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中华人民共和国国家标准GB5009.179—2016食品安全国家标准食品中三甲胺的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.179—2016Ⅰ前言本标准代替GB/T5009.179—2003《火腿中三甲胺氮的测定》。本标准与GB/T5009.179—2003相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中三甲胺的测定”;———将原有分光光度法修改为第一法顶空气相色谱-质谱联用法、第二法顶空气相色谱法;———标准的适用范围扩充为水产动物及其制品和肉与肉制品;———将三甲胺氮改成三甲胺。GB5009.179—20161食品安全国家标准食品中三甲胺的测定1范围本标准规定了水产动物及其制品和肉与肉制品中三甲胺的测定方法。本标准适用于水产动物及其制品和肉与肉制品中三甲胺的测定。第一法顶空气相色谱-质谱联用法2原理试样经5%三氯乙酸溶液提取,提取液置于密封的顶空瓶中,在碱液作用下三甲胺盐酸盐转化为三甲胺,在40℃经过40min的平衡,三甲胺在气液两相中达到动态的平衡,吸取顶空瓶内气体注入气相色谱-质谱联用仪进行检测,以保留时间(RT)、辅助定性离子(m/z59和m/z42)和定量离子(m/z58)进行定性,以外标法进行定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1氢氧化钠(NaOH)。3.1.2三氯乙酸(C2HCl3O2)。3.2试剂配制3.2.150%氢氧化钠溶液:称取100g氢氧化钠,溶于20℃~30℃的100mL水中。3.2.25%三氯乙酸溶液:称取25g三氯乙酸溶于水中,并定容为500mL。3.3标准品三甲胺盐酸盐(CAS:593-81-7),分子式:(CH3)3NHCl,纯度≥98%,置于干燥器中,在4℃条件下保存。3.4标准溶液配制3.4.1三甲胺标准储备液:称取三甲胺盐酸盐标准品0.0162g,用5%三氯乙酸溶液溶解并定容至100mL,等同浓度为100μg/mL的三甲胺标准储备液,在4℃条件下保存。3.4.2三甲胺标准使用溶液:吸取一定体积的三甲胺标准储备液用5%三氯乙酸溶液逐级稀释成浓度分别为1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL的三甲胺标准使用溶液。GB5009.179—201624仪器和设备4.1气相色谱-质谱联用仪,配有分流/不分流进样口和电子轰击电离源(EI源)。4.2天平:感量分别为0.1mg和1mg。4.3恒温水浴锅:控温精度±2℃。4.4顶空瓶:容积20mL,配有聚四氟乙烯硅橡胶垫和密封帽,使用前在120℃烘烤2h。4.5微量注射器:1mL。4.6医用塑料注射器:5mL。4.7均质机。4.8绞肉机。4.9低速离心机。5分析步骤5.1试样制备5.1.1试样预处理与保存对于畜禽肉类及其肉制品,去除脂肪和皮,对于鱼和虾等动物水产及其制品,需要去鳞或去皮,所有样品取肌肉部分约100g,用绞肉机绞碎或用刀切细,混匀。制备好的试样若不立即测定,应密封在聚乙烯塑料袋中并于-18℃冷冻保存,测定前于室温下放置解冻即可。5.1.2试样提取称取约10g(精确至0.001g)制备好的样品于50mL的塑料离心管中,加入20mL5%三氯乙酸溶液,用均质机均质1min,以4000r/min离心5min,在玻璃漏斗加上少许脱脂棉,将上清液滤入50mL容量瓶,残留物再分别用15mL和10mL5%三氯乙酸溶液重复上述提取过程两次,合并滤液并用5%三氯乙酸溶液定容至50mL。5.1.3提取液顶空处理准确吸取提取液2.0mL于20mL顶空瓶中,压盖密封,用医用塑料注射器准确注入5.0mL50%氢氧化钠溶液,备用。5.1.4标准溶液顶空处理分别取3.4.2中各标准使用液2.0mL至20mL顶空瓶中,压盖密封,用医用塑料注射器分别准确注入5.0mL50%氢氧化钠溶液,备用。