DBS22 005-2012 食品安全地方标准 粮食中多组分除草剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

DBS22吉林省地方标准DBS22/005—2012食品安全地方标准粮食中多组分除草剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法2012-12-10发布2013-01-01实施吉林省卫生厅发布DBS22/005—2012I前言本标准的附录A、B为资料性附录。本标准起草单位：吉林省疾病预防控制中心。本标准起草人：刘思洁、方赤光、李青、崔勇、张博、石矛。DBS22/005—20121食品安全地方标准粮食中33种除草剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了粮食中33种除草剂残留量的测定方法。本标准适用于豆类、谷物中的33种除草剂残留量测定。本标准方法的检出限见附录A中表A.1。2原理以含乙腈-50mmol/LHCl(1:1)作为提取溶液，利用C18固相萃取柱（500mg，3mL）对样品进行净化，液相色谱-串联质谱法测定33种除草剂的残留量。采用基质加标工作曲线外标法定量。3试剂和材料除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。3.1甲醇：色谱纯。3.2乙腈：色谱纯。3.3无水硫酸钠。3.4N-丙基乙二胺（PSA)。3.5盐酸（50mmol/L）。3.6提取溶液：V（乙腈）：V（50mmol/LHCl）=1:1。3.70.1%甲酸。3.8标准品：33种除草剂标准品（西码通、敌草净、西码津、嗪草酮、扑草净、特丁津、莠去津、异丙净、特丁净、阿特拉通、苄嘧磺隆、噻吩磺隆、甲磺隆、醚苯磺隆、氟磺隆、氯嘧磺隆、咪唑烟酸、甲氧咪草烟、咪唑乙烟酸、灭草喹、咪草酸酯、甲基咪草烟、异乐灵、二甲戊乐灵、氨磺乐灵、敌稗、异丙甲草胺、丁草胺、双氯磺草胺、2,4-滴、苯达松、草甘膦、绿麦隆），纯度95%。3.9标准储备液：分别称取10.0mg的33种除草剂，置于10mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并定容，于4℃条件下保存。3.10标准系列溶液：分别吸取上述各储备溶液，用乙腈稀释，配成浓度为1.0μg/mL的混和标准储备溶液。根据需要,用乙腈稀释上述混合标准储备溶液,配制成不同浓度的混合标准系列溶液。3.11C18固相萃取柱（500mg，3mL）。3.12微孔滤膜：0.22µm，有机相。4仪器和设备DBS22/005—201224.1液相色谱-串联质谱联用仪。4.2电子分析天平：感量0.1mg。4.3冷冻高速离心机（15000r/min）。4.4固相萃取装置。4.5振荡器。4.6氮吹仪。4.7粉碎机。4.8涡旋混合器。4.9旋转蒸发仪。4.10筛子：孔径为0.45mm。5分析步骤5.1试样制备与保存称取约500g粮食样品，粉碎，过0.45mm孔径筛，按四分位法制备样品。取混合均匀后的空白样品，作为空白试样。5.2提取准确称取样品5g于50mL离心管中，加入25mL乙腈，振荡30min，以10000r/min离心5min。残渣再加入25mL提取溶液（4.6），振荡30min,10000r/min离心5min后,合并上清液,过装有20gNa2SO4的漏斗(石英棉塞底),35ºC水浴旋转蒸发,待剩约1mL溶液时,停止蒸发,转移溶液于离心管中,用水定容至5mL,加150mgPSA,涡漩振荡1min后于4ºC下10000r/min离心10min,并将离心管在4ºC下放置20min。5.3净化C18小柱依次用5mL乙腈,5mL水活化,吸取2.5mL离心后的澄清液加入到C18小柱,收集流出液。然后用6mL乙腈洗脱,收集流出液。将流出液用氮气吹干后,用10%乙腈定容至1mL，过0.22μm滤膜后液相色谱-串联质谱测定。5.4基质加标工作曲线的制备称取5.0g空白样品基质于50mL离心管中，称取6份，分别加入混合标准系列溶液100μL，按6.2和6.3进行操作，根据需要,制备不同浓度的基质加标标准工作曲线。5.5测定5.5.1参考色谱条件色谱柱：BEHC18(2.1mm×100mm，1.7μm)或相当者。柱温：30℃。流动相：A相：含0.1%甲酸水溶液；B相：乙腈。梯度洗脱情况见表1。表1梯度洗脱程序DBS22/005—20123时间（min）流速（mL/min）流动相A流动相B0.00.4802010.00.4257511.00.4109012.00.4109015.00.48020进样量：10μL。5.5.2参考质谱条件离子化方式：采用ESI（+）、ESI（-）；扫描方式：多反应监测MRM；毛细管电压：3.5kV；源温度：110℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量650L/h。质谱分析优化参数见表2表233种除草剂定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量化合物锥孔电压（v）母离子（m/z）定性/定量离子（m/z）碰撞能量（eV）西码通40198.2128.1/124.220敌草净40214.282.1/172.218西码津40202.2104.1/132.120嗪草酮40215.2171.2/187.320扑草净40242.2200.1/158.125特丁津40230.2104.2/174.215莠去津40216.296.1/174.218异丙净40256.3172.2/144.128特丁净40242.291.1/186.120阿特拉通40212.2100.1/170.118苄嘧磺隆30411.1181.8/149.022噻吩磺隆30388.1141.1/167.120甲磺隆22382.1198.4/167.116醚苯磺隆27402.1167.1/141.121氟磺隆27420.1167.0/141.020氯嘧磺隆25415.1213.0/186.018咪唑烟酸40262.2234.3/217.320甲氧咪草烟40306.3278.3/261.318咪唑乙烟酸40290.3262.4/245.320灭草喹40312.2267.4/270.318咪草酸酯40289.3257.3/229.320甲基咪草烟40276.2248.3/231.320异乐灵30310.3264.0/226.218二甲戊乐灵30282.3252.0/212.315氨磺乐灵30344.4239.4/283.520敌稗35218.2127.1/162.115异丙甲草胺29284.3250.1/176.220DBS22/005—20124丁草胺25312.3162.0/238.210双氯磺草胺35406.2239.0/161.0232,4-滴28219.0125.0/160.815苯达松-40239.0175.0/132.0-25草甘膦-30167.962.8/149.8-10绿麦隆30213.1140.1/71.7205.5.3测定在上述仪器条件下测定基质加标标准溶液及样品溶液。