DB42T 808-2012 饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲毒霉素A和桔毒素的测定 高效液

ICS62.120B20备案号：33839-2012DB42湖北省地方标准DB42/T808—2012饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和桔霉素的测定高效液相色谱法DeterminationofaflatoxinB1,zearalenone,ochratoxinAandcitrinininfeed-HPLCmethod2012-03-01发布2012-05-01实施湖北省质量技术监督局发布DB42/T808—2012I目次前言....................................................................................................................................................................II1范围..............................................................................................................................................................12规范性引用文件..........................................................................................................................................13原理..............................................................................................................................................................14试剂与材料..................................................................................................................................................15仪器与设备..................................................................................................................................................26采样..............................................................................................................................................................37试样制备......................................................................................................................................................38分析步骤......................................................................................................................................................38.1提取与净化...........................................................................................................................................38.2测定.......................................................................................................................................................3附录A（资料性附录）标准工作液色谱图（四通道）............................................................................5图A.1黄曲霉毒素B1标准工作液的色谱图...........................................................................................5图A.2玉米赤霉烯酮标准工作液的色谱图.............................................................................................5图A.3赭曲霉毒素标准工作液的色谱图.................................................................................................5图A.4桔霉素标准工作液的色谱图.........................................................................................................5附录B（资料性附录）标准工作液色谱图（程序波长）.........................................................................6图B.1黄曲霉毒素B1，玉米赤霉烯酮，赭曲霉毒素和桔霉素标准工作液的色谱图........................6DB42/T808—2012II前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由湖北省农业科学院提出并归口。本标准起草单位：湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、华中农业大学、重庆市畜牧科学院。本标准主要起草人：胡定金、周有祥、彭祥伟、李书谦、王小红、陈建彪、路磊、董丽娜、夏虹、解华东。DB42/T808—20121饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和桔霉素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和桔霉素的高效液相色谱测定的原理、试剂与材料、仪器与设备、采样、试验制备及分析步骤。本标准适用于湖北省畜禽配合饲料、饲用谷物原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和桔霉素的测定。本标准的方法检测限：黄曲霉毒素B1为8μg/kg，玉米赤霉烯酮为260μg/kg，赭曲霉毒素A为10μg/kg，桔霉素为25μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样中的黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和桔霉素，经乙腈-水酸性溶液提取，浓缩至干，以正己烷除杂，乙腈定容，通过带有荧光检测器的液相色谱系统分析，保留时间定性，外标法定量。4试剂与材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的二级水。4.1乙腈：色谱纯。4.2磷酸：85%（质量分数）。4.3冰乙酸。4.4正己烷。4.5无水硫酸镁。4.6氯化钠。4.7次氯酸钠：化学纯。4.8黄曲霉毒素B1标准品：纯度≥98%。4.9玉米赤霉烯酮标准品：纯度≥98%。4.10赭曲霉毒素A标准品：纯度≥98%。4.11桔霉素标准品：纯度≥98%。DB42/T808—201224.12黄曲霉毒素B1标准储备溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素B1标准品（4.8），用乙腈（4.1）配制成1.0×10-2g/L的黄曲霉毒素B1标准储备液，避光保存于4℃冰箱备用。4.13玉米赤霉烯酮标准储备溶液：准确称取适量的玉米赤霉烯酮标准品（4.9），用乙腈（4.1）配制成5.0×10-2g/L的玉米赤霉烯酮标准储备液，避光保存于4℃冰箱备用。4.14赭曲霉毒素A：准确称取适量的赭曲霉毒素A标准品（4.10），用乙腈（4.1）配制成1.0×10-2g/L的赭曲霉毒素A标准储备液，避光保存于4℃冰箱备用。4.15桔霉素标准储备液：准确称取适量的桔霉素标准品（4.11），用乙腈（4.1）配制成5.0×10-2g/L的桔霉素标准储备液，避光保存于4℃冰箱备用。4.16混合标准溶液工作液取适量四种标准储备液至10mL容量瓶（5.8）中，加乙腈（4.1）稀释至刻度，现配现用，按照表1规定进行。表1真菌毒素混合标准溶液（单位为克每升）项目名称标准溶液1标准溶液2标准溶液3标准溶液4标准溶液5黄曲霉毒素B15.0×10-51.0×10-41.5×10-42.0×10-44.0×10-4玉米赤霉烯酮5.0×10-41.0×10-31.5×10-32.0×10-34.0×10-3赭曲霉毒素A5.0×10-51.0×10-41.5×10-42.0×10-44.0×10-4桔霉素2.5×10-45.0×10-47.5×10-41.0×10-32.0×10-3注1：如需单独检测，可使用表1中的单一标准溶液。注2：黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和桔霉素是有毒有害物质，测定时应特别注意安全防护。测定应在通风橱或者生物安全柜中进行并戴手套，尽量减少暴露。凡是接触过毒素的物品，应用次氯酸钠溶液（4.20）浸泡1小时以上；如皮肤接触到毒素，应立即用次氯酸钠溶液清洗，再用自来水冲洗。4.17酸性提取液吸取12mL冰乙酸（4.3），以水定容至100mL，摇匀待用。4.18流动相A取5mL磷酸（4.2）加入1000mL水中。临用前，过0.45μm滤膜（5.12）。4.19流动相B色谱纯乙腈（4.1）。4.20次氯酸钠溶液称取106g次氯酸钠（4.7）溶解于1000mL水中，其中有效氯含量不低于5%。5仪器与设备5.1分析天平，感量0.0001g。5.2分样筛：孔径0.45mm。5.3粉碎机。5.4漩涡混合器。5.5摇床。5.6旋转蒸发仪。5.71mL可调移液器。5.810mL棕色容量瓶。5.9250mL圆底磨口烧瓶。5.1050mL具塞PVC离心管。DB42/T808—201235.112mL带盖PVC离心管。5.120.45μm微孔滤膜（适用于水溶剂）。5.130.45μm微孔滤膜（适用于有机溶剂）。5.14离心机，配有50mL离心管适配器，最大转速为4000r/min。5.15氮吹仪。5.16高效液相色谱仪，配有荧光检测器。6采样按照GB/T14699.1的规定执行。7试样制备按照GB/T20195制备试样，磨碎样品并全部通过分样筛（5.2），充分混匀，避光保存备用。8分析步骤8.1提取与净化8.1.1试样提取称取10g试样（精确至0.0001g），分装于2个50mL离心管（5.10）中，各加入15mL酸性提取液（4.17），旋紧管盖，在漩涡混合器（5.4）上剧烈振荡2min，置于摇床（5.5）振摇20min。取出离心管，各管添加20mL乙腈（4.1），再次振