GB 5009.9-2016 食品安全国家标准 食品中淀粉的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.9—2016食品安全国家标准食品中淀粉的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.9—2016Ⅰ前言本标准代替GB/T5009.9—2008《食品中淀粉的测定》、GB/T5514—2008《粮油检验粮食、油料中淀粉含量测定》、GB/T9695.14—2008《肉制品淀粉含量测定》。本标准与GB/T5009.9—2008相比,主要变化如下:———增加了低含量样品测定操作;———增加了试剂空白测定;———修改了第一法中的计算公式;———增加了第三法肉制品中淀粉含量测定。GB5009.9—20161食品安全国家标准食品中淀粉的测定1范围本标准规定了食品中淀粉的测定方法。本标准第一法和第二法适用于食品(肉制品除外)中淀粉的测定;第三法适用于肉制品中淀粉的测定,但不适用于同时含有经水解也能产生还原糖的其他添加物的淀粉测定。第一法酶水解法2原理试样经去除脂肪及可溶性糖后,淀粉用淀粉酶水解成小分子糖,再用盐酸水解成单糖,最后按还原糖测定,并折算成淀粉含量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂3.1.1碘(I2)。3.1.2碘化钾(KI)。3.1.3高峰氏淀粉酶:酶活力≥1.6U/mg。3.1.4无水乙醇(C2H5OH)或95%乙醇。3.1.5石油醚:沸程为60℃~90℃。3.1.6乙醚(C4H10O)。3.1.7甲苯(C7H8)。3.1.8三氯甲烷(CHCl3)。3.1.9盐酸(HCl)。3.1.10氢氧化钠(NaOH)。3.1.11硫酸铜(CuSO4·5H2O)。3.1.12酒石酸钾钠(C4H4O6KNa·4H2O)。3.1.13亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。3.1.14亚甲蓝(C16H18ClN3S·3H2O):指示剂。3.1.15甲基红(C15H15N3O2):指示剂。3.1.16葡萄糖(C6H12O6)。3.2试剂配制3.2.1甲基红指示液(2g/L):称取甲基红0.20g,用少量乙醇溶解后,加水定容至100mL。GB5009.9—201623.2.2盐酸溶液(1+1):量取50mL盐酸与50mL水混合。3.2.3氢氧化钠溶液(200g/L):称取20g氢氧化钠,加水溶解并定容至100mL。3.2.4碱性酒石酸铜甲液:称取15g硫酸铜及0.050g亚甲蓝,溶于水中并定容至1000mL。3.2.5碱性酒石酸铜乙液:称取50g酒石酸钾钠、75g氢氧化钠,溶于水中,再加入4g亚铁氰化钾,完全溶解后,用水定容至1000mL,贮存于橡胶塞玻璃瓶内。3.2.6淀粉酶溶液(5g/L):称取高峰氏淀粉酶0.5g,加100mL水溶解,临用时配制;也可加入数滴甲苯或三氯甲烷防止长霉,置于4℃冰箱中。3.2.7碘溶液:称取3.6g碘化钾溶于20mL水中,加入1.3g碘,溶解后加水定容至100mL。3.2.8乙醇溶液(85%,体积比):取85mL无水乙醇,加水定容至100mL混匀。也可用95%乙醇配制。3.3标准品D-无水葡萄糖(C6H12O6)纯度:≥98%(HPLC)。3.4标准溶液配制葡萄糖标准溶液:准确称取1g(精确到0.0001g)经过98℃~100℃干燥2h的D-无水葡萄糖,加水溶解后加入5mL盐酸,并以水定容至1000mL。此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖。4仪器和设备4.1天平:感量为1mg和0.1mg。4.2恒温水浴锅:可加热至100℃。4.3组织捣碎机。4.4电炉。5分析步骤5.1试样制备5.1.1易于粉碎的试样将样品磨碎过0.425mm筛(相当于40目),称取2g~5g(精确到0.001g),置于放有折叠慢速滤纸的漏斗内,先用50mL石油醚或乙醚分5次洗除脂肪,再用约100mL乙醇(85%,体积比)分次充分洗去可溶性糖类。根据样品的实际情况,可适当增加洗涤液的用量和洗涤次数,以保证干扰检测的可溶性糖类物质洗涤完全。