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中华人民共和国国家标准GB5009.36—2016食品安全国家标准食品中氰化物的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.36—2016Ⅰ前言本标准代替GB/T5009.36—2003《粮食卫生标准的分析方法》的4.4氰化物、GB/T5009.48—2003《蒸馏酒与配制酒卫生标准的分析方法》的4.7氰化物和GB/T8538—2008《饮用天然矿泉水检验方法》的4.45氰化物。GB5009.36—20161食品安全国家标准食品中氰化物的测定1范围本标准规定了食品中氰化物的检测方法。本标准第一法适用于蒸馏酒及其配制酒、木薯、包装饮用水、矿泉水中氰化物的检测,第二法和第三法适用于蒸馏酒及其配制酒、粮食、木薯、包装饮用水、矿泉水中氰化物的检测。第一法分光光度法2原理木薯粉、包装饮用水和矿泉水中的氰化物在酸性条件下蒸馏出的氰氢酸用氢氧化钠溶液吸收,在pH=7.0条件下,馏出液用氯胺T将氰化物转变为氯化氰,再与异烟酸-吡唑啉酮作用,生成蓝色染料,与标准系列比较定量。蒸馏酒及其配制酒在碱性条件下加热除去高沸点有机物,然后在pH=7.0条件下,用氯胺T将氰化物转变为氯化氰,再与异烟酸-吡唑啉酮作用,生成蓝色染料,与标准系列比较定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂3.1.1甲基橙(C14H14O3N3SNa):指示剂。3.1.2酚酞(C20H14O4):指示剂。3.1.3酒石酸(C4H6O6)。3.1.4氢氧化钠(NaOH)。3.1.5磷酸二氢钾(KH2PO4)。3.1.6磷酸氢二钠(Na2HPO4)。3.1.7乙酸(C2H4O2)。3.1.8异烟酸(C6H5O2N)。3.1.9吡唑啉酮(C10H10N2O)。3.1.10氯胺T(C7H7SO2NClNa·3H2O):保存于干燥器中。3.1.11无水乙醇(C2H6O)。3.1.12乙酸锌(C4H6O4Zn)。3.2试剂配制3.2.1甲基橙指示剂(0.5g/L):称取50mg甲基橙,溶于水中,并稀释至100mL。GB5009.36—201623.2.2氢氧化钠溶液(20g/L):称取2g氢氧化钠,溶于水中,并稀释至100mL。3.2.3氢氧化钠溶液(10g/L):称取1g氢氧化钠,溶于水中,并稀释至100mL。3.2.4乙酸锌溶液(100g/L):称取10g乙酸锌,溶于水中,并稀释至100mL。3.2.5氢氧化钠溶液(2g/L):量取10mL氢氧化钠溶液(3.2.2),用水稀释至100mL。3.2.6氢氧化钠溶液(1g/L):量取5mL氢氧化钠溶液(3.2.2),用水稀释至100mL。3.2.7乙酸溶液(1+24):将乙酸和水按1∶24的体积比混匀。3.2.8酚酞-乙醇指示液(10g/L):称取1g酚酞试剂,用无水乙醇溶解,并定容至100mL。3.2.9磷酸盐缓冲溶液[(0.5mol/L)pH7.0]:称取34.0g无水磷酸二氢钾和35.5g无水磷酸氢二钠,溶于水并稀释至1000mL。3.2.10异烟酸-吡唑啉酮溶液:称取1.5g异烟酸溶于24mL氢氧化钠溶液(3.2.2)中,加水至100mL,另称取0.25g吡唑啉酮,溶于20mL无水乙醇中,合并上述两种溶液,摇匀。临用时配制。3.2.11氯胺T溶液(10g/L):称取1g氯胺T溶于水中,并稀释至100mL。临用时配制。3.3标准溶液配制3.3.1水中氰成分分析标准物质(50μg/mL):标准物质编号为GBW(E)080115。3.3.2氰离子标准中间液(1μg/mL):取2mL水中氰成分分析标准物质(3.3.1),用氢氧化钠溶液(3.2.5)定容至100mL。4仪器与设备4.1可见分光光度计。4.2分析天平:感量为0.001g。4.3具塞比色管:10mL。4.4恒温水浴锅:37℃±1℃。4.5电加热板:120℃±1℃。