TAHPCA 009-2019 破壁灵芝孢子粉

ICS号01.040.67中国标准文献分类号C1399团体标准T/AHPCA009-2019破壁灵芝孢子粉2019-7-1实施2019-6-1发布安徽省营养保健食品化妆品协会发布全国团体标准信息平台2前言本标准依据《中华人民共和国食品安全法》、GB/T1.1《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》，比较GB2761《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》、GB2762《食品安全国家标准食品中污染物限量》、GB29921《食品安全国家标准食品中致病菌限量》的要求，进行编写。本标准所有内容应符合强制性国家标准、行业标准及地方标准，若与其相抵触时，以国家标准、行业标准、地方标准为准。本标准由安徽省营养保健食品化妆品协会提出并归口。本标准起草单位：安徽金寨乔康药业有限公司本标准主要起草人：江庆伍本标准于2019年6月1日首次发布，2019年7月1日实施。全国团体标准信息平台3破壁灵芝孢子粉1、范围本标准规定了破壁灵芝孢子粉的技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输及贮存。本标准适用于以多孔菌科真菌赤芝的干燥成熟孢子，经灭菌(辐照灭菌和湿热灭菌等灭菌方法），干燥，低温物理破壁等工艺制得的粉末状破壁灵芝孢子粉。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志GB2761食品安全国家标准食品中真菌毒素限量GB2762食品安全国家标准食品中污染物限量GB4789.1食品国家安全标准食品卫生微生物学检验总则GB4789.2食品国家安全标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB4789.3食品国家安全标准食品卫生微生物学检验大肠菌群计数GB4789.4食品国家安全标准食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.10食品国家安全标准食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB4789.15食品国家安全标准食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定GB5009.4食品国家安全标准食品中灰分的测定GB5009.12食品国家安全标准食品中铅的测定GB5009.11食品国家安全标准食品中总砷及无机砷的测定GB5009.17食品国家安全标准食品中总汞及有机汞的测定GB5749生活饮用水卫生标准GB14881食品安全国家标准食品生产通用卫生规范GB16740食品安全国家标准保健食品GB17405食品安全国家标准保健食品良好生产规范JJF1070定量包装商品净含量计量检验规则《中华人民共和国药典》2015年版一部，四部国家质量监督检验检疫总局[2005]第75号令《定量包装商品计量监督管理办法》3、术语和定义破壁灵芝孢子粉，是以多孔菌科真菌赤芝的干燥成熟孢子为原料，经灭菌(辐照灭菌和湿热灭菌等灭菌方法），干燥，低温物理破壁等工艺制得制成的粉末状产品。4、技术要求4.1原料要求葛根应符合《中华人民共和国药典》2015年版一部要求。4.2感官指标应符合表1的规定。全国团体标准信息平台4表1感官指标项目指标检验方法性状本品为棕褐色粉末，无结块取本品适量，置于自然光下观察其颜色、性状、杂质，尝其滋味，嗅其气味。滋味、气味本品气微，味淡或微苦，无异味杂质在自然光下，无肉眼可见外来杂质4.3鉴别显微鉴别：粉末棕褐色，孢壁多破碎，双层，外壁平滑、透明，内壁淡褐色或近褐色。不得检出菌丝、淀粉粒等异物。4.4理化指标应符合表2规定。表2理化指标项目指标检验方法破壁率%≥951破壁率的测定水分，%≤9.0GB5009.3总灰分，%≤3.0GB5009.4铅（以Pb计），mg/kg≤2.0GB5009.12砷（以As计），mg/kg≤1.0GB5009.11汞（以Hg计），mg/kg≤0.1GB5009.171破壁率的测定1.1仪器与设备1.1.1血球计数板：25个中格×16个小格或16个中格×25个小格。1.1.2电子分析天平：精度0.1mg。1.1.3超声波清洗器：功率≥45W。