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中华人民共和国国家标准GB5009.258—2016食品安全国家标准食品中棉子糖的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.258—20161食品安全国家标准食品中棉子糖的测定1范围本标准规定了食品中棉子糖含量测定的离子色谱方法。本标准适用于婴幼儿配方食品、婴幼儿谷类辅助食品、婴幼儿罐装辅助食品、饮料及豆粉食品中棉子糖含量的测定。2原理试样采用乙腈沉淀、高速离心的方式去除样品中的蛋白质和脂肪,经固相萃取柱净化后,注入离子色谱仪,氢氧化钠溶液为淋洗液,经阴离子交换柱分离,脉冲安培检测器检测。保留时间定性,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙腈(C2H3N):色谱纯。3.1.250%氢氧化钠溶液(NaOH):色谱纯。3.1.3α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。3.1.4氮气(N2):纯度≥99.99%。3.2试剂配制氢氧化钠溶液(250mmol/L):在2L塑料试剂瓶中加入500mL经过0.22μm尼龙滤膜过滤的蒸馏水,移取13.1mL氢氧化钠(3.1.2)溶液至水面以下,加蒸馏水至1000mL,通入氮气保护后,摇匀备用。3.3标准品棉子糖标准品(C18H32O16):纯度≥99.0%。3.4标准溶液配制3.4.1标准储备溶液(1000mg/L):准确称取棉子糖100mg(精确到0.1mg)于50mL烧杯中,用蒸馏水溶解,转移到100mL容量瓶中,用水定容。摇匀,4℃保存,有效期为1个月。3.4.2标准使用溶液(50.0mg/L):准确吸取5mL标准储备溶液于100mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。现用现配。3.4.3标准系列工作溶液:分别准确吸取棉子糖标准使用溶液0mL、1mL、2mL、5mL、10mL、GB5009.258—2016220mL、50mL于100mL容量瓶中,用蒸馏水定容。得到标准曲线工作溶液浓度分别为0.000mg/L、0.500mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、25.0mg/L。4仪器和设备4.1离子色谱仪:配置脉冲安培检测器。4.2天平:感量为0.1mg。4.3离心机:转速≥10000r/min。4.4涡旋混合器。4.5超声波清洗器。4.6固相萃取装置。4.7培养箱:60℃±2℃。4.8固相萃取柱:OnGuardⅡRP柱(填料为反相聚二乙烯基苯聚合物)和OnGuardⅡH柱(填料为H型聚苯乙烯基强酸树脂),或其他等效柱。规格为1.0mL,H柱为650mg,RP柱为350mg。4.90.22μm水性滤膜针头滤器。4.10注射器:15mL。5分析步骤5.1试样制备5.1.1试样预处理5.1.1.1乳粉、米粉、豆粉等试样:取试样约100g(其他固体试样先进行粉碎、研磨),装入能够容纳2倍试样体积的带盖容器中,通过反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀直到使试样均一化。5.1.1.2液体试样:取试样约100mL,装入能够容纳2倍试样体积的带盖容器中,通过反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀直到使试样均一化。5.1.1.3肉泥等其他半固体试样:称取试样50.0g,称取等量的水与之混合,涡旋混匀,超声20min。5.2试样处理5.2.1米粉等含淀粉的试样:称取混合均匀的试样1g~5g(精确至0.1mg,含有棉子糖约为20mg)于离心管中,加入1gα-淀粉酶,固体试样需用约50mL45℃~50℃的水使其溶解,混合均匀后充氮,盖上管盖,置于60℃±2℃培养箱内酶解30min。冷却至室温后,用水定容至100mL。5.2.2乳粉、豆粉、饮料、肉泥等其他试样:称取混合均匀的试样1g~5g(精确至0.1mg,含有棉子糖约为20mg)于100mL烧杯中,加水溶解,固体试样需用约50mL45℃~50℃的水使其溶解,转移到100mL容量瓶中,用水定容。5.3净化5.3.1吸取5mL经过处理的试样溶液于50mL具塞锥形瓶中,加入10mL水,摇匀,超声30min,转移到50mL容量瓶中,加入30mL乙腈,用水定容。转移到50mL离心管中,于10000r/min离心10min,取上清液备用(可以根据样液中棉子糖含量调整稀释倍数)。5.3.2固相萃取柱的活化:将OnGuardⅡRP柱使用前依次用10mL甲醇、15mL蒸馏水进行活化;OnGuardⅡH柱用10mL蒸馏水进行活化。必要时可以使用固相萃取装置,液体流速控制在1mL/min。5.3.3将15mL注射器的柱筒部分、0.22μm水性滤膜针头滤器、OnGuardⅡRP柱、OnGuardⅡHGB5009.258—20163柱顺序连接,接在固相萃取装置上。取备用的上清液(5.3.1)约15.0mL加入注射器柱筒,调节固相萃取装置,液体流速控制在1mL/min。弃去前面3mL流出液,收集后面的流出液待测。5.4仪器参考条件5.4.1色谱柱:CarboPacPA20(150mm×3mm);保护柱:CarboPacPA20(30mm×3mm),或性能相当的离子色谱柱。5.4.2淋洗液:水+250mmol/L氢氧化钠溶液=58+42,等度洗脱。5.4.3流速:0.4mL/min。5.4.4检测器:脉冲安培检测器,金电极,Ag/AgCl参比电极,检测池温度为30℃。5.4.5柱温:30℃。5.4.6进样体积:10μL。5.5测定5.5.1标准曲线的制作将标准系列工作溶液按照从低浓度到高浓度的顺序依次进样,得到各浓度标准溶液的色谱图。以棉子糖的浓度(mg/L)为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线或计算线性回归方程(标准溶液离子色谱图见图A.1)。5.5.2测定在与标准曲线测定相同的工作条件下,取10μL试样溶液注入离子色谱仪,以保留时间定性,测得峰面积,根据标准曲线得到待测样液中棉子糖的浓度(试样溶液离子色谱图参见图A.2)。6分析结果的表述试样中棉子糖含量按式(1)计算:X=C×V×Km×1000……………………(1)式中:X———试样中棉子糖的含量,单位为克每千克(g/kg);C———试样测定液中棉子糖质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);V———试样制备时定容体积,单位为毫升(mL);K———试样溶液稀释倍数,包括试样制备和净化过程的两步稀释;m———试样质量,单位为克(g)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他检出限和定量限:取样量为1.0g,定容体积为100mL,稀释倍数为10时,测定棉子糖的检出限为0.1g/kg;定量限为0.3g/kg。GB5009.258—20164附录A标准溶液和试样溶液典型离子色谱图A.1棉子糖标准溶液离子色谱图棉子糖标准溶液离子色谱图见图A.1。图A.1棉子糖标准溶液(10.0mg/L)离子色谱图A.2试样溶液典型离子色谱图试样溶液典型离子色谱图见图A.2。图A.2试样溶液典型离子色谱图