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ICS65.120B46DB13河北省地方标准DB13/T1781—2013饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测毛细管电泳法DeterminationofsomekindsofsedativesinfeedsHighperformancecapillaryelectrophoresis-HPCE2013-09-05发布2013-09-30实施河北省质量技术监督局河北省标准化管理委员会发布DB13/T1781—2013I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准主要起草单位：河北省产品质量监督检验院本标准主要起草人：罗强、王涛、韩光、吕国强、张红玲、田宝勇、白新方DB13/T1781—20131饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测毛细管电泳法1范围本标准规定了饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测方法。本标准适用于饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的毛细管电泳检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB603-2002化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理样品经乙腈振荡提取后，试液经毛细管电泳，用紫外检测器或二极管阵列检测器在波长257nm处检测，外标法计算各组分含量。4仪器设备仪器设备包括：a)分析天平感量为0.0001gb)毛细管电泳仪，配有二极管阵列检测器或紫外检测器c)超纯水机d)旋涡混合器e)恒温水浴锅f)电动离心沉淀器g)超声波清洗器5试剂和溶液除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯试剂，水符合GB/T6682中三级用水规定，电泳用水符合GB/T6682中一级水规定。6采样DB13/T1781—20132按照GB/T14699.1的规定执行7试样制备按照GB/T20195制备试样，磨碎，全部通过2.8mm孔筛，装入密闭容器中，避光低温保存备用。8试样溶液的制备称取磨碎的饲料2.0000g于离心管中，加30.0mL乙腈超声提取30min，3000r离心5min，取上层清液蒸干，然后用4.0mL2%的冰醋酸溶液溶解，混匀，加入2.0mL正己烷，涡动30s～60s，取上层清液，0.45um过滤膜过滤，蒸干，加电泳缓冲液定容至1.00ml。9检验方法9.1电泳条件柱长：37cm；柱温：25℃；工作电压：18kV；检测波长为257nm。缓冲液体系的pH值为8.60。缓冲液体系为44.8mL的磷酸氢二钠，5.2mL的磷酸二氢钠，SDS为0.4325g，甲醇为7.5mL，加入乙腈25μL。且每次运行前，都用0.1mol/L的盐酸冲洗5min，然后用二次蒸馏水冲洗2min，然后用0.1mol/L的氢氧化钠冲洗5min，再用二次蒸馏水冲洗10min，最后用运行缓冲液冲洗5min。每两次进样中间用缓冲液冲洗2min。9.2定量测定按照上述电泳条件，做各标准溶液的标准曲线和样品溶液，根据外标法定量，见公式（1）。试样中各组分含量X%＝（P1×V×ρ）/(P×m×1000)×100…………………………（1）式中：P1——各组分对应的峰面积V——试样溶液的总体积，mLρ——各组分对应的标准溶液浓度，mg/mLP——各组分对应的标准溶液峰面积M——试样质量，gDB13/T1781—20133图1四种镇静剂药物毛细管电泳图谱出峰顺序分别为：t苯巴比妥=3.54min；t艾司唑仑=7.31min；t地西泮=8.17min；t盐酸氯丙嗪=10.04min。9.3平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字，标准偏差≦5%。_________________________________