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ICS65.120B46DB12天津市地方标准DB12/T847—2018饲料中总糖的测定分光光度法Animalfeedingstuffsdeterminationoftotalsugars—Polarimetricmethod2018-12-26发布2019-02-01实施天津市市场监督管理委员会发布DB12/T847—2018I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业科学院提出并归口。本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：张强、陈秋生、王利宾、刘烨潼、殷萍、孟兆芳、张玺。DB12/T847—20181饲料中总糖的测定分光光度法1范围本标准规定了饲料中总糖含量的测定方法、原理、试剂和材料、仪器与设备、分析步骤、结果计算与精密度。本标准适用于饲料及其原料中总糖含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3原理饲料中水溶性糖和水不溶性多糖经盐酸溶液水解后转化成还原糖，水解物在硫酸的作用下，生成物与芳香族酚类化合物缩合生成黄色溶液，在490nm处有最大吸收，在一定范围内其吸光度值同糖的浓度呈正比，以此测定糖的含量。4试剂和材料4.1实验用水指标满足GB/T6682一级标准。4.2浓盐酸，ρ=1.18g/mL。4.3浓硫酸，ρ=1.84g/mL。4.4苯酚溶液（50g/L），称取5g苯酚，用水定容至100mL，摇匀后避光保存。4.5葡萄糖标准溶液（1g/L），将葡萄糖于105℃恒温烘干至恒重，准确称取1.0000g，用水溶解后加入5mL盐酸，并以水定容至1000ml。5仪器与设备5.1可见分光光度计。5.2电子天平，感量0.1mg。5.3电子天平，感量0.01g。5.4恒温水浴锅。5.5电热鼓风干燥箱。5.6样品粉碎设备。5.7实验室常用玻璃器具。DB12/T847—201826分析步骤6.1采样与试样制备按照GB/T20195的规定执行。6.2试样前处理称取试样约1g（精确至0.01g）于250ml锥形瓶中，加入25ml水，10ml盐酸，振荡摇匀至形成均匀的悬浊液，装上冷凝回流装置，在沸水浴中水解1h，冷却之后过滤，并洗涤滤渣，合并滤液及洗液，最后定容至250ml，摇匀待用，此为待测溶液。6.3标准系列溶液的制备分取0mL、1mL、2mL、4mL、6mL、10mL葡萄糖标准溶液（4.4）分别置于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此曲线浓度分别为0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、120μg/mL、200μg/mL。准确吸取上述标准溶液各1mL（相当于葡萄糖含量分别为0μg、20μg、40μg、80μg、120μg、200μg），加入10mL比色管中，分别加入苯酚溶液（4.3）各1mL，加入浓硫酸（4.2）5mL，反应液静止放置10min后，涡旋摇匀，冷却至室温，选择波长为490nm，以空白溶液调零，测定吸光度。以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。6.4测定准确吸取待测溶液（6.2）1ml于10mL比色管中，按6.3步骤自“加入苯酚溶液各1ml……”起进行操作，至冷却至室温后测定。7结果计算试样中总糖的含量按⑴式进行计算：601101000aVXmV.................................(1)式中：X——试样中总糖的含量，单位为克每千克，g/kg；a——从标准曲线上查得葡萄糖含量，单位为微克，µg；V0——试样经前处理后定容的体积，单位为毫升，mL；V1——测定时吸取滤液的体积，单位为毫升，mL；m——试样质量，单位为克，g。注：计算结果以葡萄糖计，表示到小数点后一位。8精密度应符合以下要求：——总糖含量≤50g/kg时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的10％；——总糖含量50g/kg时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值DB12/T847—20183的5％。_________________________________