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TB宁夏食品安全协会团体标准T/NXFSA001—2019枸杞中12种农药残留快速检测方法胶体金免疫层析法2019-07-17发布2019-07-17实施宁夏食品安全协会发布全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/NXFSA001—2019I前 言本标准是按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编写。本标准由杞源堂（宁夏）生物科技有限公司提出，宁夏食品安全协会归口。本标准主要起草单位：杞源堂（宁夏）生物科技有限公司、宁夏中农艾森检测有限公司、深圳市易瑞生物技术股份有限公司、宁夏食品安全协会、宁夏食品检测研究院、宁夏食品质量监督检验二站、中宁县枸杞产业发展服务局、宁夏百瑞源枸杞产业发展有限公司、宁夏红枸杞产业有限公司。本标准主要起草人：余君伟、金虹、孟跃军、乔长晟、岳苑、伊倩茹、张慧玲、凌锡喆、付辉、刘娟、严立宁、王文辉、张金宏、周学义、张美娟、曾楚怡、曹琛、马涛、严义勇、井辉隶、王炳志、沈晗、朱嘉辉、严海霞、马莹、郭小瑞。全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/NXFSA001—20191枸杞中12种农药残留快速检测方法胶体金免疫层析法1范围本标准规定了枸杞鲜果、干果中啶虫脒、吡虫啉、毒死蜱、多菌灵、氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲环唑、克百威、哒螨灵、甲基对硫磷、炔螨特残留的胶体金免疫层析快速检测方法。本标准适用于枸杞鲜果和干果中啶虫脒、吡虫啉、毒死蜱、多菌灵、氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲环唑、克百威、哒螨灵、甲基对硫磷、炔螨特12种农药残留的快速检测。2原理应用胶体金竞争抑制免疫层析法的原理，样品中残留的待测物与检测线上的待测物抗原共同竞争胶体金标记的特异性抗体，通过检测线与控制线颜色深浅比较，对样品中待测物进行定性半定量判定。3试剂与材料3.1胶体金免疫层析试剂盒农药残留胶体金免疫层析检测试剂盒，含胶体金试纸条及配套试剂。3.2提取液3.2.1水溶性农药提取液：啶虫脒、吡虫啉、毒死蜱、多菌灵、克百威、哒螨灵、甲基对硫磷、炔螨特，应用纯水或蒸馏水为提取液。3.2.2不溶或难于水农药提取液：氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲环唑，应用体积比为1:1水与无水乙醇（分析纯）混合液为提取液。4仪器设备4.1电子天平（感量0.1g）。4.2温育器：40℃±2℃（可选）。4.3便携式读数仪。测量波长：525nm。4.4移液器：300µL。5测定步骤5.1样品前处理选取代表性枸杞样品，称取20g±1.0g整粒样品，放入约120mL带盖容器中，加入提取液。全国团体标准信息平台Q/NXSPAQXH001—20192枸杞干果，直接加入80mL提取液；枸杞鲜果，应捣碎后加入80mL提取液。拧紧容器盖，充分震荡混匀3min，再浸泡5min～10min后摇匀，用移液器移取上清液3-5ml至5mL离心管中，即为待测液。5.2测定5.2.1检测卡法测定取出检测卡，水平放置，用吸管吸取一定量待测液，滴2～3滴到加样孔，滴加时须缓慢逐滴加入。在滴加样品后应在5min～10min内读结果，10min后结果无效。5.2.2试纸条与金标微孔（试剂瓶）法测定吸取制备好的样品待测液9～10滴（约300μL）于含胶体金的微孔或试剂瓶中，并上下抽吸5～10次混匀或摇晃试剂瓶6～8次充分溶解混匀。于20℃～40℃开始第一次温育2分钟；取出试纸筒中的试纸条，将测试条插入微孔或试剂瓶中；于20℃～40℃开始第二次温育5分钟；从微孔或试剂瓶中取出测试条，轻轻刮去测试条下端的吸水海绵，进行结果判读。.6结果判读6.1目视判定6.1.1通过对比控制线（C线）和测试线（T线）的颜色深浅来进行结果判定。由于长时间放置会引起测试线颜色的变化，应在5min内进行结果判读。6.1.2首先查看控制线是否有颜色显现。如果不显色，检测无效，需另取测试条进行测试。6.1.3控制线正常显色的情况下，按表1进行结果判断，示意图见图1。表1结果判断依据测试线（T线）与控制线（C线）颜色深浅比较结果判断结果分析T线颜色深于C线阴性说明被测样品中未检出被测农药T线颜色浅于C线或T线不显色阳性说明检测样品中检出被测农药注：“空白”系未滴加任何试剂的全新测试条图样。全国团体标准信息平台T/NXFSA001—20193图1目视判定示意图6.2读数仪判定6.2.1如果使用读数仪进行结果判断，应于反应完成5min内读取结果。6.2.2应按照读数仪的使用说明书读数。6.2.3阴性结果R≥1.0，阳性结果R＜1.0。计算方式：峰面积分析，计算检测线峰面积/控制线峰面积比值。7检出限检出限应符合表2规定。表2胶体金免疫层析检测方法检出限检测农药名称检出限（mg/kg）检测农药名称检出限（mg/kg）啶虫脒2.0吡虫啉1.0毒死蜱0.1多菌灵1.0氯氰菊酯2.0氯氟氰菊酯0.2氰戊菊酯0.2苯醚甲环唑0.1克百威0.02哒螨灵0.5甲基对硫磷0.02炔螨特3.08确证实验如被测样品中试纸条检测结果为阳性时，应采用国标方法进行确证检测。9其它本方法的测定步骤和结果判读也可以根据厂家试剂盒的说明书进行。全国团体标准信息平台