SZDBZ 349-2019 食品中总黄酮的测定 分光光度法

ICS67.050X04SZDB/Z深圳市标准化指导性技术文件SZDB/Z349—2019食品中总黄酮的测定分光光度法DeterminationofTotalflavonoidsinFoodsSpectrophotometry2019-01-28发布2019-03-01实施深圳市市场和质量监督管理委员会发布SZDB/Z349—2019I目次前言..........................................................................................................................................................II1范围......................................................................................................................................................12规范性引用文件..................................................................................................................................13原理......................................................................................................................................................14试剂和材料..........................................................................................................................................15仪器和设备..........................................................................................................................................16分析步骤..............................................................................................................................................26.1标准溶液的制备...........................................................................................................................26.2样品溶液的制备...........................................................................................................................26.3标准曲线的制备...........................................................................................................................26.4试样的测定...................................................................................................................................37结果计算..............................................................................................................................................38允许差..................................................................................................................................................3SZDB/Z349—2019II前言本文件按照GB/T1.1给出的规则起草。本文件由深圳市食品药品监督管理局归口管理。本文件主要起草单位：深圳市计量质量检测研究院。本文件主要起草人：彭建飞、李锦才、郑育民、钟彬、张俊宇、吴燕蕙。本文件为首次发布。SZDB/Z349—20191食品中总黄酮的测定分光光度法1范围本文件规定了分光光度法测定龟苓膏、凉粉、饮料中总黄酮（以芦丁计）。本文件适用于龟苓膏、凉粉、饮料及凉粉浓缩液中总黄酮的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测NY/T2010-2011柑桔类水果及制品中总黄酮含量的测定DB13/T385-1998食品中总黄酮（芦丁）的测定3原理在弱碱性条件下，溶于乙醇或甲醇的黄酮类化合物与三价铝离子结合生成红色络合物，可在510nm波长附近产生最大吸收。在一定浓度范围内，其浓度与吸光度符合朗伯比尔定律。4试剂和材料除非另有说明，在分析中至少使用分析纯试剂或去离子水。4.1芦丁（C27H30O16）标准品。4.2乙醇溶液：体积分数为60%。4.3氢氧化钠溶液（4g/L）：称取4.0g氢氧化钠，用水溶解后定容至1L。4.4亚硝酸钠溶液（50g/L）：称取5.0g亚硝酸钠，用水溶解后定容至100mL。4.5硝酸铝溶液（100g/L）：称取10.0g硝酸铝，用水溶解后定容至100mL。4.6氢氧化钠溶液(200g/L)：称取20.0g氢氧化钠，用水溶解后定容至100mL。4.7柠檬酸溶液（200g/L）：称取200g柠檬酸与烧杯中，用水溶解，转入1L容量瓶中，稀释至刻度。4.8甲醇。4.9聚酰胺粉:80目。4.10苯。5仪器和设备SZDB/Z349—201925.1紫外可见分光光度计。5.2电子分析天平：精度到0.1mg。5.3酸度计：精度到0.1pH单位。5.4恒温水浴。5.5超声萃取仪。6分析步骤6.1标准溶液的制备称取约0.2g（精确至1mg）经120℃减压干燥至恒重的芦丁标准品，置于100mL容量瓶中，用乙醇溶液（4.2）溶解并定容至刻度，摇匀。为贮备母液。吸取10mL芦丁标准贮备溶液于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。临用现配。6.2样品溶液的制备6.2.1普通食品的制备6.2.1.1液体样品称取10～20g(精确至1mg)混合均匀的样品到100mL烧杯中，加入10mL氢氧化钠溶液（4.3），用氢氧化钠溶液（4.6）调节pH值至12。静置30min后，再用柠檬酸溶液（4.7）调节pH值至7.0，转移到100mL容量瓶中，定容，过滤，收集滤液，备用。6.2.1.2固体样品称取经混合均匀的样品1～2g（精确至1mg）置于100mL具塞三角瓶中，加乙醇溶液（4.2）50mL，40℃超声提取50min后，滤入100mL容量瓶中。再于三角瓶中加40.0mL乙醇溶液（4.2）后40℃超声提取20min，过滤，合并滤液，用10mL热乙醇溶液（4.2）洗涤滤渣，滤液并于容量瓶中，冷却至室温，用乙醇溶液（4.2）定容至刻度，摇匀，备用。6.2.2凉茶浓缩液的制备取代表性样品1～5g(精确至1mg)于50mL具塞比色管中，加入20mL无水乙醇，旋涡混匀5min后，超声提取30min，放置分层后过滤（样品粘稠可以选择抽滤），用乙醇淋洗比色管、滤渣及滤纸（或抽滤瓶），收集滤液于25mL容量瓶中，并用乙醇定容至刻度，吸取5mL滤液于100mL蒸发皿中，加入5g聚酰胺粉，混匀后于80℃水浴上挥干。然后转入层析柱，先用50mL苯洗，弃去苯液，用甲醇洗脱黄酮于50mL容量瓶，并用甲醇定容至刻度。注：1、颜色较深的样品则需要过柱净化步骤操作，样品颜色浅则不需进行净化操作；2、根据样品值高低适当调整取样量及稀释倍数。6.3标准曲线的制备SZDB/Z349—20193吸取0.00、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、6.00mL芦丁标准溶液，相当于0.00、0.050、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.20mg无水芦丁，分别置于25mL具塞比色管中，用乙醇溶液（4.2）补充至5.0mL，加1mL亚硝酸钠溶液（4.4），摇匀，放置6min，加入1.5mL硝酸铝溶液（4.5），摇匀，放置6min，加入4mL氢氧化钠溶液（4.6），用乙醇溶液（4.2）定容至刻度，摇匀，放置15min。用1cm比色皿，以试剂空白调节零点，在波长510nm处测定吸光度。以吸光度值对应含量绘制标准曲线。6.4试样的测定吸取2.0mL（视样品值高低适当调整取样量，尽量控制样品吸光度ABS在0.2～0.7之间）样品溶液（6.2），置于25mL具塞比色管中，用乙醇溶液（4.2）补充至5.0mL，加1mL亚硝酸钠溶液（4.4），摇匀，放置6min，加入1.5mL硝酸铝溶液（4.5），摇匀，放置6min，加入4mL氢氧化钠溶液（4.6），用乙醇溶液（4.2）定容至刻度，摇匀，放置15min。用1cm比色皿，以相应的不添加硝酸铝溶液（4.5）的试样液作为空白进行校正，在波长510nm处测定吸光度。根据标准曲线算出试样溶液的芦丁质量。7结果计算样品中总黄酮（以芦丁计）的含量ω（mg/100g）按下列公式（1）计算：ω=10011VMVm……………………………………（1）式中：m1——在工作曲线上算出试样溶液的总黄酮质量，单位为毫克（mg）；V——试样的提取体积，单位为毫升（mL）；V1——测定时吸取试样的体积，单位为毫升（mL）；M——试样的质量，单位为克（g）。计算结果应保留至三位有效数字。8允许差在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。本文件检出限为12.5mg/100g。_________________________________