DBS45 054-2018 食品安全地方标准 食品中氟虫腈及其代谢物残留量测定 高效液相色谱-串联

DBS45广西壮族自治区地方标准DBS45/054—2018食品安全地方标准食品中氟虫腈及其代谢物残留量测定高效液相色谱-串联质谱法2018-12-30发布2019-06-30实施广西壮族自治区卫生健康委员会发布DBS45/054—2018I前言本标准按GB/T1.1—2009的格式编写。本标准由广西壮族自治区卫生健康委员会提出。本标准起草单位：广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心。本标准主要起草人：秦富、汪文龙、司露露、吴玉杰、吕春秋、罗兆飞、赵永锋、黄大新、郑玲、蔡翔宇。DBS45/054—20181食品安全地方标准食品中氟虫腈及其代谢物残留量测定高效液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了食品中氟虫腈及其代谢物氟虫腈亚砜、氟虫腈砜和氟甲腈残留量的高效液相色谱-串联质谱检测方法。本标准适用于苹果、芒果、尖椒、大米、绿茶、猪肝、牛肉、虾、鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留量的检测,其它同类食品可参照执行。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中的氟虫腈及其代谢物残留量用1%醋酸乙腈振荡提取，用吸附剂Na2SO4、PSA、C18和GCB进行净化，高效液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4试剂及其配制除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。4.1试剂和材料4.1.1乙腈（C2H3N）：色谱纯。4.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.3醋酸（CH3COOH）：色谱纯。4.1.4无水硫酸钠（Na2SO4）：用前于650℃灼烧4h，处于干燥器中冷却使用。4.1.5无水醋酸钠（CH3COONa）。4.1.6无水硫酸镁（MgSO4）。4.1.7N-丙基乙二胺（PSA）：40—60μm。4.1.8HC-C18型吸附剂（C18）：40—63μm。4.1.9石墨化炭黑（GCB）：120—400MESH。4.1.10净化管：分别称取1.00gNa2SO4、0.30gPSA、0.20gC18和0.10gGCB至15mL离心管中。DBS45/054—201824.2溶液配制4.2.11%醋酸乙腈溶液：取10mL醋酸，加入乙腈并定容至1000mL。4.2.2乙腈水溶液（1+1,v/v）：取500mL乙腈，加入500mL水，摇匀备用。4.3标准品4.3.1氟虫腈：Fipronil，C12H4Cl2F6N4OS，CAS号120068-37-3，纯度大于等于98%。4.3.2氟虫腈砜：Fipronil-sulfone，C12H4Cl2F6N4O2S，CAS号120068-36-2，纯度大于等于98%。4.3.3氟虫腈亚砜：Fipronil-sulfide，C12H4Cl2F6N4S，CAS号120067-83-6，纯度大于等于98%。4.3.4氟甲腈：Fipronil-desulfinyl，C12H4Cl2F6N4，CAS号205650-65-3，纯度大于等于99%。4.4标准溶液配制4.4.1标准储备液：分别称取适量（精确至0.0001g）各标准物质，用丙酮溶解配制浓度为100μg/mL的标准储备液，避光-18℃保存，保存期12个月。4.4.2混合标准中间液：分别准确移取适量的氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈标准储备液，用甲醇稀释配制成浓度为1μg/mL，避光-18℃保存，保存期1个月。4.4.3混合标准工作液：准确移取适量的混合标准中间液，用乙腈水（4.2.2）配制成适用浓度（至少5个浓度系列，用于做标准工作曲线），现配现用。5仪器设备5.1高效液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI源）。5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。5.3刀式研磨仪。5.4粉碎机。5.5离心机：4000r/min。5.6涡旋振荡器。5.7垂直或水平往复型振荡器。5.8移液器：100μL，1000μL，5000μL。5.9容量瓶：100mL。5.10微孔滤膜：0.22μm，有机相。5.11聚丙烯离心管：15mL，50mL。6试样制备与保存6.1取样要求样品的取样部位按GB2763附录A执行，在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2试样制备6.2.1苹果、芒果、尖椒取样品500g，切碎，再用刀式研磨仪均质化，装入洁净容器。DBS45/054—201836.2.2大米、茶叶取样品500g（茶叶取200g），用粉碎机充分磨碎，混匀，装入洁净容器。6.2.3猪肝、牛肉、虾取样品500g，切成小块，再用刀式研磨仪均质化，装入洁净容器。6.2.4鸡蛋取样品500g，去壳，再用刀式研磨仪均质化，装入洁净容器。6.3试样保存鸡蛋等试样4℃避光保存；苹果、芒果、尖椒、猪肝、牛肉、虾等试样于≤-18℃避光保存；大米、茶叶等试样于室温干燥处避光保存。7分析步骤7.1称样及预处理7.1.1苹果、芒果、尖椒称取10g（精确至0.01g）均匀试样于50mL聚丙烯离心管中。7.1.2大米、猪肝、牛肉、虾、鸡蛋称取5g（精确至0.01g）均匀试样于50mL聚丙烯离心管中，加入5mL水，涡旋振荡1min，室温浸泡20min，期间振荡2~3次。肉类和内脏处理后应呈乳糜状。7.1.3茶叶称取2g（精确至0.01g）均匀试样于50mL聚丙烯离心管中，加8mL水，涡旋振荡1min，室温浸泡20min。7.2提取及净化向经过预处理的试样中加入10mL1%醋酸乙腈（4.2.1），盖紧，振荡10min；每管加入4g无水硫酸镁和1g无水醋酸钠，立即盖紧并涡旋振荡混合，再于振荡器上振荡20min，然后以4000rpm离心5min；取2.5mL上层清液至净化管(4.1.10)中，涡旋振荡1~2min，以4000rpm离心5min；取1mL上层清液，加入1mL水，涡旋混合30s，4000rpm离心5min，过0.22μm有机相滤膜后装瓶。