DB22T 1668-2012 人参食品中人参总皂苷的测定 分光光度法

ICS67.050X04备案号：35802-2013DB22吉林省地方标准DB22/T1668—2012人参食品中人参总皂苷的测定分光光度法DeterminationoftotalginsengsaponincomponentinGinsengfoods——Spectrophotometricmethod2012-12-17发布2013-01-01实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1668—2012I前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省卫生厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省卫生监测检验中心。本标准起草人：李青、范明、刘思洁、石矛、张博、郭金芝。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1668—20121人参食品中人参总皂苷的测定分光光度法1范围本标准规定了人参食品中人参总皂苷含量的分光光度测定方法。本标准适用于人参食品中人参总皂苷的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中的人参总皂苷经溶剂提取，层析柱净化和富集，在酸性条件下人参皂苷与香草醛发生显色反应，用分光光度法比色定量。4试剂与材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682规定的三级水要求。4.1甲醇（CH3OH）。4.2无水乙醇（CH3CH2OH）。4.3高氯酸（HClO4）。4.4冰醋酸（CH3COOH）。4.570%乙醇溶液：取70mL无水乙醇加水定容至100mL。4.6大孔吸附树脂。4.7中性氧化铝:层析用粒径为148µm～200µm。4.8人参皂苷Re标准品（C48H82O18，CAS号：257-814-6）：纯度≥98%。4.9标准储备液：准确称取人参皂苷Re标准品（4.8）10mg，精确到0.00001g，配成1mg/mL标准储备液，置4℃冰箱保存6个月。4.10标准工作液：取标准储备液溶液0µL、20µL、40µL、60µL、80µL、100µL(相当于0µg、20µg、40µg、60µg、80µg、100µg)分别置于10mL比色管中，在60℃水浴上挥干，备用。4.11香草醛溶液：取0.5g香草醛（C8H8O3）加冰醋酸溶解并定容至100mL。5仪器5.1分光光度计。5.2分析天平：感量为0.00001g。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1668—201225.3高速分散器。5.4离心机：转速≥5000r/min。5.5超声波提取仪：28kHz。5.6层析柱：装载8mL柱容积的大孔吸附树脂（4.6）和1cm中性氧化铝，最佳承载量约为50µg～100µg。5.7恒温水浴箱。6分析步骤6.1提取6.1.1固体试料6.1.1.1水溶性试料称取混合均匀试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），精确到0.001g，加水溶解，并定容至250mL。6.1.1.2非水溶性试料6.1.1.2.1普通固体试料取500g试料，粉粹并过740µm孔筛，充分混匀，称取试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），精确到0.001g，置于50mL离心管中，分别加水溶液30ml40mL、40mL、20mL，分别在高速分散器上（10000r/min）匀质2min，再以5000r/min离心5min；上清液依次转移至250mL容量瓶中，加水至刻度备用。6.1.1.2.2糖份含量高试料取500g样品，切碎后充分混匀，称取试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），精确到0.001g，置于50mL离心管中，分别加水溶液40mL、40mL、20mL，分别在高速分散器上（10000r/min）匀质2min，再以5000r/min离心5min；上清液依次转移至250mL容量瓶中，加水至刻度，取10mL提取液于125mL的分液漏斗中，加水饱和的正丁醇溶液萃取3次，每次10mL，合并正丁醇层，在沸水浴上挥干，水溶解并定容至10mL，备用。6.1.1.2.3油脂含量高试料取500g样品，切碎后充分混匀，称取试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），精确到0.001g，置于250mL具塞三角烧瓶中，分别加入100mL、50mL和50mL石油醚，在超声波提取仪中分别提取10min，弃去石油醚，残渣挥去石油醚后转移至50mL离心管中，分别加水溶液40mL、40mL、20mL，分别在高速分散器上（10000r/min）匀质2min，再以5000r/min离心5min；上清液依次转移至250mL容量瓶中，加水至刻度备用。6.1.2液体试料6.1.2.1含乙醇类的液体试料准确吸取一定体积的试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），于蒸发皿中沸水浴挥干，用水浴溶解残渣，转移至250mL容量瓶中，加水至刻度备用。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1668—201236.1.2.2非乙醇类的液体试料准确吸取一定体积的试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），于250mL容量瓶中，加水至刻度备用。6.2净化用15mL层析管，内装8mL大孔吸附树脂,加上1cm中性氧化铝。先用25mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL已处理好的试料溶液，用25mL水洗柱，弃去淋洗液，用25mL70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于10mL比色管中，置于60℃氮吹仪上吹干，备用。6.3标准工作曲线绘制向标准工作液中（4.10）准确加入香草醛溶液0.2mL，混匀，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀，60℃水浴上加热10min，取出，冰浴冷却后，加入冰乙酸定容至5.0mL，摇匀后，以1cm比色皿于560nm波长处进行比色，得出吸光度值，以浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。6.4测定在上述（6.2）试料管中，从“准确加入香草醛溶液0.2mL，混匀，（6.3）”起依法操作，由标准曲线计算出待测样液中人参皂苷的含量。6.5空白试验除不加试料外，按6.1~6.4操作步骤进行测定。7结果计算%1001000100021VmVAX..........................(1)式中：X—试料中人参皂甙含量，单位为克每100克（g/100g或g/100mL）；A—从标准曲线上计算出测定液人参皂苷的质量，单位为微克（µg）；V1—试料制备的总体积，单位为毫升（mL）；V2—测定用试料制备液体积，单位为毫升（mL）；m—试料质量或试料体积，单位为克或毫升（g或mL）。计算结果保留两位有效数字。8精密度8.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1668—201249线性范围和检出限本方法的线性范围为0µg～100.0µg，检出限为0.0075g/100g或0.0075g/100mL。______________________本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印