5.2仪器参考条件5.2.1色谱条件色谱条件如下:a)石英毛细管色谱柱:30m(长)×0.25mm(内径)×0.25μm(膜厚),固定相为聚乙二醇,或其他等效的色谱柱;b)载气:高纯氦气;c)流量1.0mL/min;进样口温度220℃;GB5009.179—20163d)分流比:10∶1;e)升温程序:40℃保持3min,以30℃/min速率升至220℃,保持1min。5.2.2质谱条件质谱条件如下:a)离子源:电子轰击电离源(EI源),温度:220℃;b)离子化能量:70eV;c)传输线温度:230℃;d)溶剂延迟:1.5min;e)扫描方式:选择离子扫描(SIM)。5.3测定5.3.1顶空进样:将制备好的试样在40℃平衡40min。在5.2色谱质谱条件下,用进样针抽取顶空瓶内液上气体100μL,注入GC-MS中进行测定。5.3.2定性测定:以选择离子方式采集数据,以试样溶液中三甲胺的保留时间(RT)、辅助定性离子(m/z59和m/z42)、定量离子(m/z58)以及辅助定性离子与定量离子的峰度比(Q)与标准溶液的进行比较定性。试样溶液中三甲胺的辅助定性离子和定量离子峰度比(Q样品)与标准溶液中三甲胺的辅助定性离子和定量离子峰度比(Q标准)的相对偏差控制在±15%以内。5.3.3定量测定:采用外标法定量。以标准溶液中三甲胺的峰面积为纵坐标,以标准溶液中三甲胺的浓度为横坐标,绘制校准曲线,用校准曲线计算试样溶液中三甲胺的浓度。6分析结果的表述6.1试样中的三甲胺的含量按式(1)计算:X1=c×Vm………………………………(1)式中:X1———试样中三甲胺含量,单位为毫克每千克(mg/kg);c———从校准曲线得到的三甲胺浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);V———试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);m———试样质量,单位为克(g)。6.2试样中三甲胺氮的含量按式(2)计算:X2=X1×14.0159.11………………………………(2)式中:X2———试样中三甲胺氮的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);X1———试样中三甲胺含量,单位为毫克每千克(mg/kg);14.01———氮的相对原子质量;59.11———三甲胺的相对分子质量。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。GB5009.179—201648其他当称样量为10g,定容体积为50mL,顶空进样体积为100μL,方法的检出限为1.5mg/kg,定量限为5.0mg/kg。第二法顶空气相色谱法9原理试样经5%三氯乙酸溶液提取,提取液置于密封的顶空瓶中,在碱液作用下三甲胺盐酸盐转化为三甲胺,在40℃经过40min的平衡,三甲胺在气液两相中达到动态的平衡,吸取顶空瓶内气体注入气相色谱-氢火焰离子化检测器(FID)进行检测,以保留时间(RT)进行定性,以外标法进行定量。10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。10.1试剂10.1.1氢氧化钠(NaOH)。10.1.2三氯乙酸(C2HCl3O2)。10.2试剂配制10.2.150%氢氧化钠溶液:称取100g氢氧化钠,溶于20℃~30℃的100mL水中。10.2.25%三氯乙酸溶液:称取25g三氯乙酸溶于水中,并定容为500mL。10.3标准品三甲胺盐酸盐(CAS:593-81-7),分子式:(CH3)3NHCl,纯度≥98%,置于干燥器中,在4℃条件下保存。10.4标准溶液配制10.4.1三甲胺标准储备液:称取三甲胺盐酸盐标准品0.0162g,用5%三氯乙酸溶液溶解并定容至100mL,等同浓度为100μg/mL的三甲胺标准储备液,在4℃条件下保存。10.4.2三甲胺标准使用溶液:吸取一定体积的三甲胺标准储备液用5%三氯乙酸溶液逐级稀释成浓度分别为1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL的三甲胺标准使用溶液。