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ICS65.020.20B04DB12天津市地方标准DB12/T842—2018转基因植物及其产品成分筛查cp4-epsps试纸条法Screeningmethodforgeneticallymodifiedplantscp4-epspsteststrip2018-11-07发布2018-12-01实施天津市市场和质量监督管理委员会发布DB12/T842—2018I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由天津市农村工作委员会提出并归口。本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天津市东丽区产品质量监督检验所。本标准主要起草人：兰青阔、李亮、赵新、沈晓玲、兰璞、王成、宛煜嵩、陈锐、黄凤军、李文、李益歌。DB12/T842—20181转基因植物及其产品成分筛查cp4-epsps试纸条法1范围本标准规定了转基因植物及其产品成分cp4-epsps试纸条法的检测方法、结果判断。本标准适用于表达cp4-epsps蛋白的转基因大豆GTS40-3-2、MON89788，转基因玉米NK603、MON88017，转基因棉花MON1445、MON88913，转基因油菜GT73/RT73、苜蓿、甜菜等主要植物及其初级加工产品中cp4-epsps蛋白的试纸条筛查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。农业部2031号公告-19-2013转基因植物及其产品成分检测抽样3原理转基因快速检测试纸应用双抗体夹心免疫层析的原理，样本中的抗原在侧向移动的过程中与标记的特异性单克隆抗体1结合，形成抗原-抗体复合物，继续向前方流动和NC膜检测线上特异性单克隆抗体2结合形成双抗体夹心复合物，并显色。如果样本中转基因作物含量大于5%，控制线（ControlLine，简称C）和检测线（TestLine，简称T）显色，结果为阳性；反之，控制线（C）显色，检测线（T）不显色，结果为阴性。4器设备及试剂4.1仪器设备匀浆器；天平；移液枪；振荡器等。4.2试剂提取缓冲液；分析实验室用水等。5法步骤5.1取样按照农业部2031号公告-19-2013中的规定执行。5.2样品的采集和预处理DB12/T842—20182叶片等植物新鲜组织样品使用离心管盖夹取或者打孔的方式，采集生长点附近约3cm幼嫩组织100mg～200mg，置于2mL离心管中，加1mL纯水或提取缓冲液于离心管中，使用一次性研磨杵手工研磨或电钻研磨，确保上层液体体积应至少占总体积三分之一。作物籽粒等干样可使用研磨仪研磨或用铁钳夹碎，将粉末转移到2mL离心管中。对于混合样品，应称重后使用大容量研磨仪器研磨至100目大小粉末，然后加入500mL水或提取缓冲液。5.3涡旋震荡在振荡器上用力震荡30s～1min，确保样品充分混匀。5.4试纸条检测震荡后，静置1min待固体物质沉淀分层，尽快从包装中取出试纸条，按照箭头方向插入离心管，开始计时。5.5读取结果5min～10min底色褪去后，将试纸条水平放置于观察者正面读取结果。5.6结果判断测试结果分为阴性、阳性和无效三种：——阴性（—）：控制线C显色，检测线Ｔ不显色；——阳性（＋）：控制线C显色，检测线Ｔ显色肉眼可见；——无效：C线未出现，可能操作不当或试纸失效。表明操作过程不正确或试纸条已变质损坏。在此情况下，应重新测试。_________________________________