DB15T 1476-2018 液相色谱-串联质谱法 测定土壤及马铃薯中9种种衣剂的残留量

ICS65.020.01B10备案号：59985-2018DB15内蒙古自治区地方标准DB15/T1476—2018液相色谱-串联质谱法测定土壤及马铃薯中9种种衣剂的残留量Detectionof9seed-coatingagentsresiduesfromseedcoatingreagentinsoilandpotatobyLC-MS-MS2018-08-15发布2018-11-15实施内蒙古自治区质量技术监督局发布DB15/T1476—2018I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。本标准由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。本标准起草人：张福金、张欣昕、姚一萍、李国银、王雪娇、尹鑫、李秀萍、崔艳、骆洪。DB15/T1476—20181液相色谱-串联质谱法测定土壤及马铃薯中9种种衣剂的残留量1范围本标准规定了土壤和马铃薯中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。本标准适用于土壤中和马铃薯中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8855新鲜水果和蔬菜的取样法NY/T52土壤水分测定法NY/T1121.1土壤检测第1部分：土壤样品的采集、处理和贮存3原理试样中种衣剂残留物经乙腈提取，用键合硅胶吸附剂固相分散剂净化后，用液相色谱-串联质谱进行测定，外标法定量。4试剂和材料4.1除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.2乙腈：色谱纯4.3甲酸：色谱纯4.4氯化钠：分析纯4.5无水硫酸镁：分析级，研磨后在500℃马弗炉内烘干，置于干燥器中保存。4.60.1%甲酸溶液（体积分数）：取0.1mL甲酸加水稀释至100mL。4.70.1%甲酸水-甲醇溶液（90+10，体积比）。4.8标准品DB15/T1476—20182噻虫嗪、多菌灵、克百威、3-羟基克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托不津标准品：纯度大于98%4.9标准溶液4.9.1标准储备液准确称取适量的噻虫嗪、多菌灵、克百威、3-羟基克百威灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津标准品，用甲醇分别配制成100mg/L的标准储备液，保存于-18℃冰箱内，可使用6个月。4.9.2混合标准储备液分别准确吸取1.00mL噻虫嗪、多菌灵、克百威、3-羟基克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津标准储备液至10mL容量瓶内，用甲醇稀释定容至刻度，配制成10mg/L的混合标准储备液，于-18℃冰箱内避光保存，可使用3个月。4.9.3基质混合标准工作液根据需要，用阴性样品基质系列稀释混合标准工作液，使用前临时配制。4.10键合硅固相萃取吸附剂：C18，15mm；PSA，0.15mm。4.11微孔过滤膜（尼龙）：13mm×0.2µm。5仪器和设备5.1高效液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.01mg和0.01g。5.3离心机：转数6000r/min以上。5.4涡旋混合器。6试样制备和保存按照NY/T1121.1中有关规定采集土壤，去杂质后充分混匀，保存在-18℃冷冻冰箱中。按照NY/T52标准要求，取新鲜土壤，105±2℃烘干冷却称重，测定土壤的水分含量（a），在计算时土壤换算至烘干的水分换算系数F（F=1-a）。按照GB/T8855标准要求，取样的马铃薯样品切碎、混匀、匀浆、密封，作为试样。将试样保存在-18℃冷冻冰箱中。7测定步骤7.1提取7.1.1马铃薯样品DB15/T1476—20183称取10g试样(精确到0.01g)于50mL离心管中，加入10.0mL乙腈（4.1），涡旋振荡0.5min，超声提取10min，再加入1g氯化钠（4.3），4g无水硫酸镁（4.4），涡旋混合1min后，以6000r/min的转速离心5min，取上层有机相净化。7.1.2土壤样品称取10g新鲜试样(精确到0.01g)于50mL离心管中，加入10.0mL乙腈（4.1）和5mL水，涡旋振荡0.5min，超声提取10min，再加入1g氯化钠（4.3），4g无水硫酸镁（4.4），涡旋混合1min后，以6000r/min的转速离心5min，取上层有机相净化。7.2净化7.2.1马铃薯样品移取提取液2.00mL于5mL离心管中，加入150mg无水硫酸镁（4.4），50mgC18（4.9），涡旋混合1min后，以6000r/min的转速离心1min。取上清液，用0.1%的甲酸水-甲醇溶液（4.6）稀释定容至5.0mL，过0.2µm微孔过滤膜，待测。7.2.2土壤样品移取提取液2.00mL于5mL离心管中，加入150mg无水硫酸镁（4.4），25mgC18（4.9），25mgPSA（4.9）。涡旋混合1min后，以6000r/min的转速离心1min。取上清液，用0.1%的甲酸水-甲醇溶液（4.6）稀释定容至5.0mL，过0.2µm微孔过滤膜，待测。7.3阴性样品提取液的制备取不含待测物的阴性马铃薯和土壤样品，按7.1和7.2步骤制备阴性样品提取液，用于配制基质混合标准工作液。7.4测定7.4.1液相色谱-质谱法测定条件具体如下:a)色谱柱：C18，100mm×2.1mm（内径），粒径，1.7µm；b)流动相：A：0.1%甲酸溶液（4.5），B：乙腈（4.1），梯度洗脱见表1；表1梯度洗脱表时间/min流速/（mL/min）A/%B/%0.000.3590102.000.3570303.000.3510905.500.3510906.500.359010c)柱温：40℃；d)进样量：1µL；e)离子源：电喷雾（ESI）；f)扫描方式：正离子扫描模式；DB15/T1476—20184g)检测方式：多反应监测（MRM）；h)电离电压：2500V；i)离子源温度：120℃；j)雾化温度：450℃；k)锥孔气流速：50L/h；l)雾化气流速：650L/h；m)待测物保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量见表2。