DB34T 1158-2010 桑蚕种质量检验规程

ICS59.060.10W41DB34安徽省地方标准DB34/T1158—2010桑蚕种质量检验规程2010-05-17发布2010-06-17实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1158—2010I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省农业委员会提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省蚕桑服务站。本标准主要起草人：张虹、孔琦、陈斌、李庆宝、孙怀珍、汪剑霞。本标准所替代标准的历次版本发布情况为：DB34/056-1991、DB34/T056-1998。DB34/T1158—20101桑蚕种质量检验规程1范围本标准规定了桑蚕种检验项目、检验规则、抽样时间与样本保存、检验方法和数字修约等。本标准适用于桑蚕原种和一代杂交种的质量检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其昀新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。DB34/T560桑蚕三级原种生产技术操作规程DB34/T561桑蚕一代杂交种生产技术操作规程DB34/907桑蚕种3检验项目3.1原种检验3.1.1单蛾良卵数3.1.2良卵率3.1.3张种一日收蚁量3.1.4纯度3.1.5病蛾率3.1.6病卵率3.1.7折净率3.1.8包装标识3.2一代杂交种检验3.2.1盒种良卵数3.2.2良卵率3.2.3实用孵化率3.2.4病蛾率3.2.5病卵率3.2.6杂交率3.2.7包装标识4检验规则以制种批为单位，抽样检验。DB34/T1158—201025抽样时间与样本保存越年种在入库后抽样，浸酸种在浸酸整理后抽样。样本保存条件与原制种批相同。6检验方法6.1原种检验6.1.1抽样数量每批随机抽10张，检验外观及折净率后，再从中随机抽两张，拼接成两张样本，进行卵质检验。6.1.2检验流程检验流程见图1。1－7号卵圈单蛾良卵数检验、良卵率检验制种批正样1张1－14号卵圈一日收蚁量检验抽样10张1－14号卵圈纯度检验副样1张标识、折净率15－28号卵圈病卵率检验图1原种检验流程图6.1.3标识、折净率检验包装标识是否符合DB34/907规定。统计10张样本底板上补贴的卵圈数，计算折净率。折净率（％）＝调查卵圈总数补贴卵圈总数调查卵圈总数−×1006.1.4单蛾良卵数、良卵率取样品1－7号卵圈，逐圈调查良卵数和不良卵数，计算出单蛾良卵数及良卵率。单蛾良卵数=调查卵圈总数调查卵圈良卵总数良卵率（％）=不良卵总数调查卵圈良卵总数调查卵圈良卵总数+×100DB34/T1158—201036.1.5张种一日收蚁量取拼接后的一张蚕种，按DB34/T560进行简化催青，转青以后，用收蚁绵纸将1－14蛾圈包种，苗蚁第二天收蚁，称取蚁量。日收蚁量张种−＝214×蛾圈收蚁量6.1.6纯度从1－14蛾圈的孵化蚁蚕中混合称取0.5克蚁蚕进行饲养，根据幼虫或茧等形态性状，调查不符合该品种固有性状的个体数，计算出纯度。纯度（％）=调查总头数混杂头数调查总头数−×1006.1.7病卵率蚕种转青后取样品的15－28卵圈，每个卵圈装入一个小纸袋，将袋口封牢，防止孵化蚁蚕逸出，孵化蚁蚕在高温多湿中自然死亡（4天左右）后进行检疫。每个卵圈孵化的蚁蚕作为一个检验集团。6.1.8病蛾率原种家蚕母蛾微粒子病检验采取集团检验，每盒（28孔蛾）为一个检验集团，若缺蛾不予检验并对应淘汰该张蚕种，检验规程参照附录A（标准的附录）病蛾率（％）=制种批母蛾总数带微粒子孢子集团数×1006.2一代杂交种检验6.2.1一代杂交种检验流程一代杂交种检验流程见图2。良卵数检验制种批良卵率检验正样1盒实用孵化率检验抽样10盒称量、混样抽2盒杂交率检验副样1盒包装标识病卵率检验图2一代杂交种检验流程图6.2.2包装、标识DB34/T1158—20104从制种批中，随机抽取10盒蚕种，按DB34/907规定检验包装、标识。