1.1.4光学显微镜：放大倍数≥200。1.1.5烘箱。1.2试剂和溶液除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯。1.2.1实验用水应符合GB/T6682规定的三级水规格。1.2.2吐温80。1.2.3蔗糖。1.3样品制备分别取同一批次有代表性灵芝孢子粉和破壁灵芝孢子粉的样品各至少100g，分别充分混匀，置于密闭的容器内。1.4分析步骤1.4.1取适量同一批次的灵芝孢子粉A和破壁灵芝孢子粉B，于烘箱60℃下烘干5h。1.4.2准确称取经烘干的孢子粉A和破壁灵芝孢子粉B，其中mA=0.1000g，mB=0.1500g。1.4.3分别称取5.0g经过研磨后过100目筛的蔗糖粉末，分别与孢子粉A、B充分混合至色泽均一。用蒸馏水分别溶解上述样品，在样品溶液中加0.1mL吐温80，用蒸馏水定容到100mL的容量瓶中，并在室温超声震荡30min，使孢子充分分散。全国团体标准信息平台51.4.4将待测孢子悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使液体缓缓渗入，多余的液体用吸水纸吸取，进样完成后静置约30s，然后将血球计数板置于200倍及以上放大倍数的光学显微镜下进行观察计数。1.4.5使用25个中格×16个小格的计数板时，应计算出血球计数板4个角上与中央5个中格中含完整灵芝孢子的数目（即以80个小格为一个计数单位）；当使用16个中格×25个小格的计数板时，应计算出血球计数板4个角上的4个中格中含完整灵芝孢子的数目（即以100个小格为一个计数单位）。如有部分孢子处于中格边线上，计数时应该仅统计位于中格四个边线的其中两个边线的孢子数，每个样品观察计数时应去掉离群较大的值，每个样品有效观察计数不少于3次，然后计算它们的平均数n。1.5结果计算1.5.1使用25个中格×16个小格的计数板时，每克孢子粉中含完整灵芝孢子数按式（1.1）计算：（1.1）式中：N——每克孢子粉含完整的灵芝孢子数，单位为个每克（个/g）；n——80个小方格内含完整灵芝孢子的总数，单位为个；V——孢子稀释液的体积，单位为毫升（mL）；m——样品的质量，单位为克（g）；400——血球计数板的计数室内共有400个小方格；10000——血球计数板计数室的容积为0.1mm3，1mL相当于10000个血球计数板计数室的容积。1.5.2使用16个中格×25个小格的计数板时，每克孢子粉中含完整灵芝孢子数按式（1.2）计算：（1.2）式中：N——每克孢子粉含完整的灵芝孢子数，单位为个每克（个/g）；n——100个小方格内含完整灵芝孢子的总数，单位为个；V——孢子稀释液的体积，单位为毫升（mL）；m——样品的质量，单位为克（g）；400——血球计数板的计数室内共有400个小方格；10000——血球计数板计数室的容积为0.1mm3，1mL相当于10000个血球计数板计数室的容积。1.5.3破壁率按式（1.3）计算：（1.3）式中：X——破壁灵芝孢子粉的破壁率，%；NB——每克破壁灵芝孢子粉中含完整的灵芝孢子数，单位为个每克（个/g）；NA——每克灵芝孢子粉中含完整的灵芝孢子数，单位为个每克（个/g）。4.5微生物指标应符合表3规定。表3微生物指标项目指标检验方法菌落总数，CFU/g≤30000GB4789.2霉菌和酵母，CFU/g≤50GB4789.15大肠菌群，MPN/g≤0.92GB4789.3MPN计数法沙门氏菌0/25gGB4789.4金黄色葡萄球菌0/25gGB4789.10全国团体标准信息平台64.6标志性成分指标应符合表4规定。表4标志性成分指标项目指标检验方法多糖，%≥0.9（以无水葡萄糖（C6H12O6）计）2多糖的测定三萜，%≥3.03三萜的测定2多糖的测定2.1试剂和材料2.1.1硫酸（分析纯）2.1.2葡萄糖（分析纯）2.1.3无水乙醇（分析纯）2.1.4硫酸蒽酮溶液：精密称取蒽酮0.1g，加硫酸溶液100mL使溶解，摇匀，置于棕色瓶中即得。2.2仪器和设备2.2.1分析天平（感量0.0001g）2.2.2分光光度计2.2.3玻璃回流装置2.2.4电热恒温水浴锅2.2.5容量瓶25mL，50mL容量瓶2.2.6各规格移液管2.2.7具塞试管25mL2.2.8滤纸（中速定性滤纸）。2.3标准曲线的制备2.3.1对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品适量，精密称定加水制成每1mL含0.12mg的溶液，即得。