GB 5009.265-2016 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.265—2016食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.265—20161食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定1范围本标准规定了食品中多环芳烃(萘、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并[a]蒽、、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽和苯并[g,h,i]苝的液相色谱测定方法和食品中多环芳烃(萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并[a]蒽、、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽和苯并[g,h,i]苝的气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于食品中多环芳烃含量的测定。第一法高效液相色谱法2原理试样中的多环芳烃用有机溶剂提取,提取液浓缩至近干,溶剂溶解,用PSA(N-丙基乙二胺)和C18固相萃取填料净化或用弗罗里硅土固相萃取柱净化。经浓缩定容后,通过高效液相色谱分离,测定各种多环芳烃在不同激发波长和发射波长处的荧光强度,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。3.1.2正己烷(C6H14):色谱纯。3.1.3二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯。3.1.4硅藻土:色谱纯。3.1.5硫酸镁(MgSO4):优级纯。3.1.6N-丙基乙二胺(PSA):粒径40μm。3.1.7封尾C18固相萃取填料:粒径40μm~63μm。3.1.8弗罗里硅土固相萃取柱:500mg,3mL。3.1.9有机相型微孔滤膜:0.22μm。3.2试剂配制3.2.1正己烷-二氯甲烷混合溶液(1+1):量取500mL正己烷,加入二氯甲烷500mL,混匀。3.2.2乙腈饱和的正己烷:量取800mL正己烷,加入200mL乙腈,振摇混匀后,静置分层,上层正己烷层即为乙腈饱和的正己烷。GB5009.265—201623.3标准品多环芳烃(萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并[a]蒽、、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽和苯并[g,h,i]苝有证标准溶液(200μg/mL),于-18℃下保存。警告———多环芳烃是已知的致癌、致畸、致突变的物质,并且致癌性随着苯环数的增加而增加,测定时应特别注意安全防护。测定应在通风柜中进行并戴手套,尽量减少暴露。3.4标准溶液配制3.4.1多环芳烃标准中间液(1000ng/mL):吸取多环芳烃标准溶液0.5mL,用乙腈定容至100mL。在-18℃下保存。3.4.2多环芳烃标准系列工作液:分别吸取多环芳烃标准中间液0.10mL、0.50mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL,用乙腈定容至100mL,得到质量浓度为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的标准系列工作液。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪,带荧光检测器。4.2电子天平:感量为0.01g。4.3冷冻离心机:转速≥4500r/min。4.4涡旋振荡器。4.5超声波振荡器。4.6粉碎机。4.7均质器。4.8氮吹仪。4.9旋转蒸发仪。5分析步骤5.1试样制备5.1.1干样:取样品约500g,经粉碎机粉碎、混匀,分装于洁净盛样袋中,密封标识后于-18℃冷冻保存。5.1.2湿样:取样品约500g,将其可食部分先切碎,经均质器充分搅碎均匀,分装于洁净盛样袋中,密封标识后于-18℃冷冻保存。5.2试样提取5.2.1粮谷或水分少的食品称取2g~5g(精确至0.01g)试样于50mL具塞玻璃离心管A中,按以下步骤处理:a)加入10mL正己烷,涡旋振荡30s后,放入40℃水浴超声30min;以4500r/min离心5min,吸取上清液于玻璃离心管B中;离心管A下层用10mL正己烷重复提取1次,提取液合并于离心管B中,氮吹(温度控制在35℃以下)除去溶剂,吹至近干。b)在离心管B中,加入4mL乙腈,涡旋混合30s,再加入900mg硫酸镁、100mgPSA和100mgGB5009.265—20163C18填料,涡旋混合30s,以4500r/min离心3min,取上清液于10mL玻璃刻度离心管C中,离心管B下层再用2mL乙腈重复提取1遍,合并提取液于离心管C中,氮吹蒸发溶剂至近1mL,用乙腈定容至1mL,混匀后,过0.22μm有机相型微孔滤膜,制得试样待测液。5.2.2水产品、肉类和蔬菜等食品称取2g~5g(精确至0.01g)试样于50mL具塞玻璃离心管A中,加1g~5g硅藻土,用玻棒搅匀,以下按5.2.1中a)、b)步骤处理,制得试样待测液。5.2.3含油脂高的食品或动植物油脂称取1g~4g(精确至0.01g)试样于50mL具塞玻璃离心管A中,按以下步骤处理:a)加入20mL乙腈和10mL乙腈饱和的正己烷,涡旋振荡30s后,放入40℃水浴超声30min;摇匀后,以4500r/min冷冻(-4℃)离心5min,吸取下层乙腈层于100mL鸡心瓶中,离心管A中溶液用20mL乙腈重复提取1次,提取液合并于鸡心瓶中,35℃减压旋转蒸发至近干。加入5mL正己烷,涡旋振荡30s溶解。b)依次用5mL二氯甲烷和10mL正己烷活化弗罗里硅土固相萃取柱,将a)获得的5mL提取样液全部移入弗罗里硅土固相萃取柱,再用5mL正己烷洗涤鸡心瓶并入柱中,用8mL正己烷-二氯甲烷混合溶液洗脱,收集所有流出物于20mL玻璃离心管B中。氮吹(温度控制在35℃以下)除去溶剂,吹至近干,加入0.5mL乙腈涡旋振荡10s,继续氮吹至除尽正己烷-二氯甲烷,用乙腈定容至1mL,混匀后,过0.22μm有机相型微孔滤膜,制得试样待测液。5.3液相色谱参考条件a)色谱柱:PAHC18反相键合固定相色谱柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或同等性能的色谱柱。