滤干乙醇,将残留物移入250mL烧杯内,并用50mL水洗净滤纸,洗液并入烧杯内,将烧杯置沸水浴上加热15min,使淀粉糊化,放冷至60℃以下,加20mL淀粉酶溶液,在55℃~60℃保温1h,并时时搅拌。然后取1滴此液加1滴碘溶液,应不显现蓝色。若显蓝色,再加热糊化并加20mL淀粉酶溶液,继续保温,直至加碘溶液不显蓝色为止。加热至沸,冷后移入250mL容量瓶中,并加水至刻度,混匀,过滤,并弃去初滤液。取50.00mL滤液,置于250mL锥形瓶中,加5mL盐酸(1+1),装上回流冷凝器,在沸水浴中回流1h,冷后加2滴甲基红指示液,用氢氧化钠溶液(200g/L)中和至中性,溶液转入100mL容量瓶中,洗涤锥形瓶,洗液并入100mL容量瓶中,加水至刻度,混匀备用。5.1.2其他样品称取一定量样品,准确加入适量水在组织捣碎机中捣成匀浆(蔬菜、水果需先洗净晾干取可食部GB5009.9—20163分),称取相当于原样质量2.5g~5g(精确到0.001g)的匀浆,以下按5.1.1自“置于放有折叠慢速滤纸的漏斗内”起依法操作。5.2测定5.2.1标定碱性酒石酸铜溶液吸取5.00mL碱性酒石酸铜甲液及5.00mL碱性酒石酸铜乙液,置于150mL锥形瓶中,加水10mL,加入玻璃珠两粒,从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液,控制在2min内加热至沸,保持溶液呈沸腾状态,以每两秒一滴的速度继续滴加葡萄糖,直至溶液蓝色刚好褪去为终点,记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积,同时做三份平行,取其平均值,计算每10mL(甲、乙液各5mL)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量m1(mg)。注:也可以按上述方法标定4mL~20mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)来适应试样中还原糖的浓度变化。5.2.2试样溶液预测吸取5.00mL碱性酒石酸铜甲液及5.00mL碱性酒石酸铜乙液,置于150mL锥形瓶中,加水10mL,加入玻璃珠两粒,控制在2min内加热至沸,保持沸腾以先快后慢的速度,从滴定管中滴加试样溶液,并保持溶液沸腾状态,待溶液颜色变浅时,以每两秒一滴的速度滴定,直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录试样溶液的消耗体积。当样液中葡萄糖浓度过高时,应适当稀释后再进行正式测定,使每次滴定消耗试样溶液的体积控制在与标定碱性酒石酸铜溶液时所消耗的葡萄糖标准溶液的体积相近,约在10mL左右。5.2.3试样溶液测定吸取5.00mL碱性酒石酸铜甲液及5.00mL碱性酒石酸铜乙液,置于150mL锥形瓶中,加水10mL,加入玻璃珠两粒,从滴定管滴加比预测体积少1mL的试样溶液至锥形瓶中,使在2min内加热至沸,保持沸腾状态继续以每两秒一滴的速度滴定,直至蓝色刚好褪去为终点,记录样液消耗体积。同法平行操作三份,得出平均消耗体积。结果按式(1)计算。当浓度过低时,则采取直接加入10.00mL样品液,免去加水10mL,再用葡萄糖标准溶液滴定至终点,记录消耗的体积与标定时消耗的葡萄糖标准溶液体积之差相当于10mL样液中所含葡萄糖的量(mg)。结果按式(2)、式(3)计算。5.2.4试剂空白测定同时量取20.00mL水及与试样溶液处理时相同量的淀粉酶溶液,按反滴法做试剂空白试验。即:用葡萄糖标准溶液滴定试剂空白溶液至终点,记录消耗的体积与标定时消耗的葡萄糖标准溶液体积之差相当于10mL样液中所含葡萄糖的量(mg)。按式(4)、式(5)计算试剂空白中葡萄糖的含量。6分析结果的表述6.1试样中葡萄糖含量按式(1)计算:X1=m150250×V1100…………………………(1)式中:X1———所称试样中葡萄糖的量,单位为毫克(mg);m1———10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)相当于葡萄糖的质量,单位为毫克(mg);50———测定用样品溶液体积(mL);GB5009.9—20164250———样品定容体积(mL);V1———测定时平均消耗试样溶液体积,单位为毫升(mL);100———测定用样品的定容体积(mL)。