DB63T 1671-2018 青稞中直链淀粉和支链淀粉含量的测定 分光光度法

ICS67.050X04备案号：60229-2018DB63青海省地方标准DB63/T1671—2018青稞中直链淀粉和支链淀粉含量的测定分光光度法Determinationofamylaseandamylopectincontentinhullessbarley——Spectrophotometry2018-06-25发布2018-09-25实施青海省质量技术监督局发布DB63/T1671—2018I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13术语和定义........................................................................13.1................................................................................1直链淀粉amylase................................................................13.2................................................................................1支链淀粉amylopectin............................................................14原理..............................................................................15试剂和材料........................................................................25.1试剂..........................................................................25.2标准品........................................................................25.3试剂配制......................................................................25.4标准溶液配制..................................................................26仪器和设备........................................................................27分析步骤..........................................................................27.1样品溶液的制备................................................................27.2双波长直链淀粉和支链淀粉标准曲线绘制..........................................37.3测定..........................................................................38结果的计算........................................................................39结果表示..........................................................................410精密度...........................................................................4DB63/T1671—2018II前言本标准依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由中国科学院西北高原生物研究所提出并归口。本标准起草单位：中国科学院西北高原生物研究所、青海省水文地质工程地质环境地质调查院。本标准主要起草人：谭亮、胡风祖、李玉林、董琦、周蔚、杨生豪、杨生鸿。DB63/T1671—20181青稞中直链淀粉和支链淀粉含量的测定分光光度法1范围本标准规定了青稞中直链淀粉和支链淀粉含量的测定——分光光度法的术语、定义、原理、试剂、材料、仪器、设备、分析步骤、结果计算、结果表示和精密度。本标准适用于青稞中含量大于4.0%直链淀粉、含量大于10.0%支链淀粉的测定。其他粮食作物包括麦类粮食（小麦、燕麦）、粗粮类粮食（藜麦、玉米）、豆类粮食（蚕豆、豌豆）、薯类粮食（马铃薯）中直链淀粉和支链淀粉的测定可参照本标准执行。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20264粮食、油料水分两次烘干测定法GB/T21305谷物及谷物制品水分的测定常规法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1直链淀粉amylase淀粉中的多聚糖成分，其葡萄糖单元（D-葡萄糖基）主要以直链状结构α-(1,4)糖苷键连接成的大分子。3.2支链淀粉amylopectin淀粉中的多聚糖成分，其葡萄糖单元（D-葡萄糖基）主要以支链状结构α-(1,6)糖苷键连接成的大分子。4原理直链淀粉和支链淀粉与碘试剂作用分别产生纯蓝色和紫红色复合物，在测定波长和参比波长分别在563nm和511nm处测定直链淀粉显色复合物的吸光度值，在测定波长和参比波长分别为542nm和722nm处测定支链淀粉显色复合物的吸光度值，其各自两个波长的吸光度差值与该溶质浓度成正比。DB63/T1671—201825试剂和材料5.1试剂5.1.1氢氧化钠：分析纯。5.1.2冰乙酸：分析纯。5.1.3碘化钾：分析纯。5.1.4碘：分析纯。5.1.5无水乙醇：分析纯。5.1.6实验用水：应符合GB/T6682规定的三级水要求。5.2标准品5.2.1直链淀粉标准品：来源于马铃薯淀粉，纯度≥98%。5.2.2支链淀粉标准品：来源于马铃薯淀粉，纯度≥98%。5.3试剂配制5.3.11mol/L氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠固体（准确至±0.001g），加水溶解，转移至1000mL容量瓶中，混匀，定容。5.3.21mol/L冰乙酸溶液：移取57.3mL冰乙酸至1000mL容量瓶中，加水稀释，混匀，定容。5.3.3碘试剂：称取2g碘化钾（准确至±0.001g），加入水以形成饱和溶液，再加入0.2g碘（准确至±0.001g），待碘全部溶解后转移至l00mL容量瓶中，混匀，定容。现配现用，避光保存。5.4标准溶液配制5.4.1直链淀粉标准溶液（1.0mg/mL）：称取50.0mg直链淀粉标准品（准确至±0.1mg），置于50mL容量瓶中，加入10mL1mol/L氢氧化钠溶液，置沸水浴中溶解分散后，取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀。5.4.2支链淀粉标准溶液（1.0mg/mL）：称取50.0mg支链淀粉标准品（准确至±0.1mg），置于50mL容量瓶中，加入10mL1mol/L氢氧化钠溶液，置沸水浴中溶解分散后，取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀。6仪器和设备6.1分析天平：感量为±0.0001g和±0.001g。6.2分光光度仪：具有1cm比色皿，可在400nm~900nm范围内测量吸光度。6.3pH计：精度为0.01。6.4涡旋混合器：旋速大于等于2800转/分。6.5水浴锅。6.6粉碎机：可将青稞粉碎并通过250μm（60目）筛。6.7容量瓶：25mL。7分析步骤7.1样品溶液的制备DB63/T1671—201837.1.1称取50mg~100mg（准确至±1mg）已粉碎过60目筛的青稞样品，置于25mL容量瓶中，加入0.5mL无水乙醇，涡旋以润湿样品。7.1.2加入2mL1mol/L氢氧化钠溶液，涡旋混匀，置沸水浴中加热2min，取出涡旋30s，如此重复5次。7.1.3冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，过滤备用。7.2双波长直链淀粉和支链淀粉标准曲线绘制7.2.1双波长直链淀粉标准曲线7.2.1.1准确移取按“5.4.1”要求配制的直链淀粉标准溶液0mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL分别置于25mL容量瓶中。7.2.1.2加入15mL水，以1mol/L冰乙酸溶液调节pH为3.5，再加入0.25mL碘试剂，继续加水稀释至刻度，摇匀。7.2.1.3静置15min后，用1cm比色皿，分别在563nm、511nm两波长处测定吸光度，以两吸光度差值为纵坐标，直链淀粉质量（mg）为横坐标，绘制双波长直链淀粉标准曲线。7.2.2双波长支链淀粉标准曲线7.2.2.1准确移取按“5.4.2”要求配制的支链淀粉标准溶液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、3.0mL分别置于25mL容量瓶中。7.2.2.2以下按“7.2.1.2”要求进行操作。7.2.2.3静置15min后，用1cm比色皿，分别在542nm、722nm两波长处测定吸光度，以两吸光度差值为纵坐标，支链淀粉质量（mg）为横坐标，绘制双波长支链淀粉标准曲线。7.3测定7.3.1准确移取两份按“7.1”要求制备的样品溶液各1.0mL分别置于25mL容量瓶中（一份作为样品空白对照液，另一份作为样品测定液）。7.3.2加入15mL水，以1mol/L冰乙酸溶液调节pH为3.5，在样品测定液中加入0.25mL碘试剂，样品空白对照液中不加碘试剂，均加水稀释至刻度，摇匀。7.3.3静置15min后，分别在563nm、511nm波长处测定直链淀粉吸光度及在542nm、722nm波长处测定支链淀粉吸光度，并分别在双波长直链淀粉和支链淀粉标准曲线上查得相应两吸光度差值所对应的淀粉质量（mg），即可计算出青稞样品中直链淀粉和支链淀粉含量，二者之和即为总淀粉含量。8结果的计算直链淀粉、支链淀粉和总淀粉的含量（以干基计，按GB/T20264、GB/T21305测定水分）的质量分数，分别按公式（1）、公式（2）、公式（3）计算：111m1001mVVmw.................................(1)222m1001mVVmw................................(2)12.......................................(3)DB63/T1671—20184式中：1——青稞中直链淀粉（以干基计）的含量，单位为克每百克（g/100g）；2——青稞中支链淀粉（以干基计）的含量，单位为克每百克（g/100g）；——青稞中总淀粉（以干基计）的含量，单位为克每百克（g/100g）；1m——从双波长直链淀粉标准曲线上查得供试品溶液中直链淀粉质量，单位为毫克(mg)；2m——从双波长支链淀粉标准曲线上查得供试品溶液中支链淀粉质量，单位为毫克(mg)；12VV、——