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中华人民共和国安徽出入境检验检疫局TheChemicalLaboratoryofAHCIQ标准操作程序StandardOperationProcedure液相色谱岗位分析方法性能标准、其他要求和步骤ConcerningthePerformanceofAnalyticalMethodsandtheInterpretationofResultsatLCPost方法编号SOP-LC-XXX批准人起草人版本/版次签发人修订次数签发日期验证人实施日期验证日期中华人民共和国安徽出入境检验检疫局标准操作程序SOP–LC-XXX2安徽出入境检验检疫局化学技术中心液相色谱岗位分析方法性能标准、其他要求和步骤1．定义1.1准确度检测结果与可接受参考值之间的符合度。通过测定真实性和精密度来确定。1.2α误差指测试样品符合规定的概率，尽管获得的是不符合规定的测定(是一个假的不符合规定的决定)。1.3分析物将要检测、鉴别和/或定量的物质以及分析过程中产生的衍生物。1.4β误差测试样品确实不符合规定的概率，尽管获得的是符合规定的测定(是一个假的符合规定的决定)。1.5偏差指检测结果与可接受参考值之间的差异。1.6标准校准用参考基准值的测量值来代表所测物质量的测量手段。1.7认证过的基准物质(CRM)CRM指一种有特定分析物含量赋值的物质材料。1.8共色谱法指一个将提取物在进行色谱分离之前分成两个部分的过程。第一部分进行色谱分离。第二部分与要测定的标准分析物混合。然后将该混合物也进行色谱分离。所加标准分析物的量必须与提取物中分析物的估计值相差不大。设计此方法是要提高采用色谱法时分析物的鉴别，特别是在没有适宜的内标物可用时。1.9协同试验用相同的方法对相同的样品进行分析以确定该方法的性能特性。该试验包括随机测定误差和实验室偏差。1.10确认方法能提供全面或补充信息使物质得到明确地鉴定，并且能在感兴趣的水平进行定量的方法。中华人民共和国安徽出入境检验检疫局标准操作程序SOP–LC-XXX31.11决定限度(CCα)CCα指等于和高于此值时，可以用α误差概率得出认为样品不符合规定的结论的限度。1.12检测容量(CCβ)CCβ指可以用β误差概率检测、鉴别和／或定量样品中物质的最小含量。对于未确定允许限量的物质，检测容量是指用1—β统计学概率方法能够检测出真正污染的样品的最低浓度。对于已经建立允许限量的物质，检测容量则是指用1—β统计学概率方法能够检测出允许限量浓度的浓度。1.13添加样品材料被已知量的待测物强化的样品。1.14实验室间试验(比对)由两个或多个实验室依照预先确定的测定检测性能条件，对同—样品的检测进行组织、性能和评价测试。根据目的，试验可以分为协作试验和熟练程度试验。1.15内标(IS)一种理化特性与待测分析物尽可能相同，并且样品中不存在的物质。它被加到每份样品中及每一个校准标准中。1.16实验室样品被送到实验室作检查和测试而准备的一种样品。1.17关心水平样品中明显地确定其符合法规规定的物质或分析物的浓度。1.18最低要求性能限度(MRPL)样品中至少必须检测和确认的分析物的最低含量。1.19性能特点可以归结于分析方法的使用特点。这可以是特异性、准确性、真实性、精密度、重复性、重现性、回收率、检测性能和抗耐性。1.20分析方法的性能标准可以来判断该方法是否适合于其目的、并产生可靠结果的性能特点要求。1.21允许限度法规中确定的物质的最高残留限量、最高水平和其他最大耐受量。1.22精密度在规定(预先确定)条件下，获得的相互独立的检测结果之间的一致程度。精密度测定通常用不精确性表示并以检测结果的标准偏差来计算。标准偏差大则精密度就低。1.23熟练试验允许实验室选择其自己的方法来分析同一个样品，假设这些方法在常规条件中华人民共和国安徽出入境检验检疫局标准操作程序SOP–LC-XXX4下使用。试验必须按照相应的标准操作程序来设计或执行，并可用来评价方法的重现性。