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ICS67.200.10X14DB61陕西省地方标准DB61/T967—2015植物油中苯并[a]芘的测定液相色谱-荧光检测法Determinationofbenzo[α]pyreneinvegetableoil—Liquidchromatographywithfluorescencedetector2015-05-25发布2015-07-01实施陕西省质量技术监督局发布DB61/T967—2015I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准附录A、附录B均为资料性附录。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由陕西出入境检验检疫局提出。本标准由陕西省质量技术监督局归口。本标准由陕西出入境检验检疫局负责解释。本标准起草单位：陕西出入境检验检疫局。本标准主要起草人：何强、孔祥虹、李建华、张璐、邹阳、李莹、付骋宇、包仁书。本标准首次发布。联系信息如下：单位：陕西出入境检验检疫局；电话：029-85407235；地址：西安市含光北路10号；邮编：710068。DB61/T967—20151植物油中苯并[a]芘的测定液相色谱-荧光检测法1范围本标准规定了植物油中苯并[a]芘含量的液相色谱-荧光检测方法。本标准适用于花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、稻米油、胡麻油、调和油、菜籽油、橄榄油、芝麻油中苯并[a]芘含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样用正己烷溶解后，芝麻油样品经硅胶固相萃取柱串联聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物固相萃取柱净化、其他植物油经聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物固相萃取柱净化，用液相色谱-荧光检测仪检测，外标法定量。4术语和定义下列术语和定义适用于本标准。4.1定量限LimitofQuantity指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。5试剂和材料警告：苯并[a]芘是一种已知的强致癌物质，应注意危险品操作规则。5.1除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.2乙腈：色谱纯。5.3二氯甲烷：色谱纯。5.4正己烷：色谱纯。5.5乙腈-水（95+5，V/V）：取950mL乙腈和50mL水，混合均匀。5.6苯并[a]芘标准物质（Benzo[a]pyrene,C20H12,CAS:50-32-8）：纯度不小于99％。5.7苯并[a]芘标准储备溶液：准确称取适量的苯并[a]芘标准物质，用二氯甲烷配制成1000μg/mL的标准储备溶液，0℃～4℃保存。DB61/T967—201525.8苯并[a]芘标准工作溶液：测定时根据需要用乙腈逐级稀释，配制成适当浓度的标准工作溶液，常用浓度范围为0.5ng/mL～20ng/mL，0℃～4℃保存。5.9聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱：500mg/6mL或相当者，使用前依次用3mL二氯甲烷、5mL正己烷活化。5.10硅胶固相萃取柱：500mg/6mL或相当者，使用前用5mL正己烷活化。5.11微孔滤膜：0.2μm，有机系。6仪器和设备6.1液相色谱仪：配有荧光检测器。6.2分析天平：感量0.01mg、0.01g。6.3涡旋混匀器。6.4固相萃取装置。6.5具塞离心管或试管：10mL～15mL。6.6氮气吹干仪。6.7超声波提取仪。7测定步骤7.1提取净化7.1.1花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、稻米油、胡麻油、调和油、菜籽油、橄榄油称取试样0.5g（精确至0.001g）于15mL离心管中，加入3mL正己烷，涡旋溶解，上样于聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱中，用2mL正己烷洗涤样品管，将洗涤液一并上样于柱中，待样品溶液流至近干后，用5mL正己烷淋洗，弃去所有流出液，用5mL二氯甲烷洗脱，收集二氯甲烷洗脱液，整个固相萃取过程保持流速1mL/min～2mL/min，于40℃氮气吹干，用1.00mL乙腈超声10s溶解定容，过0.2μm有机系微孔滤膜，供液相色谱检测。如果个别样品出现回收率偏低、色谱基线不稳定的情况，可以采用本标准7.1.2的方法进行样品净化。