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中华人民共和国国家标准GB1886.257—2016食品安全国家标准食品添加剂溶菌酶2016-08-31发布2017-01-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布GB1886.257—20161食品安全国家标准食品添加剂溶菌酶1范围本标准适用于以鸡蛋清为原料,经提取、精制等工艺制得的食品添加剂溶菌酶。2技术要求2.1感官要求感官要求应符合表1的规定。表1感官要求项目要求固体液体检验方法色泽白色至淡黄色浅黄色至深褐色状态粉末液体将适量试样均匀置于烧杯或白瓷盘内,于自然光线下观察其色泽和状态2.2理化指标理化指标应符合表2的规定。表2理化指标项目指标固体液体检验方法酶活力/[U/mg(mL)]符合标示值附录A中A.2水分,w/%≤6—GB5009.3灰分,w/%≤1.50.3GB5009.4pH3.0~7.0附录A中A.3铅(Pb)/(mg/kg)≤2.0GB5009.12总砷(以As计)/(mg/kg)≤1.0GB5009.112.3微生物指标微生物指标应符合表3的规定。GB1886.257—20162表3微生物指标项目指标检验方法菌落总数/[CFU/g(mL)]≤50000GB4789.2霉菌和酵母/[CFU/g(mL)]≤100GB4789.15大肠埃希氏菌/[MPN/g(mL)]3.0GB4789.38沙门氏菌/25g(mL)不得检出GB4789.4金黄色葡萄球菌/25g(mL)不得检出GB4789.10定性检验GB1886.257—20163附录A检验方法A.1一般规定本标准除另有规定外,所用试剂的纯度应在分析纯以上,所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品,应按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备,实验用水应符合GB/T6682中三级水的规定。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。A.2酶活力的测定A.2.1方法原理溶菌酶可水解细菌的细胞壁,造成藤黄微球菌的溶解而引起溶液吸光度值的降低。一个溶菌酶活力单位定义为25℃,pH6.2条件下,使用藤黄微球菌悬浊液在450nm处每分钟引起吸光度变化为0.001所需溶菌酶的量。A.2.2试剂和材料A.2.2.1藤黄微球菌:ATCC4698或CICC10680。A.2.2.20.1mol/L磷酸盐缓冲液:pH6.2。称取11.70g磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)、7.86g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)及0.372g乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)于无菌水中并稀释定容至1000mL。调整缓冲溶液pH至6.2±0.1。注:用小份缓冲溶液检查pH,以避免缓冲溶液被污染。如果需要,通过加入更多的磷酸二氢钠溶液或磷酸氢二钠溶液调整pH。A.2.2.3溶菌酶标准品:蛋清溶菌酶。A.2.2.4底物溶液:用磷酸盐缓冲液制备50mL藤黄微球菌悬浊液。使用前,底物于37℃培养30min。该底物溶液室温下可稳定2h。以磷酸盐缓冲液调分光光度计零点,然后测定底物溶液的吸光度,450nm下读数应为0.70±0.1。A.2.3仪器和设备A.2.3.1分光光度计:精度±0.001。A.2.3.2pH计。注:所用的器皿应保持无菌,保证工作环境的清洁。A.2.4分析步骤A.2.4.1试样溶液的制备准确称取100mg±0.1mg试样,置于50mL容量瓶中,用约25mL磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容,充分混匀。再转移3mL上述试样制备溶液至100mL容量瓶中,用磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容。GB1886.257—20164A.2.4.2标准溶液的制备精确称取50mg蛋清溶菌酶标准品于50mL容量瓶中,用约25mL磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容,充分混匀(如果需要,冷冻该溶液以备后续测定)。转移3mL上述标准制备溶液至100mL容量瓶中,用磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容。A.2.4.3测定取3份标准溶液和3份试样溶液进行测定。25℃室温下,将1cm比色皿放入分光光度计,用磷酸盐缓冲液调整吸光度零点。吸2.9mL底物溶液于比色皿,最初450nm处吸光度应为0.70±0.10,3min之内初始吸光度值变化应小于或等于0.003时,方可开始测定。吸取0.1mL标准溶液加入底物溶液,充分混合。记录3min吸光度值的变化,每15s记录一次吸光度值。每分钟吸光度值变化应在0.03~0.08,若不在要求范围需调整试样溶液的浓度。重复操作测定试样溶液。反应1min后稳定,计算时忽略最初1min的读数。A.2.4.4结果计算酶活力X,按式(A.1)计算:X=(A1-A2)2×m×0.001……………………………(A.1)式中:A1———试样在450nm处反应1min时的吸光度;A2———试样在450nm处反应3min时的吸光度;m———用于分析的试样制备溶液中的溶菌酶质量,单位为毫克(mg);2———获得1min和3min吸光度读数所用的时间,单位为分钟(min);0.001———由单位溶菌酶每分钟引起的吸光度降低的值。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。A.3pH的测定A.3.1仪器A.3.1.1酸度计:精度0.01pH,备有玻璃电极和甘汞电极(或复合电极)。A.3.2分析步骤按仪器使用说明书调试和校正酸度计。用无菌水配制15g/L的溶菌酶待测液(液体产品直接测定)。用水冲洗电极探头,用滤纸轻轻吸干,将电极插入待测液中,调节温度调节器,使仪器指示温度与待测液温度相同,稳定后读数。所得结果表示至一位小数。