GB 5009.33-2016 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.33—2016食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.33—2016Ⅰ前言本标准代替GB5009.33—2010《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》、NY/T1375—2007《植物产品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定离子色谱法》、NY/T1279—2007《蔬菜、水果中硝酸盐的测定紫外分光光度法》、SN/T3151—2012《出口食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定离子色谱法》。本标准与GB5009.33—2010相比,主要变化如下:———合并原第二法、第三法为第二法;———增加了蔬菜、水果中硝酸盐的测定的紫外分光光度法。GB5009.33—20161食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定1范围本标准规定了食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定方法。本标准适用于食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定。第一法离子色谱法2原理试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后,采用相应的方法提取和净化,以氢氧化钾溶液为淋洗液,阴离子交换柱分离,电导检测器或紫外检测器检测。以保留时间定性,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙酸(CH3COOH)。3.1.2氢氧化钾(KOH)。3.2试剂配制3.2.1乙酸溶液(3%):量取乙酸3mL于100mL容量瓶中,以水稀释至刻度,混匀。3.2.2氢氧化钾溶液(1mol/L):称取6g氢氧化钾,加入新煮沸过的冷水溶解,并稀释至100mL,混匀。3.3标准品3.3.1亚硝酸钠(NaNO2,CAS号:7632-00-0):基准试剂,或采用具有标准物质证书的亚硝酸盐标准溶液。3.3.2硝酸钠(NaNO3,CAS号:7631-99-4):基准试剂,或采用具有标准物质证书的硝酸盐标准溶液。3.4标准溶液的制备3.4.1亚硝酸盐标准储备液(100mg/L,以NO2-计,下同):准确称取0.1500g于110℃~120℃干燥至恒重的亚硝酸钠,用水溶解并转移至1000mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。3.4.2硝酸盐标准储备液(1000mg/L,以NO3-计,下同):准确称取1.3710g于110℃~120℃干燥至恒重的硝酸钠,用水溶解并转移至1000mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。3.4.3亚硝酸盐和硝酸盐混合标准中间液:准确移取亚硝酸根离子(NO2-)和硝酸根离子(NO3-)的标准储备液各1.0mL于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,此溶液每升含亚硝酸根离子1.0mg和硝酸GB5009.33—20162根离子10.0mg。3.4.4亚硝酸盐和硝酸盐混合标准使用液:移取亚硝酸盐和硝酸盐混合标准中间液,加水逐级稀释,制成系列混合标准使用液,亚硝酸根离子浓度分别为0.02mg/L、0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L;硝酸根离子浓度分别为0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L。4仪器和设备4.1离子色谱仪:配电导检测器及抑制器或紫外检测器,高容量阴离子交换柱,50μL定量环。4.2食物粉碎机。4.3超声波清洗器。4.4分析天平:感量为0.1mg和1mg。4.5离心机:转速≥10000r/min,配50mL离心管。4.60.22μm水性滤膜针头滤器。4.7净化柱:包括C18柱、Ag柱和Na柱或等效柱。4.8注射器:1.0mL和2.5mL。注:所有玻璃器皿使用前均需依次用2mol/L氢氧化钾和水分别浸泡4h,然后用水冲洗3次~5次,晾干备用。5分析步骤5.1试样预处理5.1.1蔬菜、水果:将新鲜蔬菜、水果试样用自来水洗净后,用水冲洗,晾干后,取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量,用食物粉碎机制成匀浆,备用。如需加水应记录加水量。5.1.2粮食及其他植物样品:除去可见杂质后,取有代表性试样50g~100g,粉碎后,过0.30mm孔筛,混匀,备用。5.1.3肉类、蛋、水产及其制品:用四分法取适量或取全部,用食物粉碎机制成匀浆,备用。5.1.4乳粉、豆奶粉、婴儿配方粉等固态乳制品(不包括干酪):将试样装入能够容纳2倍试样体积的带盖容器中,通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使试样均一化。5.1.5发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品:通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀。5.1.6干酪:取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失,研磨过程中应避免产生过多的热量。5.2提取5.2.1蔬菜、水果等植物性试样:称取试样5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量,以下相同),置于150mL具塞锥形瓶中,加入80mL水,1mL1mol/L氢氧化钾溶液,超声提取30min,每隔5min振摇1次,保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min,取出放置至室温,定量转移至100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。溶液经滤纸过滤后,取部分溶液于10000r/min离心15min,上清液备用。5.2.2肉类、蛋类、鱼类、及其制品等:称取试样匀浆5g(精确至0.001g),置于150mL具塞锥形瓶中,加入80mL水,超声提取30min,每隔5min振摇1次,保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min,取出放置至室温,定量转移至100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。溶液经滤纸过滤后,取部分溶液于10000r/min离心15min,上清液备用。