6.2.3盒种良卵数、良卵率将10盒样本蚕种逐一称量，计算平均每盒蚕种的装盒量；将10盒蚕种充分混合，从中称取2盒，1盒检验，1盒备检；从混合后的样中称取2份1g小样进行点数，统计良卵数、不良卵数，取平均数。盒种良卵数（粒）＝每克良卵粒数盒卵重量×良卵率（％）=不良卵数调查样卵良卵数调查样卵良卵数+×1006.2.4实用孵化率取点数后的2份1克卵的良卵小样，按DB34/T561进行简化催青，昀大两日孵化后，将蚁蚕引去，烘杀未出卵，统计未孵化卵粒数。昀大两日孵化头数＝未孵化卵数克卵良卵数−实用孵化率（％）=克卵良卵数昀大两日孵化头数×1006.2.5杂交率从样品卵中称取0.5克进行催青、饲养，根据幼虫或茧等形态性状，调查不符合该品种固有性状的个体数，计算出杂交率。杂交率（％）=调查总头数纯种头数调查总头数−×1006.2.6病蛾率病蛾率检验见附录A。6.2.7病卵率病卵率检验见附录B。7数字修约卵粒数取整数，其余按数字修约规则，保留两位小数。DB34/T1158—20105AA附录A（规范性附录）桑蚕母蛾微粒子病集团检验桑蚕种母蛾微粒子病实行集团检验，原种以上母蛾全检，一代杂交种抽样检验，抽样方案与允许病蛾集团数，按表A.1执行。A.1抽样袋蛾以制种批（段）为单位，三级原种全部对号袋蛾，一代杂交种随机抽样袋蛾，袋蛾数量见表1，每批（段）的首末号蚕种必须袋蛾。蛾盒上注明场名、品种、批次、蛾盒号等。A.2母蛾干燥处理将母蛾盒分批收集，顺号摊放于室内通风干燥处，5天后烘蛾，烘蛾温度不超过70℃，母蛾干燥程度以蛾头胸干燥、腹部稍软为宜。母蛾干燥后，及时整理，顺号捆扎，妥善保管，按要求将母蛾及送样清单送指定的检验单位检疫。A.3母蛾验收检验室须对送检样本及送样单进行逐一查验，凡样本不足以及烘焦、发霉、腐烂等不符合要求的，检验单位应拒收，不予检验。A.4检验流程抽样编号→拆盒装蛾→注液研磨→过滤→离心沉淀→点板制片→镜检→清洗消毒→记载结果。A.4.1抽样编号按表A.1规定，按顺序隔号抽取第一样本进行编号，第一样本须包含首、末号蛾盒。A.4.2拆盒装蛾拆开蛾盒，每盒母蛾装入1个磨蛾杯，4管磨蛾杯为一组，号票随蛾液传递。A.4.3注液研磨在磨蛾杯中注入0.5％碳酸钠溶液70ml左右，用转速7000r/min的集团磨蛾机研磨，研磨时间以磨碎为准，一般为90s左右。A.4.4过滤将磨好的蛾液对号倒入有过滤材料的漏斗中过滤，过滤后的蛾液流入离心管，要求离心管液面保持一致，对称离心。DB34/T1158—20106A.4.5离心沉淀将装有过滤液的离心管对号放入离心机，启动开关，离心时间2.5min(3000r/min)，倒去上层清液，保留沉淀物1ml左右。A.4.6点板制片将点棒插入离心管，充分搅动后点板，每个离心管分别制作2个样片，附上号票送镜检台。A.4.7镜检两人一组，用600倍以上的显微镜进行对检，每个样片镜检不少于5个视野，原种需大于5个视野，确定微粒子孢子须两人同时发现或共同认可，并在号票上注明结果。A.4.8清洗消毒按顺序清洗过滤漏斗、离心管、点棒、载玻片、盖玻片等。如检出微粒子孢子，需用1％有效氯漂白粉液对所有污染用具浸泡1h,载玻片、盖玻片用比重1.15，浓度30％的盐酸浸泡0.5h,消毒后，用清水冲洗干净。A.4.9结果处理将检验结果填入原始记录表，根据表1判定合格与否，向送检单位签发蚕种母蛾微粒子病检验结果通知单，并核发检疫合格证。