各检测目标化合物以保留时间和特征离子与定量离子所对应的液相色谱-串联质谱色谱峰面积相对丰度进行定性。要求被测试样中目标化合物的保留时间与标准溶液中目标化合物保留时间的相对偏差小于20%；样品特征离子的相对丰度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度＞50%20%—50%10%—20%＜10%允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%5.5.4空白试验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。5.5.5色谱图色谱图参见附录B中图B.1。6结果计算以标准溶液浓度对定量离子峰面积绘制标准曲线，外标法定量。10001000XmVc....................................(1)式中：X——样品中目标化合物含量，单位为微克每千克（μg/kg）；c——测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V——定容体积，单位为毫升（mL）；m——最终样液代表的试样量，单位为克（g）。注：计算结果需将空白值扣除。7精密度7.1准确度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。在重现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。7.2精密度DBS22/005—20125本方法添加浓度为5μg/kg～20μg/kg时，33种除草剂加标回收率见附录A中表A.2。DBS22/005—20126A在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。A附录A（资料性附录）表A.133种除草剂的检出限化合物英文名称CAS号检出限(μg/kg)西码通simeton673-04-10.03敌草净desmetryn1041-69-30.03西码津simazine122-34-90.03嗪草酮metribuzin21087-64-91.50扑草净prometryn7287-19-60.03特丁津terbutylazine5915-41-30.15莠去津atrazine1912-24-90.30异丙净dipropetryn4147-51-70.13特丁净terbutryn886-50-00.03阿特拉通atraton1610-17-90.15苄嘧磺隆bensulfronmethyl83055-99-60.03噻吩磺隆thifensulfuron79277-67-10.03甲磺隆metsulfuron79510-48-80.03醚苯磺隆triasulfuron82097-50-50.30氟磺隆prosulfuron94125-34-50.15氯嘧磺隆chlorimuron99283-00-80.15咪唑烟酸imazapyr81334-34-70.03甲氧咪草烟imazamox114311-32-90.03咪唑乙烟酸imazethapyr81385-77-50.03灭草喹imazaquin81335-37-70.03咪草酸酯imazamethabenzmethyl81405-85-80.03甲基咪草烟imazapic104098-48-80.03异乐灵isopropalin33820-53-01.50二甲戊乐灵pendimethalin40487-42-11.50氨磺乐灵oryzalin19044-88-31.50敌稗propanil709-98-80.70异丙甲草胺metolachlor51218-45-20.70丁草胺butachlor23184-66-90.70双氯磺草胺diclosulam145701-21-91.502,4-滴2,4-D94-75-71.50苯达松bentazone25057-89-00.70草甘膦glyphosate1071-83-61.50绿麦隆chlorotoluron15545-48-90.15DBS22/005—20127表A.233种除草剂不同基质、三个水平添加回收率范围化合物添加水平（μg/kg）大豆/%玉米/%大米/%小麦/%578.7～89.580.3～90.184.6～92.581.7～88.41081.3～88.879.9～92.483.8～90.678.4～89.7西码通2080.4～94.183.2～93.282.7～92.882.5～91.9572.3～81.275.1～88.879.6～89.776.4～87.61073.1～86.373.5～87.476.4～88.775.2～90.1敌草净2074.6～87.272.6～90.575.8～90.373.6～91.7580.5～91.482.7～91.880.0～93.481.7～98.21077.9～92.083.4～94.381.2～93.884.1～95.3西码津2082.2～93.683.8～94.983.5～95.183.8～96.2575.8～87.976.4～97.180.0～95.682.2～101.71079.5～94.077.7～95.983.7～103.485.3～96.1嗪草酮2080.4～95.387.1～96.685.2～97.183.8～98.0577.5～96.189.1～103.676.7～92.582.4～90.71080.2～95.885.6～97.177.4～93.