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中华人民共和国国家标准GB5009.181—2016食品安全国家标准食品中丙二醛的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.181—2016Ⅰ前言本标准代替GB/T5009.181—2003《猪油中丙二醛的测定》。本标准与GB/T5009.181—2003相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中丙二醛的测定”;———保留原标准方法分光光度法为第二法,扩大了方法的适用范围;———增加了高效液相色谱法为第一法,扩大了方法的适用范围;———增加了附录A。GB5009.181—20161食品安全国家标准食品中丙二醛的测定1范围本标准规定了食品中丙二醛的测定方法。本标准第一法适用于食品中丙二醛的测定;本标准第二法适用于动植物油脂中丙二醛的测定。第一法高效液相色谱法2原理试样先用酸液提取,再将提取液与硫代巴比妥酸(TBA)作用生成有色化合物,采用高效液相色谱-二极管阵列检测器测定,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇(CH3OH):色谱纯。3.1.2三氯乙酸(C2HCl3O2)。3.1.3乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2Na2O8·2H2O)。3.1.4硫代巴比妥酸(TBA)(C4H4N2O2S)。3.2试剂配制3.2.1乙酸铵溶液(0.01mol/L):称取0.77g乙酸铵,加水溶解,定容至1000mL,经0.45μm过滤器过滤。3.2.2三氯乙酸混合液:准确称取37.50g(精确至0.01g)三氯乙酸(3.1.2)及0.50g(精确至0.01g)乙二胺四乙酸二钠(3.1.3),用水溶解,稀释至500mL。3.2.3硫代巴比妥酸(TBA)水溶液:准确称取0.288g(精确至0.001g)硫代巴比妥酸(3.1.4)溶于水中,并稀释至100mL(如不易溶解,可加热超声至全部溶解,冷却后定容至100mL),相当于0.02mol/L。3.3标准品1,1,3,3-四乙氧基丙烷(又名丙二醛乙缩醛,C11H24O4,CAS号:122-31-6):纯度≥97%。3.4标准溶液配制3.4.1丙二醛标准储备液(100μg/mL):准确移取0.315g(精确至0.001g)1,1,3,3-四乙氧基丙烷至GB5009.181—201621000mL容量瓶中,用水溶解后稀释至1000mL,置于冰箱4℃储存。有效期3个月。3.4.2丙二醛标准使用溶液(1.00μg/mL):准确移取丙二醛标准储备液(3.4.1)1.0mL,用三氯乙酸混合液(3.2.2)稀释至100mL,置于冰箱4℃储存。有效期2周。3.4.3丙二醛标准系列溶液:准确移取丙二醛标准使用液0.10mL、0.50mL、1.0mL、1.5mL、2.5mL于10mL容量瓶中,加三氯乙酸混合液(3.2.2)定容至刻度,该标准溶液系列浓度为0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.15μg/mL、0.25μg/mL,现配现用。4仪器和设备4.1高效液相色谱:配有二极管阵列检测器。4.2天平:感量为0.0001g、0.01g。4.3恒温振荡器。4.4恒温水浴锅。4.5水相针式滤器,0.45μm聚醚砜滤膜。5分析步骤5.1试样制备5.1.1提取称取均匀的样品5g(精确至0.01g),置入100mL具塞锥形瓶中,准确加入50mL三氯乙酸混合液,摇匀,加塞密封,置于恒温振荡器上50℃振摇30min,取出,冷却至室温,用双层定量慢速滤纸过滤,弃去初滤液,续滤液备用。5.1.2衍生化准确移取5.1.1滤液和标准系列溶液各5mL分别置于25mL具塞比色管内,加入5mL硫代巴比妥酸(TBA)水溶液,加塞,混匀,置于90℃水浴内反应30min,取出,冷却至室温,取适量上层清液过滤膜上机分析。5.2液相色谱参考条件色谱柱:C18柱,柱长150mm,内径4.6mm,粒径5μm,或性能相当者。流动相:0.01mol/L乙酸铵∶甲醇=70∶30(体积比)。柱温:30℃。流速:1.0mL/min。进样量:10μL。检测波长:532nm。5.3测定分别吸取标准系列工作液(3.4.3)和待测试样的衍生溶液注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积响应值为纵坐标,绘制标准曲线。根据标准曲线得到待测液中丙二醛的浓度,丙二醛标准品的液相色谱图参见附录A。