11仪器和设备11.1气相色谱仪:配有分流/不分流进样口和氢火焰离子化检测器(FID)。11.2天平:感量分别为0.1mg和1mg。11.3恒温水浴锅:控温精度±2℃。GB5009.179—2016511.4顶空瓶:容积20mL,配有聚四氟乙烯硅橡胶垫和密封帽,使用前在120℃烘烤2h。11.5微量注射器:1mL。11.6医用塑料注射器:5mL。11.7均质机。11.8绞肉机。11.9低速离心机。12分析步骤12.1试样制备12.1.1试样预处理与保存对于畜禽肉类及其制品,去除脂肪和皮,对于鱼和虾等水产动物及其制品,需要去鳞或去皮,所有样品取肌肉部分约100g,用绞肉机绞碎或用刀切细,混匀。制备好的试样若不立即测定,应密封在聚乙烯塑料袋中并于-18℃冷冻保存,测定前于室温下放置解冻即可。12.1.2试样提取取约10g(精确至0.001g)制备好的样品于50mL的塑料离心管中,加入20mL5%三氯乙酸溶液,用均质机均质1min,以4000r/min离心5min,在玻璃漏斗加上少许脱脂棉,将上清液滤入50mL容量瓶,残留物再分别用15mL和10mL5%三氯乙酸重复上述提取过程两次,合并滤液并用5%三氯乙酸溶液定容至50mL。12.1.3提取液顶空处理准确吸取提取液2.0mL于20mL顶空瓶中,压盖密封,用医用塑料注射器准确注入5.0mL50%氢氧化钠溶液,备用。12.1.4标准溶液顶空处理分别取10.5中各标准使用液2.0mL至20mL顶空瓶中,压盖密封,用医用塑料注射器分别准确注入5.0mL50%氢氧化钠溶液,备用。12.2仪器参考条件仪器参考条件如下:a)石英毛细管色谱柱:30m(长)×0.32mm(内径)×0.5μm(膜厚),固定相为聚乙二醇,或其他等效的色谱柱;b)载气:高纯氮气;c)流量:2.5mL/min;d)进样口温度:220℃;e)分流比:2∶1;f)升温程序:40℃保持3min,以30℃/min速率升至220℃,保持1min;g)检测器温度:220℃;h)尾吹气(氮气)流量:35mL/min;i)氢气流量:40mL/min;j)空气流量:400mL/min。GB5009.179—2016612.3测定12.3.1顶空进样:将制备好的试样在40℃平衡40min。在上述色谱质谱条件下,用进样针抽取顶空瓶内液上气体250μL,注入GC-FID中进行测定。12.3.2定性定量:根据标准色谱图中三甲胺的保留时间进行定性分析。采用外标法进行定量分析,以标准峰面积为纵坐标,以标准溶液浓度为横坐标,绘制校准曲线,用校准曲线计算试样溶液中三甲胺的浓度。13分析结果的表述13.1试样中三甲胺的含量按式(3)计算:X3=c×Vm………………………………(3)式中:X3———试样中三甲胺含量,单位为毫克每千克(mg/kg);c———从校准曲线得到的三甲胺浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);V———试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);m———试样质量,单位为克(g)。13.2试样中三甲胺氮的含量按式(4)计算:X4=X1×14.0159.11………………………………(4)式中:X4———试样中三甲胺氮的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);X1———试样中三甲胺含量,单位为毫克每千克(mg/kg);14.01———氮的相对原子质量;59.11———三甲胺的相对分子质量。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。14精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。15其他当称样量为10g,定容体积为50mL,顶空进样体积为250μL,方法的检出限为1.5mg/kg,定量限为5mg/kg。GB5009.179—20167附录A色谱图和质谱图A.1三甲胺标准溶液的GC-MS总离子流图三甲胺标准溶液的GC-MS总离子流图见图A.1。图A.1三甲胺