2.3.2标准曲线绘制精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分别置于10mL的具塞试管中，各加水至2.0mL，迅速精密加入硫酸蒽酮溶液6mL，立即摇匀，放置15min，立即置冰水浴中冷却15min，取出，以相应的试剂为空白，在625nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。2.4供试品溶液的制备取本品粉末约1~2g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水60mL，静置1h，加热回流4h，趁热过滤，用少量热水洗涤滤器和滤渣，将滤纸和滤渣置圆底烧瓶中，加水60mL，加热回流3h，趁热过滤，合并滤液，置水浴锅上蒸干，残渣用水5mL溶解，边搅拌边缓慢加入乙醇75mL，摇匀，在4℃放置12h，离心，弃去上清液，沉淀物用热水溶解并转移至50mL，放冷，加水至刻度，摇匀取溶液适量，离心，精密量取上清液3mL，置25mL量瓶，加水至刻度，摇匀，即得。2.5测定精密量取供试品溶液2mL,置10mL具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“迅速精密加入硫酸蒽酮溶液6mL”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算即得。2.6结果计算8255023100cWm式中：W-灵芝多糖的含量，%；c-从标准曲线上查的样品的多糖浓度，mg/mL；全国团体标准信息平台7m-样品质量，mg；82、253-表示稀释倍数。50-水提醇沉后获得的沉淀物经热水溶解定容的体积数值3三萜3.1仪器与用具：电子天平、超声清洗器、水浴锅、紫外分光光度计。3.2试剂与试液：齐墩果酸对照品、甲醇、乙醇、香草醛、冰醋酸、高氯酸、乙酸乙酯。3.3操作步骤：对照品溶液的制备：取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分别置15ml具塞试管中，挥干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液（精密称取香草醛0.5g，加冰醋酸使溶解成10ml，即得）0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，在70℃水浴中加热15分钟，立即置冰浴中冷却5分钟，取出，精密加入乙酸乙酯4ml，摇匀，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在546nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。供试品溶液的制备：取本品粉末约0.5~1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇50ml，超声处理（功率140W，频率42kHz）45分钟，滤过，滤液置100ml量瓶中，用适量乙醇，分次洗涤滤器和滤渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。测定法：精密量取供试品溶液0.2ml，置15ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“挥干”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中齐墩果酸的含量，计算，即得。3.5结果计算：式中：X—以干燥品计算，供试品中总三萜以齐墩果酸计的含量，%；A—标准曲线上读出供试品溶液中含量，mg；W—供试品重量，g；【贮存条件】：阴凉干燥处。4.7净含量应符合国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号《定量包装商品计量监督管理办法》的规定，并按照JJF1070的规定检验。5、生产加工过程的卫生要求应符合GB14881、GB17405的规定。6、检验规则6.1批次、抽样6.1.1批次的确定：同一条生产线、同一批投料、同一个班次生产、同一种规格的产品为一个批次。6.1.2抽样：在生产线每批次随机抽取不少于300g，1/3用于检验，2/3用于留样。6.2检验分类产品检验分为出厂检验和型式检验。6.2.1