DBS22 002-2012 食品安全地方标准 豆芽中6-苄氨基嘌呤的测定 高效液相色谱法

DBS22吉林省地方标准DBS22/002—2012食品安全地方标准豆芽中6-苄氨基嘌呤的测定高效液相色谱法2012-12-10发布2013-01-01实施吉林省卫生厅发布DBS22/002—2012I前言本标准的附录A为资料性附录。本标准起草单位：国家农业深加工产品质量监督检验中心、吉林省产品质量监督检验院。本标准主要起草人：石金娥、华蕾、王庆峰、古乐、郎乐、刘斌、刘静秋、李宁、刘桂华、张爽。DBS22/002—20121食品安全地方标准豆芽中6-苄氨基嘌呤的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了豆芽中6-苄氨基嘌呤测定的高效液相色谱方法。本标准适用于豆芽中6-苄氨基嘌呤的含量测定。本标准方法检出限为0.02mg/kg。2原理试样中的6-苄氨基嘌呤经酸化乙腈-水溶液超声提取后，高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。3试剂和材料除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。3.1乙腈：色谱纯。3.2甲醇：色谱纯。3.3冰醋酸。3.46-苄氨基嘌呤：含量≥97%。3.5乙腈-水溶液：量取60mL乙腈（4.1），加入40mL水中，混匀。3.6样品提取液：每100mL乙腈水溶液（4.5）中加入冰醋酸（4.3）50μL。3.76-苄氨基嘌呤标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取0.0500g6-苄氨基嘌呤标准品，用甲醇（4.2）溶解并定容于50.0mL容量瓶中，4℃下保存，有效期2个月。3.86-苄氨基嘌呤标准工作液：准确吸取5.0mL6-苄氨基嘌呤标准储备液（4.7）于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此溶液浓度为50.0mg/L。分别吸取上述溶液用样品提取液（4.6）稀释，配制成浓度依次为0.02mg/L、0.10mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L的标准工作液。现用现配。3.9活性炭（颗粒状）：在烘箱中120℃活化4h。3.10微孔滤膜：0.45μm，水相。4仪器和设备4.1液相色谱仪：配有紫外检测器。4.2天平：感量0.1mg和0.01g。4.3超声波仪：功率大于180W。4.4离心机：转速不低于4000r/min。4.5组织捣碎机。5分析步骤DBS22/002—201225.1试样制备样品经组织捣碎机捣碎混匀后备用。5.2试样处理称取10g（精确到0.01g）试样（6.1）于25mL比色管中，分别加入1g活性炭（4.9）和20mL提取液（4.6），混匀后超声提取20min，转移试样至50mL离心管中，4000r/min离心10min，将上清液全部转移至50mL容量瓶中；残渣用提取液再次提取，离心后合并上清液，用提取液定容至50mL，经0.45μm微孔滤膜过滤后，供液相色谱测定。5.3液相色谱测定5.3.1液相色谱参考条件a）色谱柱：XDB-C18，4.6mm×250mm，5.0μm或等效色谱柱；b）流动相：甲醇+乙腈+水（40+5+55，体积比）；c)流速：1.0mL/min；d）柱温：28℃；e）进样体积：10.0μL；f）测定波长：267nm。5.3.2定量测定将标准工作液分别进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中的6-苄氨基嘌呤均应在仪器测定的线性范围内。6-苄氨基嘌呤标准样品及加标试样色谱图参见附录A。6结果计算测定结果可由仪器工作站自动计算，也可按式（1）计算：10001000mVcX....................................(1)式中：X——样品中6-苄氨基嘌呤的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c——由标准曲线计算得试液中6-苄氨基嘌呤的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；m——称取样品质量，单位为克（g）。计算结果保留三位有效数字。7重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。DBS22/002—20123A在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。A附录A（资料性附录）6-苄氨基嘌呤标准样品及加标样品色谱图图A.16-苄氨基嘌呤标准溶液的液相色谱图图A.2图A.2加标绿豆芽样品中6-苄氨基嘌呤的液相色谱图DBS22/002—20124图A.3加标黄豆芽样品中6-苄氨基嘌呤的液相色谱图_________________________________