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ICS65.120B46DB34安徽省地方标准DB34/T1367—2011饲料中硫酸安普霉素的测定-高效液相色谱法DeterminationofApramycinsulfateinanimalfeed—Highefficiencyliquidchromatographymethod2011-03-16发布2011-04-16实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1367—2011I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：张莉、蔡一杰、明文庆、吴蕾、刘红云、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。DB34/T1367—20111饲料中硫酸安普霉素的测定-高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中硫酸安普霉素检验的高效液相色谱测定方法。本标准适用于饲料中硫酸安普霉素的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3试样制备按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中，室温保存，备用。4原理试样中的硫酸安普霉素先用水溶解提取，高效液相色谱仪(带蒸发光检测器)测定，外标法定量。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682二级水的规定。5.2硫酸安普霉素对照品，纯度≥99％。5.3标准储备液：准确称取硫酸安普霉素对照品适量，用水配制成1000µg/mL标准储备液。4℃冰箱保存，备用，有效期7天。5.4标准工作溶液：准确量取适量标准储备液加水稀释成0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0µg／mL的标准工作液。过0.45μm滤膜，待用。5.5甲醇：色谱纯。5.6三氟乙酸。5.70.1％三氟乙酸溶液:量取0.1mL三氟乙酸加水溶解定容至100mL，混匀。5.8微孔滤膜：孔径0.25µm，有机相。6仪器设备6.1高效液相色谱仪(配蒸发光检测器)。DB34/T1367—201126.2分析天平：感量0.0001g，0.001g。6.3饲料粉碎机。6.4旋转蒸发器。6.5超声波提取仪。7测定步骤7.1试样提取称取粉碎后的饲料样品2g（精确至0.001g），置于200mL锥形瓶中，加入50mL水超声提取30min,过滤。滤液于60℃水浴中旋转减压蒸发至干，加水1.00mL溶解，过0.45μm滤膜过滤后供高效液相测定。7.2色谱条件色谱柱：C18(150×4.6mm，5μm)或性能相当的色谱柱。流动相：0.1％三氟乙酸溶液:甲醇（98:2）。流速：1.0mL/min。进样体积：20μL。漂移管温度：60℃。气体压力：35psi。7.3上机测定取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果计算按照下式计算试样中药物的含量：1000mAs1000VCsAX×××××=.................................(1)式中：X——试样中药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As——标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V——定容体积，单位为毫升（mL）；Cs——标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样质量，单位为克（g）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法的检测限为0.5mg/kg。DB34/T1367—201139.2准确度本方法在添加浓度为1.0mg/kg时，回收率为80％～120％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV≤10％，批间变异系数CV≤15％。DB34/T1367—20114AA附录A（资料性附录）硫酸安普霉素标准溶液相色谱图图A.1硫酸安普霉素标准溶液色谱图_________________________________