b)检测器:荧光检测器。c)流动相:乙腈和水;梯度洗脱程序见表1,溶剂A为乙腈,溶剂B为水。表1反相C18柱梯度洗脱程序色谱时间min溶剂A%溶剂B%0505055050201000281000325050d)流速:1.5mL/min。e)检测波长:激发和发射波长见表2。GB5009.265—20164表2多环芳烃的激发波长、发射波长及其切换色谱时间检测参数序号化合物名称时间min激发波长nm发射波长nm1萘苊芴02703242菲蒽12.042483753荧蒽14.002804624芘苯并[a]蒽14.852703855苯并[b]荧蒽18.932564466苯并[k]荧蒽苯并[a]芘二苯并[a,h]蒽苯并[g,h,i]苝20.222924107茚并[1,2,3-c,d]芘23.33274507f)柱温:30℃。g)进样量:20μL。5.4标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中,测得相应的峰面积,以标准工作液的质量浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。标准溶液的液相色谱图参见图A.1。5.5试样溶液的测定将试样待测液注入液相色谱仪中,以保留时间定性,测得相应的峰面积,根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的质量浓度。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围,可适当稀释后测定。5.6空白试验空白试验除不加试样外,采用与试样完全相同的分析步骤。6分析结果的表述试样中多环芳烃的含量Xi按式(1)计算:Xi=ρi×V×1000m×1000…………………………(1)式中:Xi———试样中多环芳烃的含量,单位为微克每千克(μg/kg);GB5009.265—20165ρi———依据标准曲线计算得到的试样待测液中多环芳烃i的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);V———试样待测液最终定容体积,单位为毫升(mL);1000———单位转换;m———试样质量,单位为克(g)。含量大于等于10μg/kg时,保留三位有效数字;含量小于10μg/kg时,保留两位有效数字。注:计算结果应扣除空白值。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。8其他当试样取4g,定容体积为1mL时,本方法的检出限和定量限见表3。表3液相色谱法的多环芳烃检出限和定量限单位为微克每千克化合物蒽、苯并[a]蒽、、茚并[1,2,3-c,d]芘、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝菲萘荧蒽苊、芴、芘检出限0.332.03.30.50.65定量限1.06.0101.52.0第二法气相色谱-质谱法9原理试样中的多环芳烃用有机溶剂提取,提取液浓缩至近干,用PSA(N-丙基乙二胺)和C18固相萃取填料净化或用弗罗里硅土固相萃取柱净化,经浓缩定容后,用气相色谱-质谱联用仪进行测定,外标法定量。10试剂和材料同第3章。11仪器和设备11.1气相色谱-质谱联用仪。11.2其余同4.2~4.9。GB5009.265—2016612分析步骤12.1试样制备同5.1。12.2试样提取同5.2。12.3空白试验空白试验除不加试样外,采用与试验完全相同的分析步骤。12.4气相色谱-质谱参考条件a)色谱柱:DB-5MS,柱长30m,内径0.25mm,膜厚0.25μm,或同等性能的色谱柱。b)柱温度程序:初始温度90℃,以20℃/min升温至220℃,再以5℃/min升温至320℃,保持2min;c)进样口温度:250℃;d)色谱-质谱接口温度:280℃;e)离子源温度:230℃;f)载气:氦气,纯度≥99.999%,1.0mL/min;g)电离方式:EI;h)电离能量:70eV;i)质量扫描范围:50amu~450amu;j)测定方式:选择离子监测方式;k)进样方式:不分流进样,2.0min后开阀;l)进样量:1.0μL;m)溶剂延迟:3min。12.5标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入气相色谱-质谱仪中,测得相应的峰面积,以标准工作液的质量浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。12.6试样溶液的测定将试样待测液注入气相色谱-质谱仪中,测得相应的峰面积,根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的质量浓度。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围,可适当稀释后测定。12.7定性如果试样待测液中检出的色谱峰保留时间与标准工作溶液相一致,且选择离子的相对丰度与标准工作溶液的相对丰度两者之差不大于允许相对偏差(相对丰度≥50%,允许±10%偏差;50%相对丰度20%,允许±15%偏差;10%相对丰度20%,允许±20%偏差;相对丰度≤10%,允许±50%偏差),则可判断试样中存在对应的被测物。在上述色谱条件下,总离子流图参见图B.1。参考保留时间和特征离子见表4。GB5009.265—20167表4多环芳烃的参考保留时间和特征离子序号化合物名称保留时间min选择离子定量离子定性离子丰度比1萘4.0112864,102100∶6∶82苊烯5.8215263,76100∶5∶173苊6.04153154,76100∶94∶204芴6.66166165,82100∶92∶95菲7.9817889,152100∶9∶96蒽8.0517889,152100∶10∶77荧蒽10.31202101,200100∶13∶228芘10.85202101,200100∶16∶249苯并[a]蒽14.50228114,226100∶12∶231014.64228114,226100∶10∶3611苯并[b]荧蒽18.38252126,250100∶15∶1612苯并[k]荧蒽18.48252126,250100∶16∶2013苯并[a]芘19.51252126,250100∶16∶2214茚苯[1,2,3-c,d]芘23.35276138,277100∶19∶2215二苯并[a,h]蒽23.47278138,276100∶12∶3016苯并[g,h,i]