表A.1桑蚕一代杂交种母蛾微粒子病检验抽样规定及合格标准表制种批允许病蛾集团数（个）毛种数（张）母蛾数（蛾）第一样本n1(盒)第二样本n2(盒)抽样率（％）第一样本C1第二样本C225以下1000以下全部－100.0026～501001～2000全部－100.0251～752001～3000323296.00476～1003001～4000434386.016101～1504001～6000484872.017151～2506001～10000616161.029251～50010001～20000676740.0210501～100020001～40000747422.22111001～150040001～60000818112.23121501～200060001～8000085858.53132001～250080001～10000089896.73142501～3000100001～12000094945.64153001～3500120001～14000098984.94163501～4000140001～1600001021024.44174001～4500160001～1800001071074.05184501～5000180001～2000001111113.75195001～5500200001～2200001151153.55205501～6000220001～2400001201203.3621DB34/T1158—20107表A.1（续）制种批允许病蛾集团数（个）毛种数（张）母蛾数（蛾）第一样本n1(盒)第二样本n2(盒)抽样率（％）第一样本C1第二样本C26001～6500240001～2600001281283.27236501～7000260001～2800001401403.28267001～7500280001～3000001481483.29287501～8000300001～3200001571573.110308001～8500320001～3400001651653.111328501～9000340001～3600001741743.112349001～9500360001～3800001851853.113379501～10000380001～4000001931933.11439注1：毛种按40蛾折合一张，每只蛾盒装足30蛾。注2：先检第一样本，检出的病蛾数≤C1为合格；＞C2为不合格；＞C1而≤C2时再检第二样本，第一样本和第二样本合计检出的病蛾集团数≤C2为合格，＞C2为不合格。注3：本表以病蛾率不超过0.5％为依据，用统计学原理设计而成，信赖度达98.5％以上。DB34/T1158—20108BB附录B（规范性附录）桑蚕一代杂交种成品微粒子病集团检验B.1抽样分样在一个制种批的5点，随机抽取7克蚕卵，充分混合后，分装于7个纸袋，每袋1克，在袋外密码编号。B.2催青孵化将样卵在高温高湿（29℃、相对湿度85％）环境中催青，至完全孵化，待蚁蚕自然死亡（约4天）后进行检验。B.3检验流程B.3.1分装蚁蚕→注液研磨→点板制片→镜检→清洗消毒→记载结果B.3.2根据制种批数量按表1规定，确定第一样本数量。将每袋蚁蚕均等分倒入17个乳钵孔中，每孔约100头蚁蚕为一个检验集团。B.3.3在每个乳钵孔中加入4滴2％氢氧化钾溶液进行研磨，B.3.4每个检验集团制作两个镜检标本，分送两人对检。B.3.5用600倍以上显微镜两人对检，每个标本观察视野在5个以上，发现微粒子孢子需对检双方共同认可，方可确定,并在号票上注明。B.3.6按顺序清洗乳钵、乳棒、载玻片、盖玻片等。如检出微粒子孢子，需用1％有效氯漂白粉液对乳钵、乳棒浸泡1h,载玻片、盖玻片用比重1.15，浓度30％的盐酸浸泡0.5h,消毒后，用清水冲洗干净。B.3.7将检验结果填入原始记录表，根据表B.1判定合格与否，向送检单位签发蚕种成品卵微粒子病检验结果通知单。B.4结果判断B.4.1第一样本检验，未发现微粒子孢子为合格，如检出病卵集团数达到表B.1不合格判断规定标准，则该批判为不合格。B.4.2如第一样本检出的病卵集团数未达到表B.1不合格判断规定标准，则需检第二样本，第一、第二样本检出病卵集团数之和未达到表B.1不合格判断规定标准者，则判定合格，达到者为不合格。DB34/T1158—20109表B.1桑蚕一代杂交种成品卵微粒子病检验抽样规定与不合格判定规则抽检蚕卵集团数信赖度（％）批蚕种数量（盒）第一样本第二样本不合格判定标准（病卵集团数）第一检第二检5