DBS61 0008-2015 食品安全地方标准 植物提取物中苯并（a）芘的测定 液相色谱-荧光检测

DBS61陕西省食品安全地方标准DBS61/0008—2015植物提取物中苯并（a）芘的测定液相色谱-荧光检测法DeterminationofBenzo(a)pyreneinPlantExtractsbyLiquidChromatographywithFluorescenceDetection2015-02-28发布2015-03-28实施陕西省卫生和计划生育委员会发布DBS61/0008—20151前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准的附录A、附录B均为资料性附录。本标准由陕西省卫生和计划生育委员会发布并归口。本标准由中华人民共和国陕西出入境检验检验局提出并负责起草。本标准主要起草人：孔祥虹、何强、刘开、张璐、邹阳、李建华、李莹、付骋宇、吴双民。本标准为首次发布。DBS61/0008—20152植物提取物中苯并（a）芘的测定液相色谱-荧光检测法1范围本标准规定了植物提取物中苯并（a）芘残留量的液相色谱-荧光检测法。本标准适用于生姜、黄芪、甘草、海带、小白菊、枸杞、荨麻、贯叶连翘、蔓越橘植物提取物（粉状）中苯并（a）芘残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理试样经正己烷提取，用硅胶固相萃取柱和聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱净化，液相色谱-荧光检测法进行测定，外标法定量。4试剂与材料警告：苯并（a）芘是一种已知的强致癌物质，应注意危险品操作规则。除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的一级水。4.1正己烷：色谱纯。4.2二氯甲烷：色谱纯。4.3乙腈；色谱纯。4.4正己烷-二氯甲烷（3+1，V/V）：量取300mL正己烷与100mL二氯甲烷混合均匀。4.5乙腈-水（95+5，V/V）：量取950mL乙腈与50mL水混合均匀。4.6苯并（a）芘标准物质：（Benzo(a)pyrene，C20H12，CAS:50-32-8）：纯度≥99%。4.7苯并（a）芘标准储备溶液（1mg/mL）：准确称取苯并（a）芘标准物质10mg，用乙腈定容至10mL，摇匀，0℃～4℃避光保存，有效期1年。4.8苯并（a）芘标准中间溶液（1.0g/mL）：准确量取1mg/mL苯并（a）芘标准储备液0.025mL，于25mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容于25mL，0℃～4℃避光保存，有效期6个月。DBS61/0008—201534.9苯并（a）芘标准使用溶液：将苯并（a）芘标准中间溶液根据需要用乙腈逐级稀释，配制成适当浓度的标准使用溶液。4.10硅胶固相萃取柱（1g，6mL）：使用前依次用5mL二氯甲烷、10mL正己烷活化，保持柱体湿润。4.11聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱（BondElutENV柱，500mg，6mL）：使用前依次用5mL二氯甲烷、10mL正己烷活化，保持柱体湿润。4.12微孔滤膜：0.22m，有机系。5仪器与设备5.1液相色谱仪：配有荧光检测器。5.2分析天平：感量0.01mg。5.3天平：感量0.01g。5.4涡旋混匀器。5.5超声波清洗器。5.6离心机：5000r/min。5.7固相萃取装置。5.8旋转蒸发器。5.9滤膜：0.22m。6试样制备与保存取有代表性样品200g，混合均匀，装入洁净容器中，密闭并标明标记，常温保存。7测定步骤7.1提取准确称取试样1g（精确至0.01g），加入10mL正己烷，涡旋混匀，超声提取30min，4000r/min离心5min，取正己烷层溶液于100mL梨形瓶中，用10mL正己烷重复提取2次，合并正己烷提取液，于40℃减压浓缩至约5mL，待净化。7.2净化硅胶固相萃取柱串接在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱上方，取待净化样品提取溶液上样，用约5mL正己烷洗涤梨形瓶，洗涤液合并上样，再用15mL正己烷淋洗固相萃取柱，待淋洗液全部通过固相萃取柱后，弃去硅胶固相萃取柱，用5mL正己烷-二氯甲烷溶DBS61/0008—20154液（4.4）洗脱聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱，整个净化过程保持流速2~3mL/min，收集洗脱液，于40℃减压浓缩至干，准确加入1mL乙腈溶解定容，过微孔（5.9）滤膜，供液相色谱检测。7.3标准曲线的制备配制浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的苯并（a）芘系列标准溶液，按规定的液相色谱条件进样检测，以苯并（a）芘标准浓度（X，ng/mL）为横坐标，以苯并（a）芘响应值（Y）为纵坐标作图，用最小二乘法进行线性回归，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。7.4测定7.4.1液相色谱条件色谱柱：多环芳烃专用液相色谱柱，粒径5m，250mm×4.6mm（内径），或相当者；流动相：乙腈-水（95+5，V/V）等度洗脱；柱温：35ºC；激发波长：384nm；发射波长：406nm；流速：1.5mL/min；进样量：10L。7.4.2测定法根据样液中苯并（a）芘含量情况，选定与样液浓度相近的标准使用溶液，标准使用溶液和样液中苯并（a）芘的响应值均应在仪器检测的线性范围内，如果样液中苯并（a）芘含量超出检测的线性范围，则稀释后再进样。以保留时间定性，外标法定量，在7.4.1给定的液相色谱条件下，苯并（a）芘标准溶液的液相色谱图参见附录A中图A.1。7.5空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。8结果计算和表达8.1结果计算和表达用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中苯并（a）芘含量mAVcAXss…………………………………………（1）式中：X—试样中苯并（a）芘的含量，单位为微克每千克，g/kg；A—样液中苯并（a）芘的色谱峰面积；sc—标准工作液中苯并（a）芘的浓度，单位为纳克每毫升，ng/mL；DBS61/0008—20155V—样液最终定容体积，单位为毫升，mL；sA—标准工作液中苯并（a）芘的色谱峰面积；m—试样质量，单位为克，g。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9定量限、回收率和精密度9.1定量限本方法苯并芘的定量限为1.0g/kg。9.2回收率生姜、黄芪、甘草、海带、小白菊、枸杞、荨麻、贯叶连翘、蔓越橘植物提取物（粉状）中苯并（a）芘的回收率在71.0～118.0%之间，添加水平及回收率数据参见附录B中表B.1。9.3精密度本方法的相对标准偏差≤10%。DBS61/0008—20156AA附录A（资料性附录）图A.1苯并（a）芘标准溶液的液相色谱图（2.0ng/mL）6.698EU-0.200.000.200.400.600.801.001.201.40分钟0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.00DBS61/0008—20157BB附录B（资料性附录）苯并（a）芘残留量检测的添加回收率数据表B.1植物提取物中苯并（a）芘残留的添加回收率试验数据（n=6）样品加标水平（g/kg）回收率范围（%）样品加标水平（g/kg）回收率范围（%）生姜提取物1.082.0~100.0小白菊提取物1.075.0~107.02.080.5~1072.082.0~107.55.076.4~92.85.089.0~110.2黄芪提取物1.071.0~118.0荨麻提取物1.073.0~105.02.080.0~103.02.086.5~106.05.085.0~100.65.074.2~91.0甘草提取物1.074.0~100.0贯叶连翘取物2.071.0~104.52.087.02~96.55.077.8~91.05.085.2~106.410.086.4~106.4海带提取物1.076.0~110.0枸杞提取物1.073.0~106.02.079.5~106.52.089.0~105.55.089.4~102.85.097.8~117.8_________________________________