DB13T 2954-2019 畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定  高效液相色谱法

ICS65.020B40DB13河北省地方标准DB13/T2954—2019畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定高效液相色谱法2019-03-25发布2019-04-25实施河北省市场监督管理局发布DB13/T2954—2019I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由衡水市质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北美创检测科技有限公司、衡水市食品药品检验检测中心、衡水市农业农村局。本标准主要起草人：耿春辉、崔婧、梁勃、段培姿、王晖、王哲、王权、路明、高晶、刘志祥、陈宁。DB13/T2954—20191畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定高效液相色谱法警告―使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。1范围本标准规定了畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇高效液相色谱测定方法的原理、试剂、仪器和设备、检测步骤、结果计算、准确度和精密度。本标准适用于饲料原料、配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。本标准的方法检出限为10μg/kg，定量限为20μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇用水和乙腈的混合溶液提取,经层析柱净化,浓缩、定容和过滤后用高效液相色谱-紫外检测器测定,外标法定量。4试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇(CH3OH，CAS号：67-56-1)，色谱纯。4.2乙腈(CH3CN，CAS号：75-05-8)，色谱纯。4.3正己烷(C6H14，CAS号：110-54-3)，色谱纯。4.4活性炭，120～400目。4.5酸性氧化铝，40～80目。4.6层析柱,内径10mm，长度150mm，砂芯有活塞。4.7脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品(C15H20O6，CAS号：51481-10-8)，纯度≥99%。DB13/T2954—201924.8脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备液（1.0mg/mL），准确称取脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品(4.7)10.0mg于50mL烧杯中，用乙腈溶解，转移到10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容。避光放置于4℃冰箱中，有效期为6个月。4.9脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准中间液（100μg/mL），准确吸取10.0mL脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备溶液(4.8)于100mL容量瓶中，用乙腈定容。避光放置于4℃冰箱中，有效期为1个月。4.10脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液，分别准确吸取脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准中间液(4.9)适量，用水配制成1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL系列标准工作液。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。5.2粉碎机。5.3涡旋混合器。5.4振荡器。5.5离心机，转速不低于5000r/min。5.6超声波清洗机。5.7旋转蒸发仪。5.8天平，感量分别为0.1g和0.01mg。6检测步骤6.1样品饲料原料或配合饲料。6.2试样制备按GB/T14699.1采集有代表性的样品，按GB/T20195进行试样的制备，粉碎，通过0.85mm试验筛，装入密封的玻璃容器中，低温保存备用。6.3试样提取称取试样25g（精确至0.01g）置于250mL具塞锥形瓶中，准确加入100mL乙腈-水溶液（84+16），置于振荡器振荡30min，5000r/min离心5min，收集上清液于干净的容器中备用，取10.0mL上清液置于50mL离心管中，加10.0ml乙腈饱和正己烷溶液，涡旋混合2min，5000r/min离心2min，弃去正己烷层后，待净化。6.4试样净化6.4.1层析柱制备：在层析柱底部加入适量脱脂棉，加入6ml乙腈+水溶液。按下列顺序湿法装柱：DB13/T2954—20193a)酸性氧化铝1g；b)活性炭0.5g。c)脱脂棉少量注：如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。6.4.2过柱、洗脱，当柱内溶剂液面降至上层脱脂棉与活性炭界面时，加入提取液，控制流速为每秒1～2滴，待溶液全部过柱后，用5mL乙腈淋洗柱子，收集全部流出液于鸡心瓶中，于旋转蒸发仪减压浓缩至干，加1mL水溶解残留物，涡旋混匀1min，过0.22μm微孔滤膜于进样瓶，待测。6.5仪器条件高效液相色谱参考条件：a)色谱柱，C18柱，250mm×4.6mm，粒径5μm；b)流动相，甲醇+乙腈+水（10+10+80），用前过0.45μm滤膜，脱气；c)流速，1mL/min；d)检测波长，218nm；e)柱温，40℃；f)进样量，50μL。注：当存在干扰峰或需要辅助定性时，可以采用乙腈+水=8+92为流动相来测定。6.6定量测定以脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，将系列标准溶液由低到高浓度依次进样检测，得到标准工作曲线。试样液中待测物的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应适当稀释处理后再进样分析。7结果计算所得实验数据按公式（1）计算。=m10Vƒ……………………………………………………(1)式中：ω——供试试料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；ρ——试样溶液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的浓度，单位微克每毫升（μg/mL）；V——样液最终定容体积，单位毫升（mL）；m——试样的称样量，单位为克（g）；ƒ——1000。平行测量结果用算术平均值表示，结果保留到小数点后一位。8准确度和精密度8.1重复性在重复条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过这两个测定值的算术平均值的15%。DB13/T2954—201948.2再现性在再现条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过这两个测定值的算术平均值的20%。8.3回收率本方法的回收率为80%～110%。_________________________________