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ICS 65.120B46DB34安徽省地方标准DB34/T3191—2018饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定高效液相色谱法DeterminationofTiamulinFumarateinfeedHighperformanceliquidchromatographymethod文稿版次选择2018-08-08发布2018-09-08实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T3191—2018I前 言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、宁国市金鼎家庭农场、宁国市金东坊农业开展有限公司、合肥市动物卫生监督所、阜阳市动物卫生监督所、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽省水产技术推广总站。本标准起草人：吴昊、刘发全、李东风、宋亚伟、吴兵、方芳、郭恒心、徐月清、龙中原、胡群芳、张利亚、郑新勇、钱昌银、程扬、郑举、潘孝成、孙德祥、何为俊、王群、汪百才、石翠芳。DB34/T3191—20181饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定。本标准定量限为1.0mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3原理试样中的延胡索酸泰妙菌素经甲醇溶液超声提取，过滤后经色谱柱分离，用高效液相紫外检测器检测，外标法定量。4试剂和材料除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，用水符合GB/T6682中一级用水的规定。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙腈：色谱纯。4.3碳酸铵。4.4高氯酸。4.5高氯酸水溶液：取高氯酸8.5mL，加水至100mL。4.6碳酸铵缓冲液溶液：取碳酸铵10g，加水800mL使溶解，加高氯酸水溶液（4.6）24mL，加水至1000mL。4.7流动相：碳酸铵缓冲液溶液+甲醇+乙腈，按体积比49∶28∶23（V/V/V）。4.8延胡索酸泰妙菌素标准品：纯度≥98.0％。4.9延胡索酸泰妙菌素标准溶液的制备4.9.1延胡索酸泰妙菌素标准溶液贮备液：精确称取20mg延胡索酸泰妙菌素标准品(精确至0.01mg)于200mL容量瓶中，用流动相（4.8）超声溶解，冷却，此溶液浓度为100μg/mL。置于4℃冰箱中保存，有效期60天。4.9.2延胡索酸泰妙菌素标准工作溶液：分别吸取贮备液（4.10.1）1mL、2mL、5mL、10mL、20mL于100mL容量瓶中，用流动相溶液（4.8）定容，标准工作溶液系列浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。DB34/T3191—201825仪器和设备5.1高效液相色谱仪（配紫外检测器）。5.2分析天平：感量0.1mg、0.01mg。5.3离心机：≥3000r/min。5.4超声波仪。5.5分析筛：孔径0.42mm。5.6粉碎机。5.7微孔滤膜：孔径0.45μm尼龙滤膜。6试样的制备按GB/T14699.1的规定采样，选取饲料样品500ｇ以上，四分法缩减至100ｇ，磨碎，全部通过分析筛(5.5)，充分混匀，装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1提取7.1.1称取试样适量（配合饲料5.0g、浓缩饲料3.0g、预混合饲料1.0g），精确至0.001g，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶液（4.2）准确定容，置于超声波仪（5.4）超声提取30min。7.1.2将试样提取液（7.1.1）转移至离心管，3000r/min，离心10min，取离心上清液用0.45μm尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定。7.2测定7.2.1高效液相色谱条件——色谱柱：C18型柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当性能C18柱；——检测波长：212nm；——流动相：碳酸铵缓冲液溶液+甲醇+乙腈，按体积比49∶28∶23（V/V/V）；——流速：1.0mL/min；——柱温：25℃；——进样体积：20μL。7.2.2上机测定延胡索酸泰妙菌素标准工作溶液和试液（上机液）分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积进行计算。参见附录A。7.3结果的计算与表述7.3.1计算公式结果按公式(1)计算：DB34/T3191—20183...............................(1)式中：X——试样中延胡索酸泰妙菌素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C——试液色谱峰对应的延胡索酸泰妙菌素浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样质量，单位为克（g）；V——定容体积，单位为毫升（mL）；f——稀释倍数。7.3.2结果表示平行测定结果用算术平均值表示，计算结果保留3位有效数字。8精密度同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10％。DB34/T3191—20184AA附录A（资料性附录）延胡索酸泰妙菌素标准图谱图A.1延胡索酸泰妙菌素标准溶液色谱图_________________________________