7.3测定7.3.1液相色谱-串联质谱参考条件7.3.1.1液相色谱条件7.3.1.1.1色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18,1.7μm,2.1mm×50mm，或性能相当者。7.3.1.1.2柱温：35℃。7.3.1.1.3流动相：A为水；B为乙腈，梯度洗脱程序见表1。7.3.1.1.4进样量：5μL。DBS45/054—20184表1梯度洗脱程序时间（min）流速（mL/min）A(%)B(%)00.350500.50.350503.00.310903.90.310904.00.350505.00.350507.3.1.2质谱条件7.3.1.2.1ESI离子源，负离子模式。7.3.1.2.2多反应监测（MRM）扫描。7.3.1.2.3毛细管电压（Capillary）：-3.4kV。7.3.1.2.4源温度（SourceTemperature）：150℃。7.3.1.2.5脱溶剂气温度（DesolvationTemperature）：500℃。7.3.1.2.6脱溶剂气流（DesolvationGasFlow）：800L/Hr。7.3.1.2.7锥孔气流（ConeGasFlow）：50L/Hr。7.3.1.2.8四种化合物的监测离子对参数见表2。表2氟虫腈及其代谢物的监测离子对参数分析物母离子（m/z）子离子（m/z）锥孔电压(V)碰撞能(eV)保留时间(min)氟虫腈435.0330.0*30122.64氟虫腈435.0250.030262.64氟虫腈砜451.1282.1*30253.05氟虫腈砜451.1415.130143.05氟虫腈亚砜419.1262.1*30273.06氟虫腈亚砜419.1383.130103.06氟甲腈387.2351.1*30102.83氟甲腈387.2282.130302.83氟甲腈387.2331.030262.83注：*，表示定量子离子；387.2/331.0为氟甲腈备用离子对。7.3.2色谱测定与确证根据试样中氟虫腈及其代谢物的含量情况，选择浓度相近的标准工作液进行色谱分析，以峰面积进行外标曲线定量。在上述色谱条件下，氟虫腈及其代谢物的参考保留时间见表2。标准溶液的多反应监测（MRM）离子色谱图参见附录A。按照上述条件测定样品和标准工作液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准工作液的时间偏差在±2.5%之内；定性离子对的相对丰度与相当浓度的标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。DBS45/054—20185表3定性时相对离子丰度最大容许误差相对丰度（基峰）50%20%至50%10%至20%≤10%允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%7.4空白实验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。8结果计算和表述8.1结果计算按色谱数据处理软件中的外标曲线定量或按式（1）计算试样中氟虫腈及其代谢物的残留量。10001mAsVfAcX···············（1）式中：X——试样中目标化合物的残留量，单位为μg/kg；A——样液中目标化合物的峰面积；V——加入提取液体积，单位为mL；f——稀释倍数，f=2；As——标准工作液中目标化合物的峰面积；c——标准工作液中目标化合物的浓度，单位为ng/mL；m——称样量，单位为g。注：计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。8.2结果表述依据GB2763对氟虫腈残留物的定义，应计算氟虫腈总量作为样品中氟虫腈的残留量。氟虫腈总量=氟虫腈含量+氟虫腈砜含量+氟虫腈亚砜含量+氟甲腈含量9精密度本标准的精密度数据是按照GB/T27404-2008规定确定的，以相对标准偏差（RSD）表示，参见附录B。10测定低限和回收率10.1定量限本方法氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈在蔬菜、水果中的定量限均为0.50μg/kg；在粮谷类、肉类、内脏、鲜蛋中的定量限均为1.0μg/kg；在茶叶中的定量限均为2.5μg/kg。10.2回收率氟虫腈及其代谢物在不同试样及不同添加浓度加标试验中的回收率参见附录B。DBS45/054—20186AA附录A（资料性附录）标准溶液的多反应监测（MRM）离子色谱图图A.1氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜、氟甲腈标准溶液的多反应监测（MRM）离子色谱图DBS45/054—20187B附录B（资料性附录）氟虫腈及其代谢物的加标回收率和相对标准偏差表B.1不同添加浓度氟虫腈的加标回收率和相对标准偏差（n=6）样品名称0.5a/1b/2.5cμg/kg2a/4b/10cμg/kg10a/20b/50cμg/kgRec/%RSD/%Rec/%RSD/%Rec/%RSD/%绿茶c85.14.181.24.084.02.7大米b112.62.591.76.698.34.1鸡蛋b95.24.794.74.2102.31.9尖椒a88.96.588.013.685.96.8芒果a109.23.595.77.7101.74.1牛肉b86.52.880.02.887.05.5苹果a100.75.896.51.597.32.7虾b75.56.684.64.888.33.4猪肝b89.64.584.82.584.52.2注：不同类别样品的加标水平不同，分别以a,b,c进行区别。表B.2不同添加浓度氟虫腈砜的加标回收率和相对标准偏差（n=6）样品名称0.5a/1b/2.5cμg/kg2a/4b/10cμg/kg10a/20b/50cμg/kgRec/%RSD/%Rec/%RSD/%Rec/%RSD/%绿茶c107.33.3103.93.499.55.0大米b113.63.3104.20.8101.61.6鸡蛋b100.83.789.54.094.04.4尖椒a108.73.1109.22.9109.12.7芒果a112.13.3107.44.911