动物细胞融合与单克隆抗体04756

2010-3-2612010-3-2622.2.2动物细胞融合与单克隆抗体2010-3-263植物体细胞杂交植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合杂种细胞组织培养杂种植株去细胞壁纤维素酶、果胶酶化学法物理法2010-3-264一、动物细胞融合1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、过程：5、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。6、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体2010-3-2654、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、诱导方法质融合、核融合）单核细胞2010-3-2662、什么是抗体？二、单克隆抗体回顾3、抗体的分布？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。1、什么是克隆？“克隆”从英文“clone”音译而来，是指从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子，细胞或个体。在细胞水平指动物细胞培养.2010-3-267该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。自主阅读P52：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？思考：如何获取某种特定抗体？2010-3-268B淋巴细胞特点３．每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。2010-3-269二、单克隆抗体由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。1、概念:2010-3-2610怎样才能大量生产单克隆抗体？提示1：仅用细胞培养技术可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？2010-3-2611大量生产单克隆抗体思路•B淋巴细胞具产生抗体的功能•骨髓瘤细胞具无限增殖的特性•利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的杂交瘤细胞•利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞2010-3-2612B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养2、单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高2010-3-2613免疫小鼠培养骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白选择培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体克隆杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞多种杂交细胞杂交瘤细胞有何特点？本过程利用的那些技术？动物细胞融合技术动物细胞培养技术是否注射抗原（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？两次筛选的目的分别是什么？2、单克隆抗体制备过程与传统制备的抗体相比具有什么特点？2010-3-26143.单克隆抗体的应用：①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合优点：准确、高效、简易、快速②用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。2010-3-2615两个过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法一个新细胞一个优势课堂小结－－灭活的病毒－－杂交瘤细胞－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势2010-3-2616形成杂种细胞获得杂种植株结果物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目1、植物、动物细胞融合的比较课堂小结融合前处理用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散2010-3-26172、单克隆抗体制备过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体课堂小结2010-3-2618B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC1.右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1).该实验方案的目的是：________________(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？2010-3-2619B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC(3).A是从小鼠的脾脏中取得__________该细胞能够产生______。(4).图中B为________________过程，常用_________________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒双亲细胞产生专一抗体无限增殖2010-3-2620B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC(5).__________技术是单克隆抗体的技术支持。动物细胞培养（6）单克隆抗体的特点________________，并可大量制备。特异性强，灵敏度高2010-3-26212、动物细胞融合和植物细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段完全相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成杂种细胞D2010-3-26223、用a表示骨髓瘤细胞，用b表示B淋巴细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的分别是（）A.a、aa、ab、bb、ba、aa、ababB.a、aa、ab、bb、bab、bb、babC.a、aa、ab、bb、bab产生特定抗体的abD.a、aa、ab、bb、baa能无限增殖的aaC练习册P312.2.2动物细胞融合与单克隆抗体2010-3-2623已成功的动物细胞融合实例还有哪些？生物种类成功年代酵母菌—鸡1975年人—胡萝卜1976年人—小鼠1978年要知道更多的实例，需经常查阅更多科研报道。