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ICS67.050X40DB34安徽省地方标准DB34/T1541—2011小麦粉中偶氮甲酰胺的测定高效液相色谱法DeterminationofAzodicarbonamideinwheatflourHighperformanceliquidchromatographymethod2011-11-15发布2011-12-15实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1541—2011I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省质量技术监督局、安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会提出。本标准由安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家农副加工食品质量监督检验中心、安徽国家农业标准化与监测中心。本标准主要起草人：陈戈、房志杰、姚彦如、李丹亚、赵彬、吴启陆、聂磊、罗剑鸣。DB34/T1541—20111小麦粉中偶氮甲酰胺的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了小麦粉中偶氮甲酰胺的测定高效液相色谱方法。本标准适用于小麦粉中偶氮甲酰胺含量的测定本标准适用于小麦粉的风险预警监测及相关科学研究。本标准方法对于小麦粉中偶氮甲酰胺测定的最低检出量为4mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理小麦粉中偶氮甲酰胺经丙酮提取，浓缩，用正己烷除脂，高效液相色谱分析测定，外标法定量。4试剂和材料4.1除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。4.2乙酸铵：色谱纯。4.320mmol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵（4.2）溶于1000mL水中。4.4丙酮。4.5正己烷：分析纯4.6二甲基甲酰胺（DMF）：优级纯。4.7偶氮甲酰胺标准品:含量98.0％以上。4.8偶氮甲酰胺标准储备溶液：称取0.1g（精确至0.1mg）标准品用二甲基甲酰胺（4.8）溶解并定容100ml，此溶液为1mg/mL，此储备液冷藏保存，有效期为一个月。4.9偶氮甲酰胺标准工作溶液：用乙酸铵溶液（4.3）溶液将偶氮甲酰胺标准储备溶液（4.8）稀释至2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL偶氮甲酰胺标准溶液系列，此标准溶液现配现用。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：带紫外检测器。5.2分析天平：0.01g。5.3涡旋混合器。DB34/T1541—201125.4离心机，转速不低于5000r/min。5.5振荡器。5.6氮吹仪。6测定步骤6.1提取称取样品2g（精确到0.01g）于50mL离心管中，加10.0mL丙酮（4.4），在涡旋振荡混匀器（5.3）上混匀1min后，室温下振荡提取15min，5000r/min以上离心10min。取上层清液5.0mL于常温下氮吹近干，用乙酸铵溶液（4.3）定容2.0mL，再加入1.0mL正己烷（4.5）涡旋振荡2min。静置分层，取下层水相过滤膜，立即进行液相分析。6.2标准工作曲线取上述标准工作液（4.9）绘制以峰面积为纵坐标、工作溶液为横坐标的标准工作曲线。6.3空白试验取不含偶氮甲酰胺的空白试样，均按上述测定步骤进行。6.4测定6.4.1参考分析条件a)色谱柱：4.6×250mm，SB-C18反相柱或相似类型的C18柱；b)检测波长：245nm；c)流动相：100％20mmol/L乙酸铵溶液（4.3）；d)流速：0.8mL/min；e)进样量：10μL。6.4.2定量分析待测溶液偶氮甲酰胺量应在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后进样。6.4.3平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行测定。6.5结果计算偶氮甲酰胺的含量均按下式进行计算：mcX×××=0.50.100.2....................................(1)式中：X——试样中偶氮甲酰胺的含量，mg/kg；c——试样提取溶液中测得偶氮甲酰胺的浓度，mg/L；m——试样质量，g。注：计算结果保留两位有效数字。DB34/T1541—201137检测方法灵敏度和准确度7.1灵敏度偶氮甲酰胺在小麦粉中的检测限为4mg/kg。7.2准确度7.2.1本方法在4～6mg/kg添加范围浓度内，用空白添加标准校正，偶氮甲酰胺的回收率范围为91％～93％，相对标准偏差小于10％。7.2.2本方法在6～8mg/kg添加范围浓度内，用空白添加标准校正，偶氮甲酰胺的回收率范围为91％～96％，相对标准偏差小于10％。7.2.3本方法在10～20mg/kg添加范围浓度内，用空白添加标准校正，偶氮甲酰胺的回收率范围为95％～102％，相对标准偏差小于10％。DB34/T1541—20114AA附录A（资料性附录）偶氮甲酰胺标准品色谱图A.1偶氮甲酰胺标准品色谱图偶氮甲酰胺标准品色谱图见图A.1。Minutes024681012Volts0.0000.0010.0020.003图A.1偶氮甲酰胺标准品色谱图_________________________________