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中华人民共和国国家标准GB5413.18—2010中华人民共和国卫生部发布2010-03-26发布2010-06-01实施食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定NationalfoodsafetystandardDeterminationofvitaminCinfoodsforinfantsandyoungchildren,milkandmilkproductsGB5413.18—2010I前言本标准代替GB/T5413.18-1997《婴幼儿配方食品和乳粉维生素C的测定》。本标准与GB/T5413.18-1997相比，主要变化如下：——明确了酶的活力单位；——改变了邻苯二胺溶液浓度；——含淀粉试样处理进行了改变；——增加了加入硼酸—乙酸钠溶液后的反应时间；——增加了加入邻苯二胺溶液后的反应时间。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB5413-1985、GB/T5413.18-1997。GB5413.18—20101食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定。本标准测定的是还原型维生素C和氧化型维生素C的总量。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其昀新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3原理维生素C（抗坏血酸）在活性炭存在下氧化成脱氢抗坏血酸，它与邻苯二胺反应生成荧光物质，用荧光分光光度计测定其荧光强度，其荧光强度与维生素C的浓度成正比，以外标法定量。4试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。4.1淀粉酶：酶活力1.5U/mg，根据活力单位大小调整用量。4.2偏磷酸—乙酸溶液A：称取15g偏磷酸及40mL乙酸（36%）于200mL水中，溶解后稀释至500mL备用。4.3偏磷酸—乙酸溶液B：称取15g偏磷酸及40mL乙酸（36%）于100mL水中，溶解后稀释至250mL备用。4.4酸性活性炭：称取粉状活性炭（化学纯，80目～200目）约200g，加入1L体积分数为10％的盐酸，加热至沸腾，真空过滤，取下结块于一个大烧杯中，用水清洗至滤液中无铁离子为止，在110℃～120℃烘箱（5.3）中干燥约10h后使用。检验铁离子的方法：普鲁士蓝反应。将20g/L亚铁氰化钾与体积分数为1%的盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。4.5乙酸钠溶液：用水溶解500g三水乙酸钠，并稀释至1L。4.6硼酸—乙酸钠溶液：称取3.0g硼酸，用乙酸钠溶液（4.5）溶解并稀释至100mL，临用前配制。4.7邻苯二胺溶液（400mg/L）：称取40mg邻苯二胺，用水溶解并稀释至100mL，临用前配制。GB5413.18—201024.8维生素C标准溶液（100μg/mL）：称取0.050g维生素C标准品，用偏磷酸—乙酸溶液A（4.2）溶解并定容至50mL，再准确吸取10.0mL该溶液用偏磷酸—乙酸溶液A（4.2）稀释并定容至100mL，临用前配制。5仪器和设备5.1荧光分光光度计。5.2天平：感量为0.1mg。5.3烘箱：温度可调。5.4培养箱：45℃±1℃。6分析步骤6.1试样处理6.1.1含淀粉的试样：称取约5g（精确至0.0001g）混合均匀的固体试样或约20g（精确至0.0001g）液体试样（含维生素C约2mg）于150mL三角瓶中，加入0.1g淀粉酶（4.1），固体试样加入50mL45℃～50℃的蒸馏水，液体试样加入30mL45℃～50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置于45℃±1℃培养箱（5.4）内30min，取出冷却至室温，用偏磷酸—乙酸溶液B（4.3）转至100mL容量瓶中定容。6.1.2不含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约5g（精确至0.0001g），用偏磷酸—乙酸溶液A（4.2）溶解，定容至100mL。或称取混合均匀的液体试样约50g（精确至0.0001g），用偏磷酸—乙酸溶液B（4.3）溶解，定容至100mL。6.2待测液的制备6.2.1将上述试样（6.1.1，6.1.2）及维生素C标准溶液（4.8）转至放有约2g酸性活性炭（4.4）的250mL三角瓶中，剧烈振动，过滤（弃去约5mL昀初滤液），即为试样及标准溶液的滤液。然后准确吸取5.0mL试样及标准溶液的滤液分别置于25mL及50mL放有5.0mL硼酸—乙酸钠溶液（4.6）的容量瓶中，静置30min后，用蒸馏水定容。以此作为试样及标准溶液的空白溶液。6.2.2在此30min内，再准确吸取5.0mL试样及标准溶液的滤液于另外的25mL及50mL放有5.0mL乙酸钠溶液（4.5）和约15mL水的容量瓶中，用水稀释至刻度。以此作为试样溶液及标准溶液。6.2.3试样待测液：分别准确吸取2.0mL试样溶液（6.2.2）及试样的空白溶液(6.2.1)于10.0mL试管中，向每支试管中准确加入5.0mL邻苯二胺溶液（4.7），摇匀，在避光条件下放置60min后待测。6.2.4标准系列待测液：准确吸取上述标准溶液（6.2.2）0.5mL、1.0mL、1.5mL和2.0mL，分别置于10mL试管中，再用水补充至2.0mL。同时准确吸取标准溶液的空白溶液（6.2.1）2.0mL于10mL试管中。向每支试管中准确加入5.0mL邻苯二胺溶液（4.7），摇匀，在避光条件下放置60min后待测。6.3测定6.3.1标准曲线的绘制将标准系列待测液（6.2.4）立刻移入荧光分光光度计的石英杯中，于激发波长350nm，发射波长430nm条件下测定其荧光值。以标准系列荧光值分别减去标准空白荧光值为纵坐标，对应的维生素C质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。6.3.2试样待测液的测定GB5413.18—20103将试样待测液（6.2.3）按6.3.1的方法分别测其荧光值，试样溶液荧光值减去试样空白溶液荧光值后在标准曲线上查得对应的维生素C质量浓度。7分析结果的表述试样中维生素C的含量按式(1)计算：1000100×××=mfVcX………………………………………………………………(1)式中：X——试样中维生素C的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；V——试样的定容体积，单位为毫升（mL）；c——由标准曲线查得的试样测定液中维生素C的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样的质量，单位为克（g）；f——试样稀释倍数。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留至小数点后一位。8精密度在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。9其他本标准检出限为0.1mg/100g。