GB5009.33—201635.2.3腌鱼类、腌肉类及其他腌制品:称取试样匀浆2g(精确至0.001g),置于150mL具塞锥形瓶中,加入80mL水,超声提取30min,每隔5min振摇1次,保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min,取出放置至室温,定量转移至100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。溶液经滤纸过滤后,取部分溶液于10000r/min离心15min,上清液备用。5.2.4乳:称取试样10g(精确至0.01g),置于100mL具塞锥形瓶中,加水80mL,摇匀,超声30min,加入3%乙酸溶液2mL,于4℃放置20min,取出放置至室温,加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤,滤液备用。5.2.5乳粉及干酪:称取试样2.5g(精确至0.01g),置于100mL具塞锥形瓶中,加水80mL,摇匀,超声30min,取出放置至室温,定量转移至100mL容量瓶中,加入3%乙酸溶液2mL,加水稀释至刻度,混匀。于4℃放置20min,取出放置至室温,溶液经滤纸过滤,滤液备用。5.2.6取上述备用溶液约15mL,通过0.22μm水性滤膜针头滤器、C18柱,弃去前面3mL(如果氯离子大于100mg/L,则需要依次通过针头滤器、C18柱、Ag柱和Na柱,弃去前面7mL),收集后面洗脱液待测。固相萃取柱使用前需进行活化,C18柱(1.0mL)、Ag柱(1.0mL)和Na柱(1.0mL),其活化过程为:C18柱(1.0mL)使用前依次用10mL甲醇、15mL水通过,静置活化30min。Ag柱(1.0mL)和Na柱(1.0mL)用10mL水通过,静置活化30min。5.3仪器参考条件5.3.1色谱柱:氢氧化物选择性,可兼容梯度洗脱的二乙烯基苯-乙基苯乙烯共聚物基质,烷醇基季铵盐功能团的高容量阴离子交换柱,4mm×250mm(带保护柱4mm×50mm),或性能相当的离子色谱柱。5.3.2淋洗液5.3.2.1氢氧化钾溶液,浓度为6mmol/L~70mmol/L;洗脱梯度为6mmol/L30min,70mmol/L5min,6mmol/L5min;流速1.0mL/min。5.3.2.2粉状婴幼儿配方食品:氢氧化钾溶液,浓度为5mmol/L~50mmol/L;洗脱梯度为5mmol/L33min,50mmol/L5min,5mmol/L5min;流速1.3mL/min。5.3.3抑制器。5.3.4检测器:电导检测器,检测池温度为35℃;或紫外检测器,检测波长为226nm。5.3.5进样体积:50μL(可根据试样中被测离子含量进行调整)。5.4测定5.4.1标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入离子色谱仪中,得到各浓度标准工作液色谱图,测定相应的峰高(μS)或峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰高(μS)或峰面积为纵坐标,绘制标准曲线(亚硝酸盐和硝酸盐标准色谱图见图A.1)。5.4.2试样溶液的测定将空白和试样溶液注入离子色谱仪中,得到空白和试样溶液的峰高(μS)或峰面积,根据标准曲线得到待测液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度。GB5009.33—201646分析结果的表述试样中亚硝酸离子或硝酸根离子的含量按式(1)计算:X=(ρ-ρ0)×V×f×1000m×1000…………………………(1)式中:X———试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);ρ———测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子浓度,单位为毫克每升(mg/L);ρ0———试剂空白液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度,单位为毫克每升(mg/L);V———试样溶液体积,单位为毫升(mL);f———试样溶液稀释倍数;1000———换算系数;m———试样取样量,单位为克(g)。试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以换算系数1.5,即得亚硝酸盐(按亚硝酸钠计)含量;试样中测得的硝酸根离子含量乘以换算系数1.37,即得硝酸盐(按硝酸钠计)含量。结果保留2位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他第一法中亚硝酸盐和硝酸盐检出限分别为0.2mg/kg和0.4mg/kg。第二法分光光度法9原理亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定,硝酸盐采用镉柱还原法测定。试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料,外标法测得亚硝酸盐含量。采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐,测得亚硝酸盐总量,由测得的亚硝酸盐总量减去试样中亚硝酸盐含量,即得试样中硝酸盐含量。10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。10.1试剂10.1.1亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。10.1.2乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]。10.1.3冰乙酸(CH3COOH)。10.1.4硼酸钠(Na2B4O7·10H2O)。GB5009.33—2016510.1.5盐酸(HCl,ρ=1.19g/mL)。10.1.6氨水(NH3·H2O,25%)。10.1.7对氨基苯磺酸(C6H7NO3S)。10.1.8盐酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl)。10.1.9锌皮或锌棒。10.1.10硫酸镉(CdSO4·8H2O)。10.1.11硫酸铜(CuSO4·5H2O)。10.2试剂配制10.2.1亚铁氰化钾溶液(106g/L):称取106.0g亚铁氰化钾,用水溶解,并稀释至1000mL。10.2.2乙酸锌溶液(220g/L):称取220.0g乙酸锌,先加30mL冰乙酸溶解,用水稀释至1000mL。10.2.3饱和硼砂溶液(50g/L):称取5.0g硼酸钠,溶于100mL热水中,冷却后备用。10.2.4氨缓冲溶液(pH9.6~9.7):量取30mL盐酸,加100mL水,混匀后加65mL氨水,再加水稀释至1000mL,混匀。调节pH至9.6~9.7。10.2.5氨缓冲液的稀释液:量取50mLpH9.6~9.7氨缓冲溶液,加水稀释至500mL,混匀。10.2.6盐酸(0.1mol/L):量取8.3mL盐酸,用水稀释至1000mL。10.2.7盐酸(2mol/L):量取167mL盐酸,用水稀释至1000mL。10.2.8盐酸(20%):量取20mL盐酸,用水稀释至100mL。10.2.9对氨基苯磺酸溶液(4g/L):称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于100mL