1.24定性方法一种可以根据物质的化学、生物学或物理特性鉴别该物质的分析方法。1.25定量方法一种可以确定物质的数量或质量特性，以便可以用适当单位的数值表示的分析方法。1.26试剂空白测定不用测试物或用相当数量的溶剂替代测试物而进行的全部分析过程。1.27回收率在分析过程中回收到物质的实际浓度百分比。如果是没有认证过的基准物质，应在方法确认试验中予以测定。1.28基准物质指其一种或几种特性已经被确认方法所证实，从而可以用来校正设备或校验测定方法的物质。1.29重复性在重复条件下的精密度。1.30重复条件在同一个试验室由同一个操作人，用相同的仪器、相同的方法对同一个检测项目进行检测，获得的独立检测结果的条件。1.31重现性在重现条件下的精密度。1.32重现条件在不同试验室由不同的操作人，用不同的仪器、相同的方法对同一个检测项目进行检测，获得的独立检测结果的条件。1.33抗耐性分析方法对试验条件，可以表示为样品材料、分析物、贮存条件、环境和或样品制备条件等改变的敏感性，在此条件下，该方法可以按现有方法应用或作特别的轻微修正。对于实际中可能遇到的各种变化(如试剂的稳定性、样品的组分、酸度、温度)的所有试验条件，任何能够影响分析结果的变化都应尽可能的指出。1.34样品空白测定对不含分析物的样品的测试部分进行的完整分析过程。1.35筛选方法用来测定关注水平的某一物质或某类物质的存在方法。这些方法具有对样品的高吞吐量能力，并被用来对大量的样品进行审定，以确定是否潜在地不符合规中华人民共和国安徽出入境检验检疫局标准操作程序SOP–LC-XXX5定。它们应该特别地设计，以避免出现符合的假结果。1.36单一实验室试验(室内确认)一种由一个实验室在适当长的时间间隔内，在不同的条件下，用一种方法来分析相同或不同的测试材料的分析试验。1.37特异性一种区别被测分析物与其他物质的能力的方法。这种特性是所述测定技术的主要功能，但是可以根据化合物或基质的类别而变化。1.38标准添加指测试样品被分为两个(或多个)测试部分的过程。其中一部分直接分析，另一部分在分析前被添加了已知数量的标准分析物。所加标准分析物的量必须是样品中估计的分析物的量的2倍到5倍之间。考虑到分析过程的回收率，设计此步骤是要确定样品中的分析物的含量。1.39标准分析物一种已知的，并被认证过含量和纯度，用作分析中参照物的分析物。1.40物质特定的或有确定化学组成的物质及其代谢物。1.41测试部分指从进行检测或观察的测试样品分出的物质的量。1.42测试样品指由一种实验室样品制备，并由此获取测试部分的一种样品。1.43真实度从大量的测试结果获得的平均值与可接受的参照值之间的符合程度。真实度通常以偏差表示。1.44单位指ISO31(20)和欧盟指令71/354/EC中所述的那些单位。1.45确认通过检查和提供有效的证据，以确定一个特定计划应用的具体要求得到实行。1.46实验室内重复性在同一个试验室，在适当长的时间间隔内和在规定(预先确定)的条件下(涉及到如方法、测试材料、操作人员、环境)获得的精密度。2.分析方法性能标准和其他要求2.1总体要求2.1.1样品处理样品应该以有最大机会检测出物质的方式获得、处理和加工。样品处理过程中华人民共和国安徽出入境检验检疫局标准操作程序SOP–LC-XXX6应防止偶然污染或丢失分析物的可能性。2.1.2方法性能2.1.2.1回收率在样品分析过程中，如果采用了一个固定的回收率校正因子，则应对每一批样品测定回收率。如果回收率在限度以内，才能采用固定的回收率校正因子。否则，应采用从该批样品获得的特定回收率因子，除非采用标准添加程序(见3.5)或用内标法来定量测定样品中分析物，才可应用样品中分析物的特定回收率因子。2.1.2.2特异性在试验条件下一个方法应能区分分析物和其他物质之间的差别。必须提供这种区别估计可能达到的程度。当采用所述的测定技术时需要克服任何可预见的来自物质(如同族物、同类物、要检测的残留物)代谢产物的干扰。特别重要的是要调查来自基质组分的干扰。