4.6500mL水蒸气蒸馏装置。5分析步骤5.1木薯粉5.1.1称取20g(精确到0.001g)试样于500mL水蒸气蒸馏装置中,加水约200mL,塞严瓶口,在室温下磁力搅拌2h。然后加入20mL乙酸锌溶液和2.0g酒石酸,迅速连接好蒸馏装置,将冷凝管下端插入盛有10mL20g/L氢氧化钠溶液的100mL锥形瓶①的液面下。进行水蒸气蒸馏,收集蒸馏液接近100mL时,取下锥形瓶①;同时将冷凝管下端插入盛有10mL20g/L氢氧化钠溶液的100mL锥形瓶②的液面下,重复蒸馏至收集蒸馏液约80mL时,停止加热,继续收集蒸馏液近100mL,取下锥形瓶②;取下蒸馏瓶并将其内容物充分搅拌、混匀,再将冷凝管下端插入盛有10mL20g/L氢氧化钠溶液的100mL锥形瓶③的液面下,进行水蒸气蒸馏,至锥形瓶③收集蒸馏液约50mL,取下锥形瓶③。将上述锥形瓶①、②和③收集的蒸馏液完全转移至250mL(V1)容量瓶中,用水定容至刻度。量取10mL溶液(V2)置于25mL比色管中,作为试样溶液。5.1.2用移液管分别量取0.0mL、0.3mL、0.6mL、0.9mL、1.2mL、1.5mL氰离子标准中间液置于25mL比色管中,加水至10mL。5.1.3试样溶液及标准系列溶液中各加1mL10g/L氢氧化钠溶液和1滴酚酞指示液,用乙酸溶液缓慢调至红色褪去,然后加5mL磷酸盐缓冲溶液,在37℃恒温水浴锅中保温10min,再分别加入GB5009.36—201630.25mL氯胺T溶液,加塞振荡混合均匀,放置5min。然后分别加入5mL异烟酸-吡唑酮溶液,加水至25mL,混匀。在37℃恒温水浴锅中放置40min,用2cm比色杯,以零管调节零点,于波长638nm处测吸光度。5.2蒸馏酒及其配制酒5.2.1吸取1.0mL试样于50mL烧杯中,加入5mL2g/L氢氧化钠溶液,放置10min,然后放于120℃电加热板上加热至溶液剩余约1mL,取下放至室温,用2g/L氢氧化钠溶液转移至10mL具塞比色管中,最后加2g/L氢氧化钠至5mL。5.2.2若酒样浑浊或有色,取25.0mL试样于250mL蒸馏瓶中,加入100mL水,滴加数滴甲基橙指示剂,将冷凝管下端插入盛有10mL2g/L氢氧化钠溶液比色管的液面下,再加1g~2g酒石酸,迅速连接蒸馏装置进行水蒸气蒸馏,收集蒸馏液约50mL,然后用水定容至50mL,混合均匀。取2.0mL馏出液按5.2.1操作。5.2.3用移液管分别吸取0mL、0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2.0mL氰离子标准中间液于10mL具塞比色管中,加2g/L氢氧化钠至5mL。5.2.4于试样及标准管中分别加入2滴酚酞指示剂,然后加入乙酸溶液调至红色褪去,再用2g/L氢氧化钠溶液调至近红色,然后加2mL磷酸盐缓冲溶液(如果室温低于20℃即放入25℃~30℃水浴中10min),再加入0.2mL氯胺T溶液,摇匀放置3min,加入2mL异烟酸-吡唑啉酮溶液,加水稀释至刻度,加塞振荡混合均匀,在37℃恒温水浴锅中放置40min,取出用1cm比色杯以空白管调节零点,于波长638nm处测吸光度。5.3饮用水、矿泉水5.3.1量取250mL水样(氰化物含量超过20μg时,可取适量水样,加水至250mL)置于500mL水蒸气蒸馏装置中,加入1滴~2滴甲基橙指示剂,再加入5mL乙酸锌溶液,加入1g~2g酒石酸,溶液由橙黄色变成了橙红,迅速连接好蒸馏装置,将冷凝管下端插入盛有10mL20g/L氢氧化钠溶液的50mL具塞比色管的液面下。通过调节温度将蒸馏速度控制在2mL/min~3mL/min,收集蒸馏液约50mL,然后用水定容至50mL,混合均匀。取10.0mL馏出液置于25mL具塞比色管中。5.3.2另取25mL具塞比色管,分别加入氰离子标准中间液0mL,0.10mL,0.20mL,0.40mL,0.60mL,0.80mL,1.00mL,1.50mL和2.00mL,加1g/L氢氧化钠溶液至10.0mL。