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ICS65.120B46备案号：40175-2014DB22吉林省地方标准DB22/T1985—2013饲料中无机砷的测定液相色谱-原子荧光光谱法Determinationofinorganicarsenicinthefeedliquidchromatography-atomicfluorescencespectrometry2013-12-18发布2013-12-31实施吉林省质量技术监督局发布DB22/T1985—2013I前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。本标准起草人：韩冰雪、吴桐、赵立群、戴欣、王宇、张爽、王岩、王潇、任明月DB22/T1985—20131饲料中无机砷的测定液相色谱-原子荧光光谱（LC-AFS）法1范围本标准规定了食品中无机砷含量测定的液相色谱-原子荧光光谱法。本标准适用于家禽、猪配合饲料，家禽、猪浓缩饲料，家禽、猪添加剂预混合饲料以及饲料原料鱼粉，肉粉，肉骨粉中无机砷含量的测定。本方法检出限为：无机砷0.02mg/kg。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理饲料中无机砷经硝酸提取后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物在酸性环境下与还原剂反应，生成气态砷化合物，以原子荧光光谱仪进行测定。按保留时间定性，外标法定量。4试剂与材料除非另有规定，本方法所使用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1磷酸二氢铵（NH4H2PO4,CAS号：7722-76-1）。4.2硼氢化钾（KBH4,CAS号：13762-51-1）。4.3氢氧化钾（KOH,CAS号：1310-58-3）。4.4硝酸（HNO3,CAS号：7697-37-2）。4.5盐酸（HCl,CAS号：7647-01-0）。4.6氨水（NH3·H2O,CAS号：1336-21-6）。4.7正己烷（CH3(CH2)4CH3,CAS号：92112-69-1）。4.8磷酸二氢铵溶液（20mmol/L）：称取2.3g磷酸二氢铵，溶于1000mL水中，以浓氨水调整pH值至8.0，经0.45μm水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30min，备用。4.9盐酸溶液（20%(v/v)）：量取200mL浓盐酸，溶于水并稀释至1000ml。4.10硝酸溶液（0.15mol/L）：量取10mL浓硝酸，溶于水并稀释至1000ml。4.11氢氧化钾溶液（100g/L）：称取10g氢氧化钾，溶于水并稀释至100ml。4.12氢氧化钾溶液（2g/L）：称取2g氢氧化钾，溶于水并稀释至1000ml。4.13硼氢化钾溶液（30g/L）：称取30g硼氢化钾，用2g/L氢氧化钾溶液溶解并定容至1000ml。当日配制使用。DB22/T1985—201324.14磷酸二氢铵溶液（1mmol/L）：量取20mmol/L磷酸二氢铵溶液50mL，纯水稀释至1000mL，以浓氨水调pH值至9.0，经0.45μm水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30min，备用。4.15购买有证的AsIII、AsV标准溶液。5仪器5.1液相色谱-原子荧光光谱联用仪（LC-AFS）：由液相色谱仪与原子荧光光谱仪组成。5.2天平：感量为1mg及0.1mg。5.3组织匀浆器。5.4高速粉碎机。5.5冷冻干燥机。5.6离心机：转速≥8000r/min。5.7pH计：精度为0.01。5.8C4净化小柱或等效柱。注：玻璃器皿使用前经（1+4）硝酸浸泡24h后，清洗、晾干后备用。6分析步骤6.1试样制备饲料样品经高速粉碎机粉碎，过100目筛。6.2提取称取1g（准确至0.01g）试样，置于10mL聚丙烯离心管中，加入10mL0.15mol/LHNO3溶液，密闭。于90℃恒温箱中热浸提2.5h，每半小时振摇1min。提取完毕，取出冷却至室温，8000r/min离心15min。取5mL上清液置于离心管中，加入5mL正己烷，振摇1min后，8000r/min离心15min，弃去上层液体。按此过程重复一次。吸取下层清液，经0.45mm有机滤膜过滤及C4小柱净化后进样。注意：C4小柱使用前需进行活化。其活化参考过程为：新柱使用前依次用10mL甲醇、15mL水通过，静置活化30min后可用。每净化完一个样品需依次以10mL甲醇、15mL水通过，完成后可立即对下一个样品进行净化。净化样品时，所通过C4小柱的液体应弃去前3mL，收集之后流出的液体进样测定。该小柱可重复使用若干次。6.3推荐仪器参考条件6.3.1液相色谱参考条件色谱柱：阴离子交换色谱柱，阴离子交换色谱保护柱。流动相组成：A：1mmol/L磷酸二氢铵溶液（pH9.0）；B：20mmol/L磷酸二氢铵溶液（pH8.0）。流动相洗脱方式：梯度洗脱（梯度洗脱程序见表3）。流动相流速：1.0mL/min；进样体积：100μL。表1流动相梯度洗脱程序时间0810202223流动相A100%100%0%0%100%100%流动相B0%0%100%100%0%0%DB22/T1985—201336.3.2原子荧光检测参考条件负高压：280V；灯电流：30mA；原子化温度：200℃；炉高：8mm；载气：氩气；载气流速：300mL/min；屏蔽气流速：400mL/min；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；载液：20%（v/v）HCl；流速4mL/min；还原剂：30g/L硼氢化钾溶液，流速4mL/min。6.4标准曲线制作配制标准系列溶液的浓度分别为0.0μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L和100μg/L。吸取标准系列溶液100μL注入液相色谱-原子荧光光谱联用仪进行分析，得到色谱图，确定个组分保留时间。以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。6.5试样溶液的测定吸取试样溶液100μL注入液相色谱-原子荧光光谱联用仪中，得到色谱图，以保留时间定性。根据标准曲线得到试样溶液中AsIII与AsV含量，AsIII与AsV含量的加和为总无机砷含量，平行测定次数不少于两次。7分析结果的表述试样中无机砷的含量按公式（1）计算：1000)(0´´-=mVCCX………………………………………（1）式中：X——样品中无机砷的含量，mg/kg；C0——经标准曲线得到的空白溶液中无机砷化合物浓度，µg/L；C——经标准曲线得到的测定溶液中无机砷化合物浓度，μg/L；V——提取液体积，mL；m——试样称样量，g；X无机砷=XAsIII+XAsV。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。ADB22/T1985—20134附录A（资料性附录）无机砷参考色谱图A.1无机砷参考色谱图见图A.1图A.1无机砷参考色谱图_________________________________