2.2筛选方法只有那些以记录的可追溯方式证明其有效，并且在测定的水平假符合串＜5％(β－误差)的分析技术才可用于指令96/23/EC规定的筛选目的。在出现可疑结果时，应用确认方法进行确认。2.3有机残留物和污染物的确认方法有机残留物或污染物的确认方法应提供关于分析物化学结构的信息。因此仅根据色谱分析而不采用光谱检测的方法不适于单独作为确认方法。但是，如果一个技术缺乏足够的特异性，应该通过包括合适的净化，色谱分离和光谱检测等分析技术来达到所需的特异性。以下方法或方法联合被认为是适于鉴定所指定的物质组的有机残留物或污染物。表1有机残留物或污染物的确认方法（液相色谱部分）测定技术96/23/EC附录I物质限度带有质谱检测的液谱A和B组只要符合或在线或离线色谱分离只要采用全扫描技术或采用至少3（B组）或4（A组）个鉴别点作为不记录全部质谱的技术带红外光谱检测的液谱A和B组必须满足红外光谱吸收的特殊要求带二级管矩阵检测全程扫描的液谱B组必须满足紫外光谱吸收的特殊要求带荧光检测的液谱B组只适用于自然发射荧光的分子和经过转化或衍生后发射荧光的分子带紫外/可见光检测（单一波长）的液谱B组只要采用至少两个不同的色谱系统或第二个独立的检测方法中华人民共和国安徽出入境检验检疫局标准操作程序SOP–LC-XXX72.3.1共同的性能标准和要求确认方法应提供关于分析物化学结构的信息。当有一个以上化合物给出相同反应时，那么该方法不应区别不开这些化合物。仅根据色谱分析而不采用光谱检测的方法不适于单独作为确认方法。如果在方法中使用内标物，内标物应在提取过程开始时就加入到测试部分。根据可能性，内标物应采用稳定性同位素标记的分析物—特别适用于质谱检测，或结构与分析物类似的化合物。当没有适宜的内标物可用时，分析物的鉴别应采用混合色谱来确认。此时，只需获得一个峰，增高的峰的高度(或面积)应等于加入的分析物的量。对于LC，半峰高处的峰宽应在原始峰宽的90％～110％范围内，保留时间应在5％范围内变化。参照物或含有等于或接近允许限度或判定限度(超标控制对照样品)的已知量的分析物添加材料，以及阴性控制材料和试剂空白最好应当在整个过程中与每一批分析的样品一块进行操作。注入提取物到分析仪器的顺序如下：试剂空白，阴性控制材料，需要确认的样品，阴性控制材料，最后是超标控制对照样品。任何与这种顺序不同的变化应被证明是适宜的。2.3.2对定量分析方法的额外性能标准和其他要求2.3.2.1定量方法的真实度在重复分析己鉴定的参照材料时，试验测定的回收率折算己知值的平均质量范围的指导范围如表2。表2定量方法的最低真实度真值含量（mg/kg）偏差范围（%）＜0.001-50～+200.001～0.01-30～+100.010～10-20～+1010～1000＜151000～10000＜10＞10000＜5在没有认证过的基准物质可使用时，通过向空白基质中加入已知量的分析物得到的回收率来评价测定的真实度是可以接受的。用平均回收率折算的数据只有落在表2所示的范围内才可接受。2.3.2.2定量方法的精密度对于测试物中的禁用物质，精密度实验应在方法测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限三个水平进行；对于已制定MRL的，精密度实验应在方法测定低限、MRL、选一合适点三个水平进行；对于未制定MRL的，精密度实验应在方法测定低限、常见限量指标、选一合适点三个水平进行。重复测定次数中华人民共和国安徽出入境检验检疫局标准操作程序SOP–LC-XXX8至少为6。实验室内部的变异系数参考范围见表3。表3实验室内变异系数被测组分含量实验室内变异系数（CV，%）0.1µg/kg431µg/kg3010µg/kg21100µg/kg151mg/kg1110mg/kg7.5100mg/kg5.31000mg/kg3.81%2.710%2.0100%1.3注：对于低于100μg/kg的质量范围，用Horwitz公式计算会得出不可接受的高值。因此，欧盟对低于10