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ICS67.040C53浙江省地方标准DB33DB33/T703-2008食品和农产品中多种碱性工业染料的测定液相色谱-串联质谱法DeterminationofmultiplebasicdyesinfoodandfarmproductsLC/MS/MSmethod2008-07-07发布2008-08-07实施浙江省质量技术监督局发布DB33/T703—20081前言本标准附录A为资料性附录。本标准由浙江省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：浙江方圆检测集团股份有限公司。本标准主要起草人：廖上富、何乔桑、黄丽英、刘敏芳。DB33/T703—20082食品和农产品中多种碱性工业染料的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了食品和农产品中四种碱性工业染料碱性嫩黄O、碱性橙、碱性紫5BN和碱性玫瑰精B的液相色谱-串联质谱的测定方法。本标准适用于食品和农产品中碱性嫩黄O、碱性橙、碱性紫5BN和碱性玫瑰精B的测定。本标准规定碱性嫩黄O、碱性橙、碱性紫5BN和碱性玫瑰精B的的检出限分别为0.5µg/kg、0.5µg/kg、5µg/kg、0.1µg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理样品经无水乙醇提取，固相萃取柱净化，用液相色谱串联质谱法测定。4试剂除非另有说明，所用试剂均为分析纯。4.1水：GB/T6682规定的一级水。4.2无水硫酸钠：650℃灼烧4h,冷却后储于密封容器中备用。4.3无水乙醇。4.4甲醇：色谱纯。4.5甲酸：色谱纯。4.6氨水：优级纯。4.7洗脱液：吸取4mL氨水（4.6）用甲醇定容到100mL。4.80.1%甲酸甲醇溶液：吸取0.5mL甲酸（4.5）加入至500mL甲醇中。4.90.1%甲酸水溶液：吸取0.5mL甲酸（4.5）加入至500mL水中。4.10定溶液：甲醇+水=70+30（V/V）。4.11标准储备溶液：0.10mg/mL。分别准确称取四种碱性工业染料标准物质，用定容液(4.10)配成0.10mg/mL的标准贮备溶液。4.12混合标准溶液：根据每种碱性染料的灵敏度和仪器线性范围，用定容液(4.10)配成混合标准溶液，各碱性染料浓度见表1。表1混合标准溶液中各碱性染料浓度标准物质名称碱性嫩黄O碱性橙碱性紫5BN碱性玫瑰精B浓度，μg/mL0.500.505.00.104.13混合标准使用溶液：临用前吸取一定量的混合标准储备溶液（4.12）用定容液(4.10)根据需要稀释配制成适当浓度的系列混合标准使用溶液。DB33/T703—200834.14固相萃取柱：OasisHLB6mL，500mg或相当者。使用前分别用10mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。5仪器和设备5.1液相色谱串联四极杆质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。5.3涡旋混合器。5.4超声波清洗器。5.5高速台式离心机：转速≥8000r/min。5.6氮吹仪。5.7固相萃取装置。5.8旋转蒸发仪器。6测定步骤6.1提取称取5g样品（精确到0.01g）于50mL聚丙烯离心管中，加入5g无水硫酸钠（4.2），搅拌均匀，加入25mL无水乙醇（4.3），涡旋混合1min，超声提取20min，以8000r/min离心5min，上清液转移至鸡心瓶中，再加入25mL无水乙醇，重复上述操作，合并全部上清液于鸡心瓶中，在45℃旋转蒸发至近干，待净化。6.2净化样品提取浓缩液用10mL水少量多次溶解，上固相萃取柱（4.11），调节流速小于等于2mL/min，用6mL洗脱液（4.7）洗脱，40℃氮气吹干，准确加入1ml定容液（4.10）,过0.22μm滤膜，待测。6.3测定6.3.1色谱条件6.3.1.1色谱柱：C18柱（100mm×2.1mm，1.7μm）或相当者；6.3.1.2柱温：30℃；6.3.1.3进样量：10μL；6.3.1.4流动相及流速见表2。表2液相色谱梯度洗脱条件时间（min）流速（μL/min）0.1%甲酸甲醇溶液（%）0.1%甲酸水溶液（%）0.0020070303.0020070303.5020010905.5020010906.0020070308.0020070306.3.2质谱条件6.3.2.1离子源：电喷雾离子源（ESI）；6.3.2.2扫描方式：正离子扫描；6.3.2.3检测方式：多反应监测（MRM）；6.3.2.4雾化气、锥孔气为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；喷雾电压、去簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度；6.3.2.5定性离子对、定量离子对、采集时间、锥孔电压、碰撞能量见表3。DB33/T703—20084表3四种碱性工业染料的监测离子对碱性工业染料名称定量离子对（m/z）定性离子对（m/z）采集时间（s）锥孔电压（V）碰撞能量碱性嫩黄O268/147268/1070.200；0.1001830；30碱性橙213/77213/1210.200；0.1002520；20碱性紫5BN372/357372/3410.200；0.1002440；55碱性玫瑰精B443/399443/3550.200；0.1002845；556.3.3液相色谱-串联质谱测定6.3.3.1定性测定在相同试验条件下，样品中待测物与同时检测的标准物质具有相同的保留时间，且样品图谱中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表4规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表4定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度＞50＞20～50＞10～20≤10允许的最大偏差±20±25±30±506.3.3.2定量测定外标法定量：对样品和混合标准使用溶液进样，以峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下标准溶液的提取离子流图参见附录A.1。7结果计算样品中四种碱性工业染料含量按式（1）计算：10001000×××=mVcX……（1）式中：X──样品中被测组分残留量，单位为微克每千克（µg/kg）；c──从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升（µg/L）；V──试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m──样品的质量，单位为克（g）。注：测定结果保留一位小数。8方法准确度和精密度8.1准确度本方法在线性范围内添加浓度的回收率在70%～120%之间。8.2精密度本方法的相对标准偏差RSD小于15%。DB33/T703—20085附录A（资料性附录）碱性嫩黄O、碱性橙、碱性紫5BN和碱性玫瑰精B标准物质的MRM图A.1碱性嫩黄O、碱性橙、碱性紫5BN和碱性玫瑰精B标准物质的MRM图——————————————