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T/ZZB0393—2018I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由浙江省品牌建设联合会提出并归口。本标准由浙江蓝箭万帮标准技术有限公司牵头组织制定。本标准主要起草单位：浙江康恩贝制药股份有限公司。本标准参与起草单位：金华市食品药品检验检测研究院。本标准主要起草人：叶剑锋、王宜祥、姚建标、胡林水、雷凯琴、沈紫江、张云飞、赵丹、郑涛。本标准由浙江蓝箭万帮标准技术有限公司负责解释。T/ZZB0393—20181银杏叶提取物1范围本标准规定了银杏叶提取物的基本要求、技术要求、检测方法、检验规则及标签、包装、运输、贮存以及质量承诺等。本标准适用于以银杏干燥叶经乙醇溶液提取分离制成的银杏叶提取物。【中文名称】银杏叶提取物【CASNO.】90045-36-6【英文名称】GINKGOLEAVESEXTRACT2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB8978污水综合排放标准GB21906中药类制药工业水污染物排放标准《中华人民共和国国际商务标准》(SW/T1-2013)国际商务标准植物提取物银杏叶提取物《中华人民共和国药典》（2015年版）一部银杏叶提取物《中国人民共和国药典》（2015年版）四部环境保护部危险废物规范化管理指标体系3基本要求3.1工艺银杏叶提取物由干燥银杏叶经粉碎、乙醇溶液提取、上柱吸附、浓缩干燥等工序生产制得。3.2原料应从按照中药生产质量管理规范要求的规范化种植基地采摘银杏GinkgobilobaL.的鲜叶，采收期为6月～10月，经去除杂质，快速高温干燥而成的干燥叶。经干燥后的银杏叶应符合表1要求。表1原料检测项目项目名称指标测试方法总黄酮醇苷（以干燥品计）/（％）≥0.40《中华人民共和国药典》2015版一部萜类内酯（以干燥品计）/（％）≥0.25《中华人民共和国药典》2015版一部水分/（％）≤12.0《中华人民共和国药典》2015版一部总灰分/（％）≤10.0《中华人民共和国药典》2015版一部T/ZZB0393—20182表1（续）项目名称指标测试方法杂质/（％）≤2《中华人民共和国药典》2015版一部酸不溶性灰分/（％）≤2.0《中华人民共和国药典》2015版一部醇溶性浸出物/（％）≥25.0《中华人民共和国药典》2015版一部3.3生产设备3.3.1应具备自动上料、提取、履带干燥、金属在线检测等生产设备，设备应具有在线清洗以及洁净除尘等自控功能。3.3.2生产过程使用的设备应无毒、耐腐蚀、不得与产品发生化学反应、不得吸附产品或向产品中释放物质，与产品直接接触的设备应采用316L型不锈钢材质。全程物料运输处于全封闭状态，减少与外界接触产生交叉污染的风险。3.4过程控制生产过程应符合《药品生产质量管理规范》（GMP）要求，成品干燥、粉碎、混合和包装等工序应在D级洁净控制区内进行，全程空调系统、水系统、生产系统等均应当有在线监控。3.5检测能力应具备产品的性状、鉴别、水分、炽灼残渣、粒度、芦丁、乙醇、黄酮苷元峰面积比、游离黄酮苷元、总银杏酸、槐角苷、重金属、铅、镉、砷、汞、指纹图谱、总黄酮醇苷、萜类内酯以及微生物限度检查的检测能力。3.6安全环保3.6.1生产过程废水排放应符合GB8978中限值标准的规定。3.6.2废水排放应执行GB21906中规定的排放标准。3.6.3危险固废应按照《危险废物规范化管理指标体系》中的要求实施。4技术要求4.1性状要求应符合表2规定。表2性状要求项目要求色泽浅棕黄色至棕褐色气味气微，味微苦外观均匀，无可见异物粉末4.2理化指标应符合表3规定。T/ZZB0393—20183表3理化指标项目名称指标鉴别（1）薄层色谱鉴别供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。（2）液相色谱鉴别供试品色谱中应呈现与银杏叶总内酯对照提取物色谱峰保留时间相对应的色谱峰。检查水分/（％）≤3.0炽灼残渣/（％）≤0.6重金属/（mg/kg）≤10铅（Pb）/（mg/kg）≤1.0镉（Cd）/（mg/kg）≤0.2砷（As）/（mg/kg）≤1.0汞（Hg）/（mg/kg）≤0.1粒度99％通过五号筛芦丁/（％）≤4.0乙醇/（％）≤0.2黄酮苷元峰面积比槲皮素与山柰素的峰面积比应为0.8～1.2异鼠李素与槲皮素的峰面积比应＞0.15游离黄酮苷元（以干燥品计）每1g含槲皮素（C15H10O7）不得过5.0mg，山柰素不得过5.0mg，异鼠李素（C16H12O7）不得过2.0mg总银杏酸〔以白果新酸计/（mg/kg）〕≤1槐角苷不得显阳性黄曲霉毒素每1000g含黄曲霉毒素B1不得过2μg，含黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的总量不得过4μg指纹图谱与对照指纹图谱相似度不得低于0.90含量测定（以干燥品计）总黄酮醇苷/（％）≥26.0萜类内酯（以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的总量计）萜类内酯不得少于7.0％，其中白果内酯（BB）不得少于2.6％4.3微生物要求应符合表4的规定。表4微生物要求项目指标需氧菌总数/（cfu/g）≤500霉菌和酵母菌总数/（cfu/g）≤50大肠埃希菌不得检出/gT/ZZB0393—201845检测方法5.1安全提示及一般要求5.1.1本实验方法中涉及部分具有腐蚀性和毒害性的试剂，应按规定操作，使用时应小心谨慎。试剂储存应符合规定和要求。5.1.2除特别标明外，用于液相测定和气相测定使用的试剂均为色谱级，用于测定铅、镉、砷、汞使用的试剂均为优级纯，其他一般测定所用试剂为分析纯，水为超纯水或相应纯度的水，未标明溶剂的溶液为水溶液。测定中所需溶液在未注明时，均按《中华人民共和国药典》2015版的规定制备。5.2性状要求启开试样后，立即嗅其气和尝其味；另取试样适量置于白色瓷盘中观察其色泽、外观，并检查有无异物。