表29种种衣剂保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量待测物名称保留时间min定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞电压V噻虫嗪2.15291.9211.0291.9131.8291.9211151230多菌灵1.41192.1132.1192.1160.1192.1160.1253015克百威3.33222.2123.1222.2165.1222.2165.12520123-oh克百威2.53238.3163.2238.3181.2238.3181.2201510灭多威1.88163.088.2163.0106.1163.088.25810吡虫啉2.61256.1175.1256.1209.2256.1209.2252020嘧菌酯3.60404.1344.1404.1372.1404.1372.1252415戊唑醇3.71308.170.1308.1124.9308.170.1202030甲霜灵3.43280.0192.0280.0220.0280.0192.0201020甲基托布津3.24343.1150.9343.1311.1343.1150.92520157.4.2定性测定在相同实验条件下进行样品测定时，如果样品中待测物质的色谱峰保留时间与标准品色谱峰保留时间相差在±2.5%以内，且样品色谱图中定性离子的相对离子丰度与浓度相近的基质标准工作液色谱图中对应的定性离子相对丰度进行比较，相对偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在该种待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差（%）相对离子丰度K5020＜K＜5010＜K＜20K≤10允许最大偏差±20±25±30±507.4.3定量测定DB15/T1476—20185在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作液（4.8.3）进行色谱分析，以峰面积为纵坐标，基质混合标准工作液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，基质混合标准工作液和试样中响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱和质谱条件下，基质混合标准工作液中的各特征离子多反应监测（MRM）色谱图参见附录A中的图A.1。7.5空白实验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6空白试验除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。8结果计算试样中待测组分的测定结果可由仪器工作软件计算，马铃薯样品中待测组分可按式（1）计算，土壤样品中待测组分可按式按式（2）计算：1000100021VVmVcX…………………………（1）式中：X―――试样中待测组分残留量，µg/kg；c―――从标准曲线得到的试样中待测组分的浓度，µg/L；V―――试样溶液定容体积，mL；V1―――试样溶液提取体积，mL；V2―――试样溶液分取体积，mL；m―――试样的质量，g；FVVmVcX1000100021……………………（2）式中：X―――试样中待测组分残留量，µg/kg；c―――从标准曲线得到的试样中待测组分的浓度，µg/L；V―――试样溶液定容体积，mL；V1―――试样溶液提取体积，mL；V2―――试样溶液分取体积，mL；m―――试样质量，g；F―――土壤水分换算系数；计算结果应扣除空白值，保留两位有效数字。9检出限、回收率和精密度9.1检出限DB15/T1476—20186本标准土壤试样中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津残留量的检出限和定量限参见附录B中的表B.1。本标准马铃薯试样中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津残留量的检出限和定量限参见附录B中的表B.2。9.2回收率在10～200µg/kg添加浓度范围内，本标准土壤试样中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津残留量的检出限和定量限参见附录C中的表C.1；本标准马铃薯试样中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津残留量的平均回收率参见附录C中的表C.2。9.3精密度在实验室内重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值10%，在实验室间再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的20%。DB15/T1476—20187AA附录A（资料性附录）9种种衣剂多反应监测（MRM）色谱图9种种衣剂多反应监测（MRM）色谱图A.1如下。1.噻虫嗪2.多菌灵3.1克百威3.23-羟基克百威4.灭多威5.吡虫啉6.嘧菌酯7.戊唑醇8.甲霜灵9.甲基托不津图A.19种种衣剂多反应监测（MRM）色谱图DB15/T1476—20188BB附录B（资料性附录）9种种衣剂检出限和定量限数据表马铃薯和土壤中9种种衣剂检出限和定量限数据表见表B.1和表B.2。表B.1马铃薯中9种种衣剂中文与英文名称、方法检出限和定量限数据序号中文名称英文名称检出限µg/kg定量限µg/kg1噻虫嗪thiamethoxam1.5152多菌灵carbendazim1.7173克百威carbofuran1.2123-羟基克百威3-carbofuran1.0104灭多威methomyl1.5155吡虫啉Imidacloprid0.505.06嘧菌酯azoxystrobin1.0107戊唑醇tebuconazole0.99.08甲霜灵metalaxyl1.4149甲基托布津thiophanate-Methyl0.505.0表B.2土壤中9种种衣剂中文