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ICS65.120B46DB37山东省地方标准DB37/T1678—2010饲料中三聚氰胺的快速测定检测卡法Rapiddeterminationofmelamineinfeeds—Teststrip2010-10-19发布2010-11-01实施山东省质量技术监督局发布DB37/T1678—2010I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13原理..............................................................................14试剂和材料........................................................................15仪器..............................................................................16试样的制备........................................................................27检测卡的验证......................................................................27.1阴性样品验证..................................................................27.2阳性样品验证..................................................................27.3检测卡的综合评价..............................................................28分析步骤..........................................................................28.1提取..........................................................................28.2样品检测......................................................................29结果判定..........................................................................310结果确认与表述...................................................................310.1呈现阳性反应的样品...........................................................310.2呈现阴性反应的样品...........................................................3附录A（规范性附录）三聚氰胺检测卡判定示意图........................................4DB37/T1678—2010II前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省饲料质量检验所。本标准起草人：李会荣、宫玲玲、孟凡胜、强莉、李斌。DB37/T1678—20101饲料中三聚氰胺的快速测定检测卡法1范围本标准规定了用检测卡快速测定饲料中三聚氰胺的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和单一饲料。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195试样制备NY/T1372饲料中三聚氰胺的测定3原理将三聚氰胺和三聚氰胺抗体分别包被在检测卡纤维素膜的不同带区；滴加在膜条一端的试液在毛细管作用下渗移，与检测卡上的三聚氰胺和三聚氰胺抗体发生竞争抑制免疫反应，胶体金显色定性。4试剂和材料除非另有说明，仅使用分析纯试剂。水，GB/T6682，三级。4.1甲醇溶液：200mL甲醇加入800mL水，混刀。4.2提取液：0.1moL/L盐酸溶液，量取盐酸0.83mL，加水至100mL。4.3氢氧化钠溶液：1moL/L，称取氢氧化钠4.00g，加水至100mL。4.4三聚氰胺标准储备液:准确称取50mg三聚氰胺标准品(含量≥98%)，用甲醇溶液（4.1）溶解并定容至50mL，该溶液浓度为1.0mg/mL。4℃冰箱中贮存，有效期3个月。4.5三聚氰胺标准工作液:准确移取1.00mL三聚氰胺标准储备液（4.4），用甲醇溶液（4.1）定容至100mL，该溶液浓度为10μg/mL。4℃冰箱中贮存，有效期1个月。4.6一次性滴管。4.7三聚氰胺检测卡。不同品牌检测卡的组成略有差别。4.8三聚氰胺阴性样品：自己制备或经仪器确证的不含有三聚氰胺的样品。5仪器5.1天平：感量0.1mg。DB37/T1678—201025.2离心机：转速3000r/min以上。5.3离心管：10mL、1.5mL。5.4移液枪：50μL、100μL、1000μL。5.5漩涡混合器。6试样的制备按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，缩分至约200g，按照GB/T20195制备样品，过0.45mm孔径的分析筛，混刀备用。7检测卡的验证7.1阴性样品验证每一批次按5%的比例抽取检测卡，最少抽取一个，使用阴性样品（4.8）依检测卡说明书测定步骤做阴性验证试验。如果有一个及以上检测卡不符合时，在同一批次内加倍随机抽取检测卡做阴性验证试验验。再次抽取检测卡的验证试验应全部符合。7.2阳性样品验证称取阴性饲料样品（4.8）1g（精确至0.01g）于10mL离心管（5.3）中，按说明书标识的检测限（≤2.5mg/kg）,用移液枪（5.4）移取三聚氰胺标准工作液（4.5）加入离心管内，充分混合，配制成含三聚氰胺的样品。每一批次按10%的比例抽取检测卡，最少抽取两个，使用该样品依检测卡说明书测定步骤做阳性验证试验。如果有一个及以上检测卡不符合时，在同一批次内加倍随机抽取检测卡做阳性验证试验。再次抽取检测卡的验证试验应全部符合。7.3检测卡的综合评价在确认阴性验证试验和阳性验证试验同时符合时，该批次的检测卡方可使用。8分析步骤8.1提取称取饲料试样1g（精确至0.01g）于10mL离心管（5.3）中，加提取液（4.5）5.00mL，在漩涡混合器上混合2min或剧烈振荡5min后。过滤或离心5min。取适量滤液或上清液于1.5mL离心管(5.3)中，用氢氧化钠溶液（4.3）调pH至7～8后，取100μL于1.5mL离心管(5.3)中，加100μL蒸馏水混刀备用。8.2样品检测检测卡（4.7）放置于水平台面上恢复至检测卡要求的温度后，取出检测卡进行检测。检测卡即开即用。用一次性滴管吸取试液（8.1），垂直滴加3～4滴于检测卡（4.7）样孔内。在加液过程中勿使试料溶液溢出加样孔。加样后开始计时，在5min～10min内判读结果。注：不同品牌的检测卡其测定步骤略有差别，使用不同品牌检测卡时，试料的提取方法和测试步骤根据检测卡的说明书进行。DB37/T1678—201039结果判定9.1检测卡无效检测卡的质控区C线未显示红色条带（见附录A中图A.1）。此情况下，应用新的检测卡重新测定。9.2阳性反应检测卡的质控区C线显示一条红色条带，测试区T线未出现红色条带（见附录A中图A.2）。9.3阴性反应检测卡的质控区C线出现一条红色条带,测试区T线显示一条比质控区C线深或浅的红色条带（见附录A中图A.3）。10结果确认与表述10.1呈现阳性反应的样品样品中三聚氰胺的含量高于检测限。应用NY/T1372进行确认。10.2呈现阴性反应的样品样品中三聚氰胺含量低于检测限（X＜mg/L）。注：每一品牌的检测卡其检出限不同，以供应商提供的说明书明示的检出限为准。DB37/T1678—20104AA附录A（规范性附录）三聚氰胺检测卡判定示意图A.1无效检测卡示意图质控区（C）未显示红色条带（见图A.1）。CTCT图A.1无效检测卡示意图A.2阳性反应示意图质控区（C）显示红色条带，测试区（T）未显示红色条带（见图A.2）。图A.2阳性反应示意图A.3阴性反应示意图质控区（C）显示红色条带，测试区（T）显示深或浅的红色条带（见图A.3）。图A.3阴性反应示意图_________________________________CTCTCT