6.2当试样中淀粉浓度过低时葡萄糖含量按式(2)、式(3)进行计算:X2=m250250×10100…………………………(2)m2=m11-V2Vsæèçöø÷…………………………(3)式中:X2———所称试样中葡萄糖的质量,单位为毫克(mg);m2———标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖标准溶液的体积与加入试样后消耗的葡萄糖标准溶液体积之差相当于葡萄糖的质量,单位为毫克(mg);50———测定用样品溶液体积(mL);250———样品定容体积(mL);10———直接加入的试样体积(mL);100———测定用样品的定容体积(mL);m1———10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)相当于葡萄糖的质量,单位为毫克(mg);V2———加入试样后消耗的葡萄糖标准溶液体积,单位为毫升(mL);Vs———标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖标准溶液的体积,单位为毫升(mL)。6.3试剂空白值按式(4)、式(5)计算:X0=m050250×10100…………………………(4)m0=m11-V0Vsæèçöø÷…………………………(5)式中:X0———试剂空白值,单位为毫克(mg);m0———标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖标准溶液的体积与加入空白后消耗的葡萄糖标准溶液体积之差相当于葡萄糖的质量,单位为毫克(mg);50———测定用样品溶液体积(mL);250———样品定容体积(mL);10———直接加入的试样体积(mL);100———测定用样品的定容体积(mL);V0———加入空白试样后消耗的葡萄糖标准溶液体积,单位为毫升(mL);Vs———标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖标准溶液的体积,单位为毫升(mL)。6.4试样中淀粉的含量按式(6)计算:X=(X1-X0)×0.9m×1000×100或X=(X2-X0)×0.9m×1000×100……………(6)式中:X———试样中淀粉的含量,单位为克每百克(g/100g);0.9———还原糖(以葡萄糖计)换算成淀粉的换算系数;m———试样质量,单位为克(g)。GB5009.9—20165结果1g/100g,保留两位有效数字。结果≥1g/100g,保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第二法酸水解法8原理试样经除去脂肪及可溶性糖类后,其中淀粉用酸水解成具有还原性的单糖,然后按还原糖测定,并折算成淀粉。9试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。9.1试剂9.1.1盐酸(HCl)。9.1.2氢氧化钠(NaOH)。9.1.3乙酸铅(PbC4H6O4·3H2O)。9.1.4硫酸钠(Na2SO4)。9.1.5石油醚:沸点范围为60℃~90℃。9.1.6乙醚(C4H10O)。9.1.7无水乙醇(C2H5OH)或95%乙醇。9.1.8甲基红(C15H15N3O2):指示剂。9.1.9精密pH试纸:6.8~7.2。9.2试剂配制9.2.1甲基红指示液(2g/L):称取甲基红0.20g,用少量乙醇溶解后,加水定容至100mL。9.2.2氢氧化钠溶液(400g/L):称取40g氢氧化钠加水溶解后,冷却至室温,稀释至100mL。9.2.3乙酸铅溶液(200g/L):称取20g乙酸铅,加水溶解并稀释至100mL。9.2.4硫酸钠溶液(100g/L):称取10g硫酸钠,加水溶解并稀释至100mL。9.2.5盐酸溶液(1+1):量取50mL盐酸,与50mL水混合。9.2.6乙醇(85%V/V):取85mL无水乙醇,加水定容至100mL混匀。也可用95%乙醇配制。9.3标准品D-无水葡萄糖(C6H12O6),纯度:≥98%(HPLC)。9.4标准溶液配制葡萄糖标准溶液:准确称取1g(精确至0.0001g)经过98℃~100℃干燥2h的D-无水葡萄糖,加水溶解后加入5mL盐酸,并以