A细胞B细胞人工诱导1.动物细胞融合的概念杂交细胞动物细胞融合(也称细胞杂交):是指两个或多个细胞融合形成一个细胞的过程。一、动物细胞融合不同DNA的两个细胞灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞动物细胞融合过程示意图植物体细胞杂交过程示意图植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞膜的流动性融合过程先使细胞分散开诱导方法电激、振动、离心、聚乙二醇融合完成的标志结果应用培育植物新品种意义相同点原生质体融合原理相同;原生质体融合的方法相似细胞膜的流动性先除去细胞壁电激、灭活的病毒、聚乙二醇形成细胞壁形成单核细胞杂种植株杂交细胞主要用于制备单克隆抗体突破远缘杂交不亲和的障碍,打破了生殖隔离。2、两者的主要区别是什么?(1)动物细胞融合不需要去除细胞壁;(2)动物细胞融合常使用灭活的病毒,而植物细胞融合不用;(3)植物杂交细胞可以培养成杂种植株,而动物杂交细胞则不可。【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是()A.离心B.灭活的病毒C.电刺激D.振动【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点()A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增殖C.可形成新个体D.培养过程会贴壁【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是()A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂交细胞BBA二、单克隆抗体传统的抗体生产方法及缺陷是什么?思考:单克隆抗体的制备原理:◆利用______________产生特异性抗体的功能。◆利用______________无限增殖的特性。◆利用_________________技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。◆利用__________________技术大量培养杂交瘤细胞。B淋巴细胞骨髓瘤细胞动物细胞融合动物细胞培养一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案:动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体,又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验单克隆抗体制备过程示意图1、如何获得B淋巴细胞?2、如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时,会有几种融合方式(类型)?3、选择杂交瘤细胞的两步筛选的目的各是什么?合作探究BB、B瘤、瘤瘤(B、瘤)(一选)选择性培养基:只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞(二选):选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养单抗制备过程分哪几步?请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是?3单克隆抗体的应用单克隆抗体最主要的优点:特异性强,灵敏度高,并可能大量制备。3单克隆抗体的应用1、单克隆抗体的应用有哪些?(1)可用于作为诊断试剂:准确,高效,简易,快速(2)可用于疾病治疗(癌症)(3)可用于运载药物(作为运载对应疾病的药物的“生物导弹”)2、生物导弹的组成及优点组成:“生物导弹”=单克隆抗体+药物或放射性同位素或细胞毒素优点:疗效高、毒副作用小。两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法--灭活病毒一个新细胞--杂交瘤细胞一个优势--单克隆抗体特异性强、灵敏度高、并可能大量制备的优势作业布置导学案中的【课后巩固案】必做:A组选做:B组如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养?融合后的细胞经选择性培养基培养后,能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞,通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释,用多孔细胞培养板培养,使每孔细胞不超过一个,通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体,那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞,挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释,一般需进行3~4次,直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。

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