TSATA 0008-2018 水果和蔬菜中多种植物生长调节剂的检测 液相色谱串联质谱法

T/SATA0008—2018水果和蔬菜中多种植物生长调节剂的检测液相色谱串联质谱法DeterminationofPlantGrowthRegulatorsinFruitsandVegetablesbyHPLC-MS-MS2018-05-01发布2018-06-01实施发布深圳市分析测试协会发布ICS67.050X04团体标准T/SATA0008—2018I目次前言………………………………………………………………………………………………Ⅱ1.范围………………………………………………………………………………………………12.原理………………………………………………………………………………………………13.试剂………………………………………………………………………………………………14.仪器………………………………………………………………………………………………15.操作步骤…………………………………………………………………………………………26.结果计算…………………………………………………………………………………………37.精密度……………………………………………………………………………………………3附录A……………………………………………………………………………………………4附录B……………………………………………………………………………………………7附录C……………………………………………………………………………………………9附录D……………………………………………………………………………………………13附录E……………………………………………………………………………………………16T/SATA0008—2018II前言本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。本标准由深圳市分析测试协会归口。本标准主要起草单位：深圳市农产品质量安全检验检测中心。本标准主要起草人：胡祥娜，顾亚萍,林慧纯，张世瑞，王瑞，李秋剑。本标准为首次发布。T/SATA0008—20181水果和蔬菜中多种植物生长调节剂的检测液相色谱串联质谱法1范围本标准适用于水果和蔬菜中多种植物调节剂（抑芽丹、矮壮素、3-吲哚乙酸、反式-玉米素、赤霉素、4-氯-吲哚乙酸、6-糠氨基嘌呤、3-吲哚丁酸、茉莉酸、6-苄基腺嘌呤、西玛津、胺鲜酯、噻苯隆、莠去津、氯吡脲、甲基氯甲丹、吲熟酯、多效唑、烯效唑、芸苔素内酯、水杨酸、4-氯苯氧乙酸、脱落酸、2,4-滴）的液相色谱串联质谱法测定。本方法的检出限为：胺鲜酯、噻苯隆和氯吡脲3种植物调节剂为0.01mg/kg，反式-玉米素、6-糠氨基嘌呤、6-苄基腺嘌呤、莠去津、吲熟酯、多效唑等6种植物调节剂为0.015mg/kg，抑芽丹、矮壮素、3-吲哚乙酸、赤霉素、4-氯-吲哚乙酸、3-吲哚丁酸、茉莉酸、西玛津、甲基氯甲丹、烯效唑、芸苔素内酯、水杨酸、4-氯苯氧乙酸、脱落酸和2,4-滴等15种植物调节剂为0.060mg/kg。2原理水果和蔬菜中多种植物调节剂经酸化乙腈提取，浓缩置换试剂，经0.22μmPTFE滤膜过滤，以甲醇和盐溶液为流动相，在C18色谱柱上分离，使用多离子提取扫描，使用同基质的空白样品加标液为准测定其含量。3试剂3.1水(GB/T6682规定的一级水)3.2甲醇（色谱纯）3.3甲酸（色谱纯）3.4乙酸铵（色谱纯）3.5乙腈（色谱纯）3.6无水硫酸镁（色谱纯）3.7氯化钠（分析纯）3.8乙酸铵甲酸溶液（5mmol/L乙酸铵+0.5%甲酸）：准确称取乙酸铵0.196g，移取0.25mL甲酸，加水稀释到500mL，经超声波清洗器脱气5min用于仪器流动相。3.9酸化乙腈：甲酸+乙腈（5+1000mL，体积比）。3.10植物调节剂相关标准品：纯度≥95%，相关标准品清单见附录1。3.11植物调节剂标准储备液：称取植物调节剂标准品（0.01g~0.4g）适量于10.0mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，配置成各植物调节剂标准储备溶液，于－18℃条件下保存可使用一年。经纯度校正后，得各种标准品浓度。准确吸取一定量的混合标准溶液，用甲醇定容至50.0mL，得植物调节剂混合标准工作液30μg/mL（5-羟基-吲哚乙酸、反式-玉米素、6-糠氨基嘌呤、6-苄基腺嘌呤、莠去津、氯吡脲、吲熟酯为7.5μg/mL）。4仪器T/SATA0008—201824.1液相色谱串联质谱仪。4.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。4.3氮气吹干仪。4.4高速组织捣碎机：转速不低于20000r/min。4.5旋涡混合器。4.6高速离心机：最大转速为5000r/min。4.7回旋式振荡器。4.850mL塑料离心管。4.915mL玻璃离心管。4.10样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯瓶盖。4.11针头过滤器，0.22μmPTFE滤膜5操作步骤5.1试样处理水果、蔬菜样品取样部位按照GB2763附录A执行，取样品切碎混匀均一化制成匀浆，制备好的试样均分成两份，装入洁净的盛样容器内，密封并标记。5.2试样的保存将试样置于-18℃保存。5.3提取准确称取样品5g（±0.05g）于50mL尖底塑料离心管中，加入30mL酸化乙腈高速组织捣碎机匀浆2min(12000r/min)。加入氯化钠1.5g，无水硫酸镁0.2g，剧烈振摇1min后置于回旋式振荡器下振荡30min，使氯化钠充分溶解，离心5min（转速为4000r/min）。5.4溶剂置换移取上清液2mL于氮吹仪上50℃条件下吹至近干，使用1mL50%甲醇水溶液混匀定容，0.22μm的PTFE滤膜过滤后上机。5.5色谱条件色谱柱：AcquityUPLCBEHC18色谱柱，1.7μm，50mm×2.1mm（内径）或相当者。流动相：A：甲醇；B：盐溶液（5mmol/L乙酸铵+0.5%甲酸）：准确称取乙酸铵0.196g，移取0.25mL甲酸，加水稀释到500mL，经超声波清洗器脱气5min用于仪器流动相用。