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ICS67.120.30B50DB37山东省地方标准DB37/T2095—2012水产品中乙酰甲喹残留量的测定液相色谱法DeteminationofMequindoxResiduesinFisheryProductsbyHPLC2012-03-21发布2012-05-01实施山东省质量技术监督局发布DB37/T2095—2012I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省海洋与渔业厅提出。本标准由山东省海洋渔业标准化专业技术委员会归口。本标准起草单位：山东省海洋水产研究所、山东省水产品质量检验中心。本标准主要起草人：宫向红，邹荣婕，徐英江，张世娟，李佳蔚，任传博，张华威。DB37/T2095—20121水产品中乙酰甲喹残留量的测定液相色谱法1范围本标准规定了水产品中乙酰甲喹残留量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于水产品中乙酰甲喹残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理样品用二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶液提取，正己烷去脂，用高效液相色谱仪进行测定，外标法定量。4试剂和材料4.1所用试剂除另有规定外，均为分析纯。4.2试剂和材料主要包括：——试验用水：应符合GB/T6682中一级水的规定；——二氯甲烷；——乙酸乙酯；——甲醇：色谱纯；——正己烷；——二氯甲烷-乙酸乙酯混合提取液：二氯甲烷体积分数为75﹪；——乙酰甲喹标准品：纯度≥99﹪；——乙酰甲喹标准贮备溶液：准确称取0.01g（精确至0.0001g）乙酰甲喹，用甲醇溶解并定容至100mL，配成浓度为100µg/mL的标准贮备液，置4℃冰箱保存，保存期不超过3个月；——乙酰甲喹标准工作液：取乙酰甲喹标准贮备液，用流动相稀释成浓度范围为0.05µg/mL～1µg/mL的标准工作液。5仪器和设备主要包括：——高效液相色谱仪，配有紫外检测器；——旋转蒸发仪；——离心机：7000r/min；DB37/T2095—20122——分析天平：感量0.00001g；——天平：感量0.01g；——超声波清洗器；——旋涡混合器；——具塞玻璃离心管：10mL；——100mL梨形瓶；——50mL塑料离心管；——微孔滤膜：有机系，0.45µm。6试样测定6.1样品的制备虾类去头、壳、肠线，贝类、蟹类去壳，鱼类去骨、内脏。取可食部分用高速分散匀质机匀浆，备用。如不能及时检测，-18℃以下冷冻保存备用。6.2样品的提取称取匀浆后的样品5g（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加20mL二氯甲烷-乙酸乙酯混合提取液，振摇混匀，超声提取15min，4000r/min离心10min，将提取液移至100mL梨形瓶中，残渣用15mL二氯甲烷-乙酸乙酯混合提取液重复提取1次，合并上清液于上述梨形瓶中，40℃旋转蒸发至近干。6.3样品的净化向蒸发至近干的梨形瓶中加入1.00mL流动相，漩涡溶解残渣，转移至10mL具塞离心管中，加入5mL正己烷，漩涡混合1min，4000r/min离心10min，弃去上层正己烷，下层溶液过0.45µm微孔滤膜后，供液相色谱分析。6.4测定6.4.1色谱条件主要包括以下几项：a)色谱柱：MGC18柱,250mm×4.6mm（i.d.），5µm；或性能相当者；b)流动相：甲醇-水（甲醇体积分数为50﹪）；c)流速：0.8mL/min；d)检测波长：373nm；e)柱温：30℃；f)进样量：20µL。6.4.2标准曲线绘制取乙酰甲喹标准贮备液，用流动相稀释成适当浓度的系列标准工作液。分别取20µL进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算线性方程。6.4.3液相色谱测定在6.4.1色谱条件下对样品溶液进行测定，响应值应在仪器检测线性范围内。标准品保留时间参考值为：5.632min(见附录A)。DB37/T2095—201237空白试验除不加试样外，均按6进行测定。8结果计算试样中乙酰甲喹残留量按公式（1）计算，计算结果需扣除空白值，结果保留三位有效数字。1000××=mVCX....................................(1)式中：X——试样中乙酰甲喹残留量，µg/kg；C——试样溶液中乙酰甲喹的浓度，µg/mL；V——试样溶液最终体积，mL；M——试样质量，g。9灵敏度本方法检出限为10μg/kg；定量限为20μg/kg。10准确度本方法添加浓度为20μg/kg～200μg/kg时，回收率为70﹪～90﹪。11精密度批内相对标准偏差≤10﹪，批间相对标准偏差≤15﹪。12方法的线性范围本方法的线性范围为50μg/L～1000μg/L。DB37/T2095—20124AA附录A（资料性附录）色谱图5.632AU0.00000.00050.00100.00150.00200.00250.0030分钟0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.508.008.509.009.5010.00图A.1200μg/L乙酰甲喹标准溶液色谱图AU-0.0010-0.00050.00000.00050.00100.00150.0020分钟0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.508.008.509.009.5010.00图A.2鲤鱼空白色谱图乙酰甲喹-5.622AU-0.00020.00000.00020.00040.00060.00080.00100.00120.00140.00160.00180.00200.00220.0024分钟0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.508.008.509.009.5010.00图A.3鲤鱼加标色谱图（添加量为20µg/kg）_________________________________