5.3鉴别5.3.1鉴别（1）：按《中华人民共和国药典》2015版一部中银杏叶提取物【鉴别】项下“（1）”规定的方法进行测定。5.3.2鉴别（2）：按《中华人民共和国药典》2015版一部中银杏叶提取物【鉴别】项下“（2）”规定的方法进行测定。5.4水分按《中华人民共和国药典》2015版一部中银杏叶提取物【检查】项下“水分”规定的方法进行测定。5.5炽灼残渣按《中华人民共和国药典》2015版一部中银杏叶提取物【检查】项下“炽灼残渣”规定的方法进行测定。5.6重金属取【炽灼残渣】项下残渣，按《中华人民共和国药典》2015版一部中银杏叶提取物项【检查】项下“重金属”规定的方法进行测定。5.7铅按《中华人民共和国药典》2015年版四部铅、镉、砷、汞、铜测定法通则2321进行测定。5.8镉按《中华人民共和国药典》2015版四部铅、镉、砷、汞、铜测定法通则2321进行测定。5.9砷按《中华人民共和国药典》2015版四部铅、镉、砷、汞、铜测定法通则2321进行测定。5.10汞按《中华人民共和国药典》2015版四部铅、镉、砷、汞、铜测定法通则2321进行测定。5.11粒度T/ZZB0393—20185取样品约30g，按《中华人民共和国药典》2015版四部通则0982第二法进行测定。5.12芦丁5.12.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于15000。表5芦丁色谱条件与系统适用性试验时间（min）流动相A（％）流动相B（％）0～4090→6410→3640～4564→036→10045～50010050～510→90100→1051～6090105.12.2对照品溶液的制备取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液。5.12.3供试品溶液的制备取银杏叶提取物100mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，取续滤液，即得。5.12.4测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算芦丁的含量。5.13乙醇5.13.1色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇（PEG-20M）为固定相的毛细管柱，柱温为程序升温：初始温度40℃，保持5min，以每分钟10℃速率升温至50℃，保持7分钟，再以每分钟20℃速率升温至150℃，保持2分钟，再以每分钟50℃速率升温至200℃，保持2min。检测器温250℃；顶空瓶平衡温度100℃，平衡时间35min。5.13.2对照溶液的制备精密称取无水乙醇适量，用N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释制成0.5mg/ml的溶液，摇匀，即得。精密量取对照溶液2ml，置于5ml顶空瓶中，密封。5.13.3供试品溶液的制备精密称取银杏叶提取物约0.6g，置5ml顶空瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺2ml溶解，密封。5.13.4测定法进样，记录色谱图。按外标法以峰面积计算。5.14黄酮苷元峰面积比T/ZZB0393—20186按5.20.1中项下的总黄酮醇苷色谱峰计算槲皮素与山柰素的峰面积比值，异鼠李素与槲皮素的峰面积比的比值。5.15游离黄酮苷元5.15.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液（50:50）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于25005.15.2对照品溶液的制备分别取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含30μg、30μg、20μg的混合溶液，作为对照品溶液。5.15.3供试品溶液的制备取银杏叶提取物约40mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。5.15.4测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。5.16总银杏酸按《中华人民共和国药典》2015版一部中银杏叶提取物项【检查】项下“总银杏酸”项规定的方法进行测定。5.17槐角苷5.17.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以乙腈为流动相B，以0.4％磷酸溶液为流动相C；按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm。理论板数按槐角苷峰计算应不低于40000。表6槐角苷色谱条件与系统适用性试验时间（min）流动相A（％）流动相B（％）流动相C（％）0～2015→25877→6720～4025→50867→4240～4150→15842→775.17.2专属性试验分别取银杏叶对照提取物溶液，槐角对照药材溶液及槐角苷对照品溶液，进样分析。银杏叶对照提取物溶液在与槐角苷对照品保留时间相同位置不得出现干扰峰，若有干扰，峰面积不得超过槐角苷对照品峰面积的5％；槐角对照药材溶液中，槐角苷与其他色谱峰分离度应符合要求。5.17.3对照溶液的制备T/ZZB0393—20187取槐角苷对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含20.0μg的溶液，作为对照品溶液；另取银杏叶对照提取物40mg，加入80％甲醇溶液20ml超声处理10分钟，滤过，取续滤液，即得银杏叶对照提取物溶液；再取槐角对照药材40mg，同法制成槐角对照药材溶液。5.17.4供试品溶液的制备取银杏叶提取物约40.0mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。5.17.5测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。