GB5009.181—201636分析结果的表述试样中丙二醛的含量按式(1)计算:X=c×V×1000m×1000…………………………(1)式中:X———试样中丙二醛含量,单位为毫克每千克(mg/kg);c———从标准系列曲线中得到的试样溶液中丙二醛的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);V———试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);m———最终试样溶液所代表的试样质量,单位为克(g);1000———换算系数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留两位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第二法分光光度法8原理丙二醛经三氯乙酸溶液提取后,与硫代巴比妥酸(TBA)作用生成粉红色化合物,测定其在532nm波长处的吸光度值,与标准系列比较定量。9试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。9.1试剂9.1.1三氯乙酸(C2HCl3O2)。9.1.2乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2Na2O8·2H2O)。9.1.3硫代巴比妥酸(TBA)(C4H4N2O2S)。9.2试剂配制9.2.1三氯乙酸混合液:准确称取37.50g(精确至0.01g)三氯乙酸及0.50g(精确至0.01g)乙二胺四乙酸二钠,用水溶解,稀释至500mL。9.2.2硫代巴比妥酸(TBA)水溶液:准确称取0.288g(精确至0.001g)硫代巴比妥酸溶于水中,并稀释至100mL(如不易溶解,可加热超声至全部溶解,冷却后定容至100mL),相当于0.02mol/L。9.3标准品1,1,3,3-四乙氧基丙烷(又名丙二醛乙缩醛,C11H24O4,CAS号:122-31-6):纯度≥97%。GB5009.181—201649.4标准溶液配制9.4.1丙二醛标准储备液(100μg/mL):准确移取0.315g(精确至0.001g)1,1,3,3-四乙氧基丙烷至1000mL容量瓶中,用水溶解后稀释至1000mL,置于冰箱4℃储存。有效期3个月。9.4.2丙二醛标准使用溶液(1.00μg/mL):准确移取丙二醛标准储备液1.0mL,用三氯乙酸混合液稀释至100mL,置于冰箱4℃储存。有效期2周。9.4.3丙二醛标准系列溶液:准确移取丙二醛标准使用液0.10mL、0.50mL、1.0mL、1.5mL、2.5mL于10mL容量瓶中,加三氯乙酸混合液定容至刻度,该标准溶液系列浓度为0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.15μg/mL、0.25μg/mL,现配现用。10仪器和设备10.1分光光度计。10.2天平:感量为0.0001g、0.01g。10.3恒温振荡器。10.4恒温水浴锅。11分析步骤11.1试样制备称取样品5g(精确到0.01g)置入100mL具塞锥形瓶中,准确加入50mL三氯乙酸混合液,摇匀,加塞密封,置于恒温振荡器上50℃振摇30min,取出,冷却至室温,用双层定量慢速滤纸过滤,弃去初滤液,续滤液备用。准确移取上述滤液和标准系列溶液各5mL分别置于25mL具塞比色管内,另取5mL三氯乙酸混合液作为样品空白,分别加入5mL硫代巴比妥酸(TBA)水溶液,加塞,混匀,置于90℃水浴内反应30min,取出,冷却至室温。11.2测定以样品空白调节零点,于532nm处1cm光径测定样品溶液和标准系列溶液(9.4.3)的吸光度值,以标准系列溶液的质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。12分析结果的表述试样中丙二醛含量,按式(2)计算:X=c×V×1000m×1000…………………………(2)式中:X———试样中丙二醛含量,单位为毫克每千克(mg/kg);c———从标准系列曲线中得到的试样溶液中丙二醛的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);V———试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);m———最终试样溶液所代表的试样质量,单位为克(g);1000———换算系数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留两位有效数字。GB5009.181—2016513精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。14其他第一法检出限为0.03mg/kg,定量限为0.10mg/kg;第二法检出限为0.05mg/kg,定量限为0.10mg/kg。GB5009.181—20166附录A丙二醛硫代巴比妥酸衍生物标准溶液色谱图丙二醛硫代巴比妥酸衍生物标准溶液色谱图见图A.1。图A.10.10μg/mL丙二醛硫代巴比妥酸衍生物标准色谱图