梯度条件见表1。流速：0.25mL/min。进样量：1μL。表1流动相及梯度洗脱条件时间/min流动相A：甲醇(%)流动相B：盐溶液(%)0109011090230703307054555750507.560408.575259802010.59010T/SATA0008—201831110901310905.6质谱条件电喷雾电离（electrosprayionization，ESI）：ESI＋/ESI-电离模式；毛细管电压3kV；干燥气温度450℃；干燥气流速900L/h；锥孔气流速150L/h；雾化压力0.7MPa；碰撞气流速0.15mL/min。多种植物调节剂分子量信息及监测离子对和锥孔电压、碎裂电压详见附录1-2。5.7定性测定在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度＞50%，允许±20%偏差；相对丰度20%~50%，允许±25%偏差；相对丰度10%~200%，允许±30%偏差；相对丰度≤10%，允许±50%偏差），则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。5.8定量测定本标准采用外标-标准曲线法定量测定，定量用标准溶液采用同种基质配置，且所测样品中植物调节剂的相应值应在仪器的线性范围内。各种植物调节剂的多反应监测(MRM)色谱图参见附录。6结果计算试样中植物调节剂的含量按下式计算：ω=式中：ω——试样中被测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c——由标准曲线求得样液中被测组分浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V1——试样提取液体积，单位为毫升（mL）;V2——试样分取体积，单位为毫升（mL）;V3——试样浓缩后定容体积，单位为毫升（mL）;m——用于分析样品质量，单位为克（g）;7精密度在重复性条件下获得的各类精密度数据参见附录4，实验室内部的变异系数参考范围见附录5。T/SATA0008—20184附录A（资料性附录）多种植物调节剂中英文对照序号产品名称英文名称分子式分子量结构式母离子定量离子定性离子1抑芽丹MaleichydrazideC4H4N2O2112.1112.99584.91567.0882矮壮素ChlormequatchlorideC5H13Cl2N157.0123.99964.94558.933-吲哚乙酸3-Indolyl-aceticacidC10H9NO2175.2176.031129.952102.974反式-玉米素Trans-ZeatinC10H13N5O219.3220.08202.019136.015赤霉素GibberellinA3C19H22O6346.4364.174239.234329.2164-氯-吲哚乙酸4-Chloroindole-3-aceticacidC10H8ClNO2209.6209.992164.1128.2776-糠氨基嘌呤KinetinC10H9N5O215.2216.04980.935147.9883-吲哚丁酸4-(3-Indolyl)-butyricacidC12H13NO2203.2204.063186.003129.969茉莉酸JasmonicacidC12H18O3210.3211.094151.027133.02106-苄基腺嘌呤6-BenzylaminopurineC12H11N5225.1226.069591.21148.18T/SATA0008—2018511西玛津SimazineC7H12ClN5201.7202.05131.9123.9712胺鲜酯DA-6（diethylaminoethylhexanoate）C12H25NO2215.2216143100.0513噻苯隆ThidiazuronC9H8N4OS220.2221.01101.925127.9314莠去津AtrazineC8H14ClN5215.7216.1174.196.115氯吡脲ForchlorfenuronC12H10ClN3O247.7247.9561128.9892.9616甲基氯甲丹Chlorflurenol-methylesterC15H11ClO3274.7274.05228.951256.8417吲熟酯EthychlozateC11H11N2O2Cl238.1238.955164.922137.8818多效唑PaclobutrazolC15H20ClN3O293.8294.170.2125.119烯效唑UniconazoleC15H18ClN3O291.8292.212513920芸苔素内酯BrassinolideC28H48O6480.7481.313445.24894.96521水杨酸SalicylicacidC7H6O3138.1136.93692.91265.2224-氯苯氧乙酸para-ChlorophenoxyaceticacidC8H7O3Cl186.0184.9126/187127.1096129T/SATA0008—2018623脱落酸AbscisicacidC15H20O4264.3263.04152.972219.04242,4-滴（2,4-dichlorophenoxy）aceticacidC8H6O3Cl2221.0219/221161163备注：实际检测时所用定性、定量离子的质量数保留到小数点后一位即可。T/SATA0008—20187附录B（资料性附录）多种植物调节剂质谱检测条件名称母离子定量/定性离子扫描时间锥孔电压碎裂电压抑芽丹112.995467.08790.0513416112.995484.91510.0513416矮壮素123.999258.90010.0258618123.999264.94450.0258616反式-玉米素220.0801136.01290.08218220.0801202.01920.082126-糠氨基嘌呤216.048880.93510.08416216.0488147.97850.08414胺鲜酯216.0928100.04