5.3.3于试样和标准管中各加5.0mL磷酸盐缓冲液。置于37℃恒温水浴中,再加入0.25mL氯胺T溶液,加塞混合,放置5min,然后加入5.0mL异烟酸-吡唑酮溶液,加水至25mL,混匀,在37℃恒温水浴锅中放置40min,用3cm比色杯,以纯水做参比,于波长638nm处测吸光度。绘制校准曲线,从曲线上查出样品管中氰化物质量。6分析结果的表述6.1木薯粉结果计算试样中氰化物(以CN-计)的含量按式(1)计算:X=A×1000m×V2/V1×1000…………………………(1)式中:X———试样中氰化物含量(以CN-计),单位为毫克每千克(mg/kg);A———测定试样溶液氰化物质量(以CN-计),单位为微克(μg);GB5009.36—201641000———换算系数;m———试样质量,单位为克(g);V2———测定用蒸馏液体积,单位为毫升(mL);V1———试样蒸馏液总体积,单位为毫升(mL)。计算结果保留三位有效数字。6.2蒸馏酒及其配制酒结果计算按5.2.1操作时试样中氰化物(以CN-计)的含量按式(2)计算:X=m×1000V×1000…………………………(2)式中:X———试样中氰化物含量(以CN-计),单位为毫克每升(mg/L);m———测定用试样中氰化物的质量,单位为微克(μg);1000———换算系数;V———试样体积,单位为毫升(mL)。按5.2.2操作时试样中氰化物(以CN-计)的含量按式(3)计算:X=m×50×1000V×2×1000…………………………(3)式中:X———试样中氰化物含量(以CN-计),单位为毫克每升(mg/L);m———测定用试样馏出液中氰化物的质量,单位为微克(μg);50,2,1000———换算系数;V———试样体积,单位为毫升(mL)。计算结果保留两位有效数字。6.3包装饮用水、矿泉水结果计算试样中氰化物(以CN-计)的含量按式(4)计算:X=m×V1V×V2…………………………(4)式中:X———水样中氰化物含量(以CN-计),单位为毫克每升(mg/L);m———从校准曲线上查得样品管中氰化物的质量,单位为微克(μg);V1———馏出液总体积,单位为毫升(mL);V———水样体积,单位为毫升(mL);V2———比色所用馏出液体积,单位为毫升(mL)。计算结果保留两位有效数字。7精密度重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。8其他本方法酒的检出限为0.004mg/L,木薯粉的检出限为0.015mg/kg,水的检出限为0.002mg/L,酒GB5009.36—20165的定量限为0.015mg/L,木薯粉的定量限为0.045mg/kg,水的定量限为0.006mg/L。第二法气相色谱法9原理在密闭容器和一定温度下,食品中的氰化物在酸性条件下用氯胺T将其衍生为氯化氰,氯化氰在气相和液相中达到平衡,将气相部分导入气相色谱法进行分离,电子捕获检测器检测,以外标法定量。10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。10.1试剂10.1.1氯胺T(C7H7ClNNaO2S·3H2O):保存于干燥器中。10.1.2磷酸(H3PO4):≥85%。10.1.3氢氧化钠(NaOH)。10.2试剂配制10.2.1氯胺T溶液(10g/L):称取0.1g氯胺T,用水溶解定容至10mL(现用现配)。10.2.2磷酸溶液(1+5):量取10mL浓磷酸,加入到50mL水中,混合均匀。10.2.30.1%氢氧化钠溶液:称取1.0g氢氧化钠,用水溶解定容至1L。10.3标准溶液配制10.3.1水中氰成分分析标准物质(50μg/mL):标准物质编号为GBW(E)080115。10.3.2氰离子(以CN-计)标准中间溶液:准确移取2.00mL的水中氰成分分析标准物质(10.3.1)于10mL的容量瓶,用0.1%氢氧化钠溶液定容,此溶液浓度为10mg/L,在0℃~4℃冰箱中保存,可使用3个月。10.3.3氰离子(以C