7.1.2芝麻油称取试样0.5g（精确至0.001g）于15mL离心管中，加入3mL正己烷，涡旋溶解，将硅胶固相萃取柱串联在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱上端，将样品溶液上样于串联柱中，再用2mL正己烷洗涤样品管，将洗涤液一并上样于柱中，待样品溶液流至近干后，用5mL正己烷淋洗串联固相萃取柱，淋洗完成后去除硅胶固相萃取柱，用5mL二氯甲烷洗脱聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱，收集二氯甲烷洗脱液，整个固相萃取过程保持流速1mL/min～2mL/min，于40℃氮气吹干，用1.00mL乙腈超声10s溶解定容，过0.2μm有机系微孔滤膜，供液相色谱检测。7.2测定7.2.1液相色谱条件测定时的液相色谱条件如下：a)色谱柱：多环芳烃分析专用柱（C18填料），长250mm，内径4.6mm，粒径5μm；b)流动相：乙腈-水（95+5，V/V）等度洗脱；DB61/T967—20153c)柱温：35ºC；d)荧光检测器：激发波长384nm，发射波长406nm；e)流速：1.5mL/min；f)进样量：20μL。7.2.2液相色谱测定根据样液中苯并[a]芘含量情况，选定浓度与样液浓度相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中苯并[a]芘的响应值均应在仪器检测范围内，如果样液中苯并[a]芘含量超出检测的范围，则稀释后再进样。对标准工作溶液和样液等体积分时段参插进样测定，以保留时间定性，外标法定量，在本标准7.2.1给定的液相色谱荧光检测条件下，苯并[a]芘标准品的液相色谱图参见附录A中图A.1。7.3空白试验除不加试样外，均按上述检测步骤进行。7.4结果计算和表述7.4.1用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中苯并[a]芘含量（μg/kg）：10001000×××××=mAVcAXss…………………………………………（1）式中：X——试样中苯并[a]芘的含量（μg/kg）；A——样液中苯并[a]芘的色谱峰面积；cs——标准工作液中苯并[a]芘的浓度（ng/mL）；V——样液最终定容体积（mL）；As——标准工作液中苯并[a]芘的色谱峰面积；m——试样质量（g）。7.4.2计算结果应扣除空白值。计算结果保留两位有效数字。8检出限、定量限、回收率和精密度8.1检出限、定量限本方法的检出限为0.3μg/kg，定量限为1.0μg/kg。8.2回收率和精密度苯并[a]芘的回收率及精密度数据参见附录B中表B.1。DB61/T967—20154AA附录A（资料性附录）苯并[a]芘标准品液相色谱图A.1苯并[a]芘标准品液相色谱图苯并[a]芘标准品液相色谱图如图A.1所示。图A.1苯并[a]芘标准品溶液（5.0ng/mL）液相色谱图DB61/T967—20155BB附录B（资料性附录）苯并[a]芘的添加回收率及精密度数据B.1植物油中苯并[a]芘的添加回收率及精密度数据如表B.1所示。表B.1植物油中苯并[a]芘的添加回收率及精密度数据样品名称加标水平/（μg/kg）回收率范围/%平均回收率/%相对标准偏差/%花生油5.079.3～103.689.69.810.080.4～99.788.97.120.081.5～99.089.86.9大豆油1.078.1～98.687.97.65.080.9～98.488.67.110.081.9～101.190.17.7玉米胚芽油1.078.9～97.487.97.55.079.8～98.188.86.810.081.4～100.689.27.4葵花籽油2.077.3～102.589.89.85.078.2～99.289.17.810.079.9～99.789.27.8稻米油1.079.7～101.288.98.65.080.6～99.789.57.710.079.9～100.290.18.3胡麻油5.077.8～106.889.111.810.079.7～99.489.67.520.082.8～102.189.87.7坚果调和油2.077.9～99.288.29.15.078.1～98.488.97.410.079.5～101.890.08.2菜籽油1.078.5～99.688.48.15.079.6～97.988.97.110.080.4～99.689.47.4橄榄油1.079.4～100.988.88.45.080.0～101.389.98.210.082.5～102.890.88.0芝麻油1.078.4～100.387.28.95.079.4～99.888.57.610.081.3～101.289.77.5