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ICS01.040.65B40/49备案号：35833-2013DB63青海省地方标准DB63/T1166—2012散养牛人工授精技术操作规程2012-12-04发布2013-01-01实施青海省质量技术监督局发布DB63/T1166—20121前言本规程的编写符合GB/T1.1-2009的规则。本规程由青海大学提出并归口。本规程起草单位：青海省畜牧兽医科学院。本规程起草人：徐尚荣，彭巍，孙建，张君，赛琴，赵婷静，陈光宏，许存有，靳智勇。DB63/T1166—20122散养牛人工授精技术操作规程1范围本规程规定了散养牛人工授精技术的基本操作方法和操作要求。舍饲奶牛和肉用牛可借鉴本标准执行。本规程适用于细管冻精和性控冻精的牛人工授精操作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4143牛冷冻精液GB/T5458液氮生物容器3冷冻精液的保存和解冻3.1冷冻精液的保存3.1.1液氮液态生物容器在运输过程中要注意防热、防震、防碰撞，容器外部加上保护套或其它保护装置。3.1.2液氮罐的条件必须符合GB5458液氮生物容器，液氮罐必须每年清洗一次。3.2冷冻精液的解冻3.2.1冷冻精液必须液态生物容器中，运输和贮藏过程中均不能脱离液态生物容器液氮。每批精液人工授精前必须精液品质检查，精子活率检查：参照GB4143牛冷冻精液规定执行。每年繁殖季节开始前和新引进精液后，必须进行精子活力的检查，精液活力低于0.35，精液不能使用；定期检查并及时添加液态生物容器中的液氮，液氮量不能少于液态生物容器的1/3。3.2.2取冻精时，液氮罐中盛放冻精的提斗不能超过液氮罐的颈部，精液在空气中的停留时间不超过10秒。3.2.3细管冻精解冻时直接把细管投入38℃-40℃温水中，10秒-12秒钟后取出，即冻精颜色由乳白色变为黄色即可。3.2.4解冻精液在输精前应保存17℃-20℃温度下，以保持精液的活力。在解冻后1小时内输精，最迟不能超过2小时。4发情鉴定4.1外部观察法DB63/T1166—201234.1.1试情法母牛主动接受试情公牛爬跨、不避让认定为发情。4.1.2观察法母牛主动接受同圈舍母牛爬跨、从阴门流出大量粘稠的黏液，且黏液透明，牵缕不断，为发情。4.1.3计步器法母牛通过佩戴计步器，利用接收器统计牛的运动量达到发情标准判定为发情。4.2直肠检查法直肠检查卵巢上有成熟卵泡，无持久黄体，卵泡弹性较好，且两侧卵巢体积差别明显，可以进行人工授精。对于不同年龄、不同营养状况的发情牛，配种时间的安排因区别对待，青年牛发情排卵时间较其他牛晚，经产且营养状况良好牛次之，营养状况差的牛发情排卵最快。4.3B超检查法B超检查是通过B超探头对卵巢及卵泡发育进行视频观察，若发现卵巢上有成熟卵泡即可输精。5输精器械5.1消毒药品酒精75%，2%-5%新洁尔灭液或0.1%高锰酸钾溶液。5.2器械与现有输精枪外套乡匹配的输精枪两把，长镊子（20厘米）以上两把，精液剪一把，水浴锅或500毫升的平底容器一个，100度温度计一支，一次性输精枪外套，长臂塑料手套，消毒纱布一块或毛巾一条。6人工授精6.1输精时间发现母牛主动接受爬跨后6小时-10小时进行输精，12小时后进行第二次输精。青年牛输精时间稍推迟2小时，老年牛输精时间可以稍提2小时。6.2消毒方法6.2.1输精器械消毒6.2.1.1输精前消毒精液剪、输精枪和装好精液的输精枪外套用75%的酒精擦拭消毒。6.2.1.2输精后消毒精液剪，输精枪清洗干净后擦拭并用75%的酒精消毒，放置于干燥处下一次输精。DB63/T1166—201246.2.2发情牛外阴消毒助手将牛尾牵引至配种员方便操作的一侧固定，或配种员将牛尾牵引至不影响自己操作的一侧并固定，充分暴露外阴，用2%-5%新洁尔灭液或0.1%高门酸钾溶液清洗外阴（洗净外阴的粪便和其他如分泌物干痂及皮屑等），然后用消毒过的毛巾或纱布擦拭干净。6.3直肠把握深部精法配种员一只手戴上一次性塑料长臂手套，用干净温水沾湿手臂或手臂沾上石蜡油呈锥形旋转伸入直肠,寻找子宫颈，用中指、食指无名指和拇指握住子宫颈外口端，使子宫颈外口端与小拇指形成的环口持平。并用伸入直肠的手臂压开阴门裂，另一只手持输精管由阴门缓慢插入，先斜向上再转成水平。然后借助握子宫颈外口处的手与持输精管的手进行密切的配合，使输精管缓缓进入子宫颈深部，即有优势卵泡发育侧子宫角大弯处，再缓缓的注入精液。输入精液后再缓慢旋转抽出输精枪。7配种登记和饲养管理7.1配种登记见附录A。7.2饲养管理配种后加强母牛饲养管理，仔细观察采食、运动等日常行为，观察是否再出现发情。8妊娠诊断最后一次发情配种后20天-60天进行怀孕诊断。8.1直肠检查法最后一次配种35天-60天通过直肠检查触摸卵巢和子宫角判定是否怀孕。检查时，先摸到子宫颈，再将手指向前滑动，寻找角间沟；然后将手向前、向下、再向后，试把两个子宫角都掌握在手内，分别触摸。这时可先握住子宫颈将子宫角向后拉，然后手带着肠管迅速向前滑动，握住子宫角，这样逐渐向前移，就能摸清整个子宫角。摸过子宫角后，在其尖端外侧或下侧寻找卵巢。一侧卵巢上有突出于卵巢表面的怀孕黄体（卵巢上同时似有多个卵泡发育，似由許多個小球堆成一個大的球体或圆锥体，触摸时卵巢似蜂窝狀），且比另一侧卵巢大2陪以上，且两侧卵巢质地均较柔软即为怀孕；妊娠40天-60天的角间沟清楚，两角之间的分岔仍然明显，只是两子宫角大小不对称，妊娠角较空角粗1-2倍，角壁变薄变软有波动。8.2B超诊断法在最后一次配种20天后利用7.5Hz直肠探头在母牛子宫进行探查胚泡的形成情况和卵巢的妊娠黄体形成情况，为提高准确率45天-60天重复检查一次。DB63/T1166—20125A附录A(资料性附录)散养牛配种登记表表A.1散养牛配种登记表养殖户姓名牛号精液